汉防己碱的提取、分离及检验(2)
汉防己(华西药学药化实验)
结果
橘红色无醚后得总碱粗品。将所得的的总碱粗品用95%乙醇23ml加热回流溶解，制成黄色 饱和溶液，趁热将其倾倒入300ml食盐水中（20g氯化钠），在水浴上稍加热到59摄 氏度促使沉淀凝聚，室温静置数分钟后，并使其逐步冷却。沉淀完全后，抽滤，得 类白色固体，即亲脂性叔胺总碱。 4.称取GF254 2g，加入0.5%CMC-Na aq 5ml 调成糊状，铺板4块并活化烘干。 5.将固体转到培养皿中置于红外灯下烘干，取芝麻大小溶于3滴95%乙醇并与汉防己甲素 标准品、汉防己乙素标准品进行薄层层析。展开剂为石油醚-乙酸乙酯-二乙胺比例 6:3:1，显色剂为改良碘化铋钾试剂。结果如下：
操作： 1. 将40g汉防己粗粉与0.5%硫酸31.5ml拌匀，发胀35min，均与装入渗漉筒中，用950ml0.5% 硫酸渗漉提取，渗漉速度为2ml/min，渗漉液为棕色液体。取渗漉液四份，每份1ml，分别加 入2滴碘化汞钾、碘化铋钾、碘化碘钾、硅钨酸试剂，反应结果如下：
沉淀试剂 现象
碘化汞钾 立即产生大量 类白色沉淀 +
思考与讨论
注意事项： 1.装置的安装要小心，不能打碎仪器 2.点样时轻点三次，每次点完用电吹风立即烘干，要求点样点扩散后不超过 2mm 3.抽滤转移残留样品时用母液而非洗涤液转移可避免因溶剂的增多而造成的损失。 洗涤样品时尽量做到洗涤溶剂少量多次，即用最少的溶剂达到最大洗涤效果。 4.重结晶后应逐步冷却静置，骤冷会使晶型不好 5.乙醚的爆炸限很宽1.85%-36.5%，闪点-45摄氏度。乙醚等易燃易爆液体应避 开明火，实验选择热源时要充分考虑这方面因素。且乙醚沸点低、挥发性强、 有麻醉性，实验过程中要尽量减少其在空气中暴露，装置气密性要求严格。 6.渗漉过程中要保持提取剂液面高于药材，使药材始终完全浸润在提取剂中，以 防药材干涸裂开，使之后加入的溶剂直接从裂缝中流走而达不到提取目的。
粉防己生物碱的提取分离和鉴别
粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。
一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。
二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。
轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。
五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。
【大学课件】实验九防己中粉防己碱的提取分离与检识
1．防己总生物碱的提取略2．防己总生物碱的精制略3．粉防己碱和防己诺林碱的分离略4．防己生物碱的检识（1）生物碱沉淀反应取粉防己碱的盐酸水溶液8 ml分置于4支试管中，分别滴加下列试剂2～3滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。
①碘化铋钾试剂②碘化汞钾试剂③碘－碘化钾试剂④硅钨酸试剂（2）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试样：自制粉防己碱乙醇溶液自制防己诺林碱乙醇溶液对照品：粉防己碱标准品乙醇溶液防己诺林碱标准品乙醇溶液展开剂：氯仿-丙酮-甲醇（6∶1∶1）氨气饱和显色剂：喷雾改良碘化铋钾试剂（五）实验说明及注意事项1．提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则当加入1％盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。
2．两相溶剂萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，以免产生乳化现象，影响分层，但萃取振摇的时间需适当延长。
且不可因怕产生乳化现象而不敢振摇或为预防乳化现象产生而减少振摇的程度和时间，从而造成萃取分离不完全。
要力求萃取完全，提尽生物碱，防止生物碱丢失过多而影响收得率。
倘若发生严重乳化现象难以分层时，可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而削弱和破坏了乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清溶液。
然后滤过，必要时可再加入适量溶剂洗涤滤纸团，滤过，合并滤液即可。
3．检查生物碱是否萃取完全的方法，通常采用薄层色谱、纸上斑点试验或生物碱沉淀反应。
取最后一次氯仿萃取液数滴，水浴上蒸去溶剂，残留物加5％盐酸溶液0.5ml溶解后，傾入试管中，加碘化铋钾试剂1～2滴，如无沉淀或无明显混浊，则表示生物碱已提取完全或基本被提取完全，否则应继续萃取。
也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄层板或滤纸片上，干燥后，喷洒改良碘化铋钾试剂，观察有无红棕色斑点出现，若无红棕色斑点，表示已萃取完全。
汉防己中实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习掌握汉防己中生物碱的提取方法。
2. 掌握生物碱的分离纯化技术。
3. 熟悉生物碱的鉴定方法。
二、实验原理汉防己是一种传统中药材，具有祛风除湿、利水消肿、镇痛消炎等功效。
其主要成分是多种生物碱，如汉防己碱、去甲基汉防己碱等。
本实验通过采用有机溶剂提取法提取汉防己中的生物碱，再利用低压柱层析和薄层层析等方法进行分离纯化，最后通过光谱分析等手段对分离得到的生物碱进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己药材、氯仿、甲醇、石油醚、硅胶、活性炭等。
2. 仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、低压柱层析仪、薄层层析仪、紫外可见分光光度计、红外光谱仪等。
四、实验步骤1. 汉防己药材的预处理将汉防己药材剪碎，用乙醇回流提取2小时，过滤，浓缩得到浸膏。
2. 生物碱的提取将浸膏用氯仿溶解，加入活性炭脱色，过滤，浓缩得到氯仿溶液。
3. 生物碱的分离将氯仿溶液用硅胶柱层析分离，依次用石油醚、氯仿-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，收集各个洗脱液。
4. 生物碱的纯化将收集到的各个洗脱液用旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
5. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：对生物碱粗品进行紫外可见光谱扫描，测定最大吸收波长。
（2）红外光谱法：对生物碱粗品进行红外光谱扫描，分析其官能团。
（3）质谱法：对生物碱粗品进行质谱分析，确定其分子量。
五、实验结果与分析1. 生物碱的提取通过索氏提取法，从汉防己药材中成功提取出生物碱。
2. 生物碱的分离采用低压柱层析法，将提取得到的生物碱进行分离，得到多个组分。
3. 生物碱的纯化通过旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。
4. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：生物碱粗品在紫外可见光谱中具有特定的吸收峰。
（2）红外光谱法：生物碱粗品在红外光谱中具有典型的生物碱官能团吸收峰。
（3）质谱法：生物碱粗品的质谱结果显示出与其分子量相符的峰。
综上所述，本实验成功从汉防己中提取、分离和鉴定了生物碱，为汉防己的药理作用研究提供了实验依据。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
汉防己提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。
2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。
3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。
二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。
本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。
2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。
（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。
（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。
（4）浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。
（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱：开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。
3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。
（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。
五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。
2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。
汉防己生物碱的提取
汉防己生物碱的提取、分离与鉴定汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。
主要是汉防己甲素和汉防已乙素。
临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。
一、目的要求通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。
1．生物碱的一般提取方法。
2．纯化单体的方法及薄层层析鉴定二、已知生物碱的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。
1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。
NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3 R=H 汉防己甲素汉防己乙素O2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。
籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同：乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃丙酮 六面粒状晶 mp134℃吡啶-甲醇 mp 121~2℃环已烷-EtocAc mp 156℃3．轮环藤酚碱（Cylanoline ）为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定
实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。
1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。
基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。
常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。
2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。
因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。
一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。
由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。
如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。
许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。
因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。
3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
汉防己碱的提取、分离及检验(2)
美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。
生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验1. 回流提取100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。
（2）拌样加样取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。
防己中生物碱的提取、分离与鉴定
防己中生物碱的提取、分离与鉴定[适用对象]——药学、药剂、环境、中药、中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业[实验学时]——24一、实验目的学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：（1）掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。
（2）熟悉生物碱的一般理化性质。
（3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。
（4）掌握回流法、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。
二、实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。
再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。
三、仪器设备（单口，双口）圆底烧瓶，冷凝管，铁架台，分液漏斗，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，层析槽，毛细管等。
四、相关知识点防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。
总生物碱含量约为1.5~2.3%，主要为粉防己碱和防己诺林碱。
1、粉防己碱（tetrandrine），又称汉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量约为1%，为无色针状结晶（乙醚），mp.217~218℃。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。
粉防己碱R=CH3防己诺林碱R=H2、防己诺林碱（fangchinoline），又称汉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量约为0.5%，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237~238℃。
溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。
五、实验步骤（一）总生物碱的提取称取粉防己粗粉150克，置1000ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400ml）。
水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣再加95%乙醇以浸没为度（约需300ml），如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤压干，药渣弃去。
汉防已实验报告
一、实验模块中草药提取与活性成分分析二、实验标题汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定三、实验日期2023年10月15日四、实验操作者张三、李四五、实验目的本研究旨在通过高效液相色谱法（HPLC）提取汉防己中的生物碱类成分，并对其含量进行测定，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供数据支持。
六、实验步骤1. 样品准备取干燥的汉防己粉末，过40目筛，准确称取2.0g，置于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待用。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱条件色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-水（梯度洗脱）流速：1.0mL/min检测波长：254nm柱温：30℃4. 样品测定取上述样品溶液，按照上述色谱条件进行测定，记录峰面积，计算汉防己生物碱含量。
七、实验环境实验在洁净、通风、避光的实验室进行，实验所用仪器包括高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平等。
八、实验过程1. 样品提取将汉防己粉末加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，过滤，得到汉防己提取液。
2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。
3. 色谱测定按照色谱条件，对样品溶液和对照品溶液进行测定，记录峰面积。
4. 结果计算根据样品溶液和对照品溶液的峰面积，计算汉防己生物碱含量。
九、实验结论1. 通过超声提取法从汉防己中成功提取出生物碱类成分。
2. 汉防己生物碱含量为0.25%，符合《中国药典》规定。
3. 本实验方法简单、快速、准确，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供了有力支持。
十、后记或附录1. 参考文献列表[1] 张三，李四. 汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定[J]. 中国中药杂志，2023，48（10）：2041-2045.[2] 王五，赵六. 汉防己化学成分及药理作用研究进展[J]. 中草药，2023，54（2）：293-298.2. 实验数据表表1 汉防己生物碱含量测定结果样品编号 | 生物碱含量（%）--------|----------------1 | 0.252 | 0.243 | 0.26平均含量 | 0.25注：实验重复3次，取平均值作为最终结果。
粉防己生物碱的提取分离实验报告
粉防己生物碱的提取分离实验报告一、实验目的本实验旨在从粉防己中提取和分离生物碱成分，掌握相关的实验操作技能，了解生物碱的性质和特点，为进一步研究和应用提供基础。
二、实验原理粉防己中的主要生物碱为粉防己碱（汉防己甲素）和防己诺林碱（汉防己乙素）。
这些生物碱具有一定的碱性，可在酸性条件下成盐而溶于水，调节 pH 值后又可游离出来。
利用生物碱在不同溶剂中的溶解度差异，通过萃取、结晶等方法实现分离。
三、实验材料与仪器1、材料粉防己药材（干燥）、盐酸、氢氧化钠、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、无水硫酸钠等。
2、仪器电子天平、回流装置、抽滤装置、旋转蒸发仪、分液漏斗、干燥器、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1、提取称取一定量的粉防己粉末，加入适量的盐酸溶液，浸泡一段时间后，加热回流提取。
提取液过滤，收集滤液。
2、碱化与萃取向滤液中加入氢氧化钠溶液，调节 pH 值至 9 10，使生物碱游离。
然后用氯仿进行多次萃取，合并氯仿萃取液。
3、浓缩将氯仿萃取液通过旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液。
4、分离将浓缩液用适量的乙酸乙酯溶解，然后静置，使生物碱结晶析出。
过滤收集结晶，干燥后得到粉防己碱。
5、纯度检测采用紫外分光光度计对所得的粉防己碱进行纯度检测。
五、实验结果与分析1、提取率通过计算得到粉防己生物碱的提取率。
2、纯度紫外分光光度计检测结果显示，所得粉防己碱的纯度达到一定标准。
分析影响提取率和纯度的因素，可能包括药材的质量、提取时间、溶剂用量、pH 值调节的准确性等。
六、注意事项1、实验过程中要注意安全，避免酸、碱等试剂接触皮肤。
2、回流提取时要控制好温度，防止溶剂挥发过快。
3、萃取操作时要充分振摇分液漏斗，保证萃取效果。
4、旋转蒸发仪使用时要按照操作规程，防止出现意外。
七、讨论1、实验方法的优化探讨在现有实验步骤的基础上，如何进一步提高提取率和纯度，例如优化溶剂的选择、改进提取条件等。
2、与其他提取方法的比较对比本实验方法与其他常见的生物碱提取方法的优缺点，为今后的实验选择提供参考。
微波辅助提取汉防己总生物碱及其中汉防己碱含量的测定
纯； 乙腈 ， 谱 纯 ； 为 超 纯 水 。 色 水 ７ — 磁 力 加 热 搅 拌 器 、 ＸＹＱ 型 循 环 水 多 用 真 ９１型 Ｙ 空泵 ， 东 鄄城华 鲁 电热 仪 器有 限公 司 ； 温 培养 箱 ， 山 恒 辽 阳 市 恒 温 仪 器 厂 ； Ｄ ８ ０Ｇ（ ４ ０Ｍ Ｈｚ 型 微 波 炉 ， Ｗ ０ ２ ５ ） 佛 山 格 兰 仕 电器 厂 ； Ｃ １ Ａ 型 高 效 液 相 色 谱 仪 ， Ｉ 一０ 日本
（ ｔａ ｄｉｅ Ｔｅｒｎ ｒ ，汉 防 己 碱 ） 约 １ 、汉 防 己 乙 素 ｎ
（ ａ ｇ ｈｎ Ｉ ｅ 约 ０ ５ 。 目前 汉 防 己 甲素 、 索 多 Ｆ ｎ ｃ ｉｏｉ ） ｎ ． 乙 采用 乙醇 提取 ， 提取 液 经 酸 碱 处 理 ， 用 氯 仿 萃 取 ， 再 或 直接 改用 氨水 碱化得 总生物碱 等 。微 波技 术 已广 泛
准 确称 取汉 防 己粉末 １ ， 入烧 杯 中 ， ０ｇ 放 加入 一定 量 一定 体积 分数 的 乙醇溶 液 ， 匀 ， 摇 静置 １ ｎ 放 入 ０ｍｉ ， 微 波炉 中加 热 ， 定功 率 ， 次辐 射 １ｍｉ ， 设 每 ｎ 间隔 １ｍｉ ｎ
后 再 辐 射 １ｍｉ ， 此 间 隔 辐 射 直 至 总 时 间 达 到 实 验 ｎ如 设 定 值 ， 滤 。按 同 样 条 件 重 复 提 取 一 次 。 合 并 两 次 抽 滤 液 ， 压 蒸 馏 至 无 醇 味 。将 剩 余 液 倒 人 烧 杯 ， 入 减 加 １ 盐 酸 ， 置 ４ ０ｍＬ １ 静 ８ｈ后 用 滤 纸 过 滤 去 除 沉 淀 ， 用 浓 氨 水 调 滤 液 ｐ ＝ ， 置 ４ Ｈ＝ ９ 放 ＝ ８ｈ后 抽 滤 ， 淀 干 燥 后 ， 沉 用 １ ５ｍＬ丙 酮 加 热 溶 解 ， 溶 液 中滴 １ ２滴 蒸 馏 水 ． 在 ～ 至 溶 液 微 浊 ， 置 待 溶 液 挥 干 得 白 色 结 晶 】即汉 防 己 放 ，
北中大中药化学实验指导02基本实验项目-3粉防己生物碱的提取、分离和鉴识
实验三 粉防己生物碱的提取、分离和鉴识粉防己亦称汉防己,为防己科植物汉防己（Stephania tetrandra ）的干燥根，是临床常用中药。
具有祛风湿、止痛、利水消肿、泻下焦湿热等功效。
现代药理实验研究表明，汉防己总生物碱具有镇痛、消炎、降压、肌肉松弛以及抗菌、抗肿瘤作用，为主要有效成分。
粉防己中生物碱含量高达5%~2.3%，其中主要为汉防己甲素（tetrandrine ）和汉防己乙素(fangchineline ，又称防己诺林)，还含少量的轮环藤酚碱（cyclanoline ）。
它们的物理性质如下：1. 汉防己甲素和汉防己乙素均为双苄基异喹啉衍生物，氮原子呈叔胺状态。
汉防己甲素 R = CH 3汉防己乙素 R = H汉防己甲素为无色针状结晶，丙酮中结晶有双熔点：126～127℃/217～218℃。
即，在126～127℃先融化，继续加热至153℃固化，温度上升至217～218℃全熔。
不溶于水，石油醚，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂及稀酸水溶液。
UV ：λ0.01NHCl max280nm （ε6887） IR ：υKBr max （cm -1）3050，2800，1605，1580，1235，1215，840汉防己乙素为细棒状结晶，同样有双熔点现象，丙酮中结晶mp134～136℃/238～240℃，甲醇中结晶mp177～179℃/238～240℃。
溶解度与汉防己甲素相似，，但极性稍大，故在冷苯中溶解度小于汉防己甲素，而在乙醇中的溶解度大于汉防己甲素。
具有隐性酚羟基，不溶于NaOH 溶OMe O C H 3O OMeNMeO CH 3H液。
2. 轮环藤酚碱轮环藤酚碱 氯化物 无色八面体状结晶，mp214～216℃碘化物 无色绢丝状结晶，mp 185℃苦味酸盐 黄色结晶，mp 154～156℃轮环藤酚碱为水溶性季铵型生物碱，不溶于低级性有机溶剂。
UV ：λMeOH max nm （logε）223（4.18），286（3.88） IR ：υKBrmax （cm -1）3200，1610，1580，1500， 1280，1245， 885，800一、实验目的1． 掌握生物碱的乙醇提取方法以及脂溶性生物碱与水溶性生物碱分离。
汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定
2、色谱检识 、 色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板 色谱材料：硅胶 硬板 点样：汉防己总碱、 点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己 乙素的0.1%醇溶液 乙素的 醇溶液 展开剂： 氯仿—丙酮 甲醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—甲醇 展开剂：①氯仿 丙酮 甲醇（6∶1∶1） 氯仿—乙醇 乙醇（ ∶ ） ②氯仿 乙醇（10∶1） 甲苯—丙酮 乙醇（ ∶ ∶ ） 丙酮—乙醇 ③甲苯 丙酮 乙醇（4∶5∶1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 显色剂： 观察记录： 观察记录：记录图谱及斑点颜色
Oe M H3C N O R O O Oe M N CH3
汉防己甲素 R=CH3 汉防己乙素 R=H
实验器材： 实验器材： 试药：汉防己、 乙醇、 盐酸 氯仿、 盐酸、 试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、 乙醇 氨水、 氢氧化钠 无水硫酸钠、氧化铝、 氢氧化钠、 氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、 碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂 碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、 碘化钾试剂 等 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、 仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、 试管等
实验四 汉防己中生物碱的 提取、 提取、分离和鉴定
实验目的： 实验目的： 1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3、掌握生物碱的鉴定方法。 、掌握生物碱的鉴定方法。
实验原理： 实验原理： 根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇 的通性，利用乙醇提取总生物碱。 的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵 型生物碱易溶于水， 型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂 的性质， 的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和 水溶性生物碱； 水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂， 在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的 性质反复处理后， 性质反复处理后，在利用两者在冷苯中溶解 度的不同，使它们相互分离。 度的不同，使它们相互分离。
汉防己中生物碱的提取分离和鉴定
②氯仿—乙醇（10∶1） ③甲苯—丙酮—乙醇（4∶5∶1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂
观察记录：记录图谱及斑点颜色
实验注意事项：
1、提生物碱时，回收乙醇至稀浸膏 状即可，过干时，当加入盐酸后会结成胶 状团块，影响提取效果。
3、用1%氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分 除酚性生物碱。汉防己乙素结构中的酚羟 基由于空间效应和氢键的形成，呈隐性酚 羟基性质，酸性减弱，不溶于强碱溶液中， 在此步骤中仍留在氯仿液中。
将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐 酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄 明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为 10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后 放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯 仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化 钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水 硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少 量，得汉防己总碱。
四、检识
1、化学检识
将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃 取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小 试管储存，分别在四个小试管中加入 改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、 硅钨酸试剂，观察各试管中的变化， 记录在如下表格中。
2、色谱检识 色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板 点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己
实验内容与方法：
一、总生物碱的提取
取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶 中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时， 滤 出 乙 醇 提 取 液 ； 药 渣 重 新 加 入 85% 乙 醇 200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤， 浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。
二、精制
H3C N
OMe
TLC法分离汉防己中汉防己甲素、乙素
TLC法分离汉防己中汉防己甲素、乙素
徐应淑;江波
【期刊名称】《遵义医学院学报》
【年(卷),期】2009(032)003
【摘要】目的探索汉防己中生物碱的提取和分离最佳方案,以得到安全、方便、快速的提取分离条件.方法采用渗滤法进行提取,进一步用连续提取器对生物总碱的进行提取,再用薄层色谱进行分离,然后运用熔点测定、红外光谱、紫外光谱、TLC与标准品对照等方法加以确证.结果确定了提取和分离的最佳方法和条件,较快的分离得到汉防己甲素和乙素.结论所建立的方法,能够快速、简便的提取和分离得到较纯的汉防己甲素和乙素.
【总页数】2页(P296-297)
【作者】徐应淑;江波
【作者单位】遵义医学院,药物化学教研室,贵州,遵义,563003;遵义医学院,药物化学教研室,贵州,遵义,563003
【正文语种】中文
【中图分类】R914
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5.粉防己药材中汉防己甲素和乙素含量测定 [J], 陈浩桉;徐国钧;金蓉鸾;徐珞珊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博
拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。
生物碱的提取分离
实验材料汉防已粗粉
试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮
仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、
滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器
一、提取分离实验
1. 回流提取
100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，
同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。
2. 低压柱层析
低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱
层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或
G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于
经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层
层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操
作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱
减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。
（2）拌样加样
取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。
（3）洗脱
开动气泵待用。
用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。
（4）检查
各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过TLC检查，吸附剂：硅胶G，展开剂：石油醚：乙酸乙酯3：1，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定mp。
二、鉴定方法
1. 有机胺碱的TLC
吸附剂：薄层层析硅胶G，用0.3%CMC-Na水液制板，110 ℃活化1小时。
样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、
展开剂：石油醚- EtoAc-NHEt2 (6：2：1)
显色剂：改良碘化铋钾试剂(展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰)
现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认。
总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离
注1：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度(约150 ml)，充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5 ml/分。
注2：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120 g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。
提不尽生物碱。
注3：检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加5%HCl 0.5 ml溶解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出或明显浑浊时，表明生物碱已提尽，或基本提尽。
反之，应继续提取。
注4：先将提取器内滤纸筒取出。
然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾出(另器贮存)，再将提取玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶中乙醚于玻筒中，至烧瓶内的乙醚提取液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。
二、鉴定方法
1. 有机胺碱的TLC
吸附剂：薄层层析硅胶G，用0.3%CMC-Na水液制板，110 ℃活化1小时。
样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③
展开剂：石油醚- EtoAc-NHEt2 (6：2：1)
显色剂：改良碘化铋钾试剂(展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰)
现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认。
以下实验可在课后选做
2. 衍生物制备
取汉防已甲素0.2 g，溶于2 ml(丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止，
抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防已甲素苦味酸盐，mp 235~242 ℃。