质谱检测器的调谐和校正

质谱检测器的调谐和校正

本章概要

q调谐

K调谐的准备工作

K优化调谐参数q校正

K校正的准备工作

K执行校正

K复查校正数据

K重新校正

调谐

q要调谐的原因：

K通过优化质谱峰的强度增加灵敏度

K得到接近高斯分布的峰型(得到准确的质量分配) K优化谱峰的分辨率

调谐前的准备

q导入样品，寻找最佳采集参数：K通过注射泵输送样品

◗用样品充满注射器

◗选择流速 3-10 uL/min

K‘T’ 型接口动态加样技术

◗用样品充满注射器

◗寻找适宜的LC流速和流动相的比例，获

得最佳的数据采集条件

◗动态条件下导入样品，观察“好”的信号

调谐过程中应注意的参数

q探头位置调整

q去溶剂气的流量

q离子源的温度

q去溶剂气的温度(electrospray only)

q APCI 探头温度(APCI only)

q喷雾毛细管电压(electrospray only)

q电晕放电针电压(APCI only)

q取样锥孔电压

q萃取锥孔电压

q射频六极杆透镜电压

q离子能量

q低质量端和高质量端的分辨率

API 的雾化气体

q ESI和APCI均采用与电离源同轴的氮气气流

q ESI：产生汽溶胶的溶液小液滴

q APCI：LC流动相经APCI加热器快速加热而形成蒸汽q雾化气：固定流速无需调整

q流速参数通过调节90-100 psi的管路 ,氮气得到已经优化的流速

去溶剂气

q与喷嘴加热器同轴的氮气气流

q可以通过仪器面板前的旋钮调整大小

q根据流动相的比例和流速大小优化

q ESI，去溶剂气可以加热以提高溶剂的蒸发

q APCI, 无需加热

q保护离子源，无论是ESI还是APCI，如果流速小于100L/H，软件会自动关闭所有加热器

APcI探头温度

q高温加热溶剂和样品 (300-600℃)

q如果温度设置太高，对于热不稳定样品可能引起热裂解

q根据被分析物的挥发性、流动相比例以及流速大小等因素优化温度，高含水比例的流动相需要更高的温度

ESI毛细管喷口电离电压

q内径约 75-μm 的不锈钢毛细管导入流动相和样品质谱的离子源

q提供电离途径

q正离子电离： 2-4 kV

q负离子电离： 2-3 kV

q影响信号的稳定性

APcI电晕放电针电压q化学电离技术

q正离子电离： 3-5 kV

q负离子电离： 2-4 kV

取样锥孔电压

q提取离子进入第一级真空区

q常用范围 25-70 V

q低分子量的化合物使用较低的电压

q高分子量的化合物使用较高的电压 (>1000 Da) q提高电压会产生碎片 (源内 CID)

萃取锥孔电压

q将离子聚焦到RF六极杆透镜

q通常范围 3-10 V

q提高电压可以产生碎片

q一般建议用提高取样锥孔电压的方式来得到碎片

RF六极杆透镜电压

q将离子聚焦到四极杆的中心

q通常使用优化好的0.5 v 直流偏置电压q RF 电压采用与四极杆同步的扫描

离子能量

q加在四极杆预过滤器处的直流偏置电压

q通常范围 -1 ~ +3 V

q提高离子能量会降低分辨率

q在不降低信号强度的条件下，此值越低越好

q如果此值设置低于 -1 V ，而没有影响信号强度，此时应该清洗离子源

质量低端和质量高端的分辨率

q对峰形均产生影响

q通常设置 15 (任意单位) ,对两端得到单位质量分辨率

q优化其他参数时一般先降低分辨率设置，比如 11，调好后，再提高此值至你所期望的分辨率

校正

q为什么

K校正质量标尺

K在安装期间的质量校正，可以对硬件提供更精细的校正

准备校正

q导入标准参照物溶液

K用注射泵将标准参照物溶液（如聚乙二醇，NaCsI等）导入MS

◗注射器抽满参照物溶液

◗通过毛细管连接ESI电离探头

◗3-10 uL/min

K为避免离子源污染，不要长时间导入参照物溶液

准备校正

q调谐

K开始校正前，用参照物溶液调整离子源参数

◗设置倍增器电压 650 V

◗调整离子源参数，得到最优化的离子强度和峰形

◗设置合适的分辨率和离子能量达到单位质量分辨率K在整个校正范围内得到一个好的质量峰分布

◗检查标样中m/z大于500amu峰强度

◗同样也要检查m/z 89 和 133信号强度 (对于PEG 碎片 - 强度随锥孔电压的升高而变强)

准备校正

准备校正

q删除现存的校正表

K从校正窗口: File | Load Calibration

K选择Uncal.CAL校正文件

K选择Process | Delete all calibration K选择File | Save Calibration

准备校正

q选择参数

K参照物质量表

K校正参数 (一般用缺省值)

K校正结果自动监测参数 (一般用缺省值)

K质量测量参数

K采集参数 (缺省参数自动链接到所选择的参照物文

件表)