第九章 特殊染色(二)

应 用：
在化脓性炎、坏死性化脓性炎及肉芽组
织性化脓性炎或化脓性炎伴有巨细胞反 应疑为霉菌感染时，找到霉菌的菌丝、 抱子及菌体即诊断为霉菌性炎。
含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨
噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒， HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有 时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做 含铁血黄素染色。
试剂配制：
1.
Perls溶液
1%亚铁氰化钾，20%盐酸，用时等量混合，静 置5min。
2.
0.5%碱性品红



（6）直接以95%酒精分化。
（7）纯酒精脱水。 （8）二甲苯透明，树胶封固。
【结果】
神经胶质和肌纤维均染蓝色，纤维蛋白亦染蓝色， 而细胞间结缔组织纤维则染浅红色或不染色；胶原多 呈粉红色，粗弹力纤维有时呈紫蓝色。
【应用】
诊断横纹肌肿瘤 显示神经胶质
第七节 病原微生物染色法
“Heart failure” cells
应 用： 主要用于同其它色素鉴别，若为阳性， 显示陈旧性出血。
注意事项：
Perls氏溶液临用前新鲜配制，不宜久存
再用。
Perls染色过程中，应避免用生锈及其它
可能造成铁质的普通水洗，而应用蒸馏 水洗。
二、钙的显示
组织中的病理性钙盐沉着多见于结核性干酪样


⑹水洗5分钟。
⑺蒸馏水洗，至70%酒精洗2分钟。 ⑻醛复红染液30分钟。 ⑼95%酒精洗(洗去多余染料)。 ⑽蒸馏水洗，入淡绿染液30秒钟。 ⑾蒸馏水速洗(镜下观察)。 ⑿曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。曲霉菌丝周边 紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。
结果：真菌成黑色，背景淡绿
1. 2. 3. 4. 5. 6.
脱蜡至水 放入50-60度的1%甲苯胺蓝水溶液 20-40min 蒸馏水洗 95%乙醇分化 无水乙醇脱水 透明、封片
染色结果：
尼氏小体呈紫蓝色，细胞核呈棕红色
第六节 肌肉组织染色法
一、横纹肌染色
Mallory氏磷钨酸苏木素染法(简称P、T、A)
一、细菌染色
细菌在HE染色上不能分类，故须作细菌染色。

应用： （1）一些疑为细菌感染性炎症，可用细菌染色进一步 确定病原诊断。如伤寒肉芽肿性炎或葡萄球菌性炎等 化脓性炎症的诊断中细菌染色有很重要的诊断价值。 （2）麻风病与结核病：均由菌体表面含蜡质膜的抗酸 杆菌所感染形成，故须经抗酸染色才能着色，从而与 其它疾病相鉴别。


⑼急速入80%酒精洗。
⑽吸水纸吸干。 ⑾纯酒精。

⑿二甲苯透明，用荧光封固剂及中性树胶封固。
结果：
抗酸杆菌----明亮的黄色荧光，背景不染色。
二、真菌染色
铬酸P、A、S(真菌类染色)

⑴石蜡切片2-3微米，脱腊常规至水。 ⑵4%铬酸氧化1小时。 ⑶流水冲洗5分钟，蒸馏水洗2分钟。 ⑷冷雪夫氏(Cold Sohiff)液，15-20分钟。 ⑸0.5%偏重亚硫酸钠水溶液5分钟(更换2次)。
ห้องสมุดไป่ตู้0.5g
1%碱性品红
50%乙醇
100ml
Perls氏普鲁氏兰反应：

石蜡切片脱蜡至水。 蒸馏水洗。 2%亚铁氰化钾、20%盐酸等量混合液（用前混合）处 理15-20分钟。 蒸馏水洗。 0.5%碱性品红对比染色。 95%乙醇分化。 脱水、透明、封固。

结 果：
含铁血黄素呈蓝色（蓝黑色）。
配制方法：

Mallory氏磷钨酸苏木素 磷钨酸 苏木素 蒸馏水 2g 0.1g 100ml

先以50ml蒸馏水加热溶解苏木素，再以50ml蒸馏水溶 解磷钨酸，待苏木素水溶液冷却后混合即可，于6-12个 月后任其自然成熟，能得最佳的结果。如急用时，可加 过氧化氢液0.2ml，以促其成熟。
操作方法：
O)
1.5g 0.75g 75ml 10ml 50ml
oolamlire B)
操作方法：

⑴切片置入二甲苯，(1份花生油+2份二甲苯更好)脱蜡至水。 ⑵在金胺，若丹明溶液中10分钟(60℃)。 ⑶自来水洗。 ⑷盐酸酒精分化2分钟。 ⑸自来水洗。 ⑹0.5%高锰酸钾液中2分钟。 ⑺自来水速洗。 ⑻吸水纸吸干。
5. 3%对苯二酚液 对苯二酚 醋酸缓冲液 6. 明胶对苯二酚液 3%对苯二酚液 5%明胶液 7. 显影液 明胶对苯二酚液 2%硝酸银液
0.3g 10ml 1ml 15ml 16ml 3ml
染色步骤：



1. 脱蜡至水 2. 醋酸缓冲液洗2次 3. 切片置于1%硝酸银液内，56度水浴箱作用1h 4. 取出切片，立即侵入显影液内2-3min，至切片呈金 黄色为止。 5. 将切片侵入56度蒸馏水中洗1-2min 6. 蒸馏水洗1次 7. 无水乙醇脱水 8. 二甲苯透明 9. 中性树胶封固
染色结果：
幽门螺杆菌呈黑色，背景呈黄色
2. 齐-尼氏抗酸杆菌染色法
(Ziehl-Neelsen)
齐-尼氏抗酸杆菌染色法是一种传统的经典抗
酸染色法，常用来显示结核杆菌、麻疯杆菌。 由于染液的加温，可使石碳酸复红进入分枝杆 菌内。再用稀酸脱去背景上的多余红色，如用 苏木素来染核，杆菌鲜红色对此清晰。
坏死，脂肪坏死、各种组织坏死灶继肿瘤内， 其性质多为磷酸钙，在HE染色中呈蓝色。
试剂配制：
1. 1%硝酸银
硝酸银 蒸馏水 2. 2%硫代硫酸钠 硫代硫酸钠 蒸馏水 2g 100ml 1g 100ml
染色步骤：

切片脱蜡之水
蒸馏水洗1次 1%硝酸银置于阳光处作用15-60min




结果 神经原纤维呈黑色。背景灰紫色
重氨银溶液配法：
在20ml
120%硝酸银中滴入氨水，待至所 产生的沉淀溶解为止，后加入10滴氨水 和20ml蒸馏水。
神经原纤维呈细线状，存在于神经细胞体及树突中，它 们形成一个稠密的网状，轴突中的原纤维也互相交织 在一起，且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色， 难与胶原纤维相区别，故须作神经纤维染色。
试剂配制：
Ziehl-neelsen氏石碳酸复染液。
碱性品红酒精饱和液(约5.95%)
5%石碳酸水溶液
10ml
90ml
操作方法：

（1）切片常规脱蜡。 （2）石碳酸复红染液滴于切片上，置酒精灯上，徐徐 加温，使出现蒸气约5分钟(或在60℃下染30分钟)冷 却2分钟。 （3）水洗。 （4）1%盐酸酒精分化，切片呈淡桃红色为止(在显微 镜下控制)。
蒸馏水洗2min
自来水洗5min 苏木精染核5min 水洗 1%盐酸乙醇分化
自来水洗10-15min余步同HE 染色。
结 果：
钙盐呈深黑色，细胞核染成蓝色，背景呈红色
第五节 神经组织染色

神经组织主要由神经元（神经细胞）和神经胶质细胞 以及神经胶质纤维组成。 神经元是由细胞体和胞突（树突和轴突）构成。细胞 浆内除含有一般细胞器----线粒体、高尔基体、溶酶体 以及类脂质、色素外，更主要特征是神经原纤维和尼 氏小体。 神经胶质分神经胶质细胞和神经胶质纤维。神经胶质 细胞广泛分布于中枢及周围神经系统，由星形胶质细 胞，少突胶质细胞和小胶质细胞几种，它们分别担负 着支持作用，并参与代谢活动与修复功能。


神经组织用常规HE染色，对细微结构不易显
示，对神经纤维，髓鞘则无法区别。
常用的特殊显示神经组织的染色有
一、Roger氏神经原纤维法
操作方法：

（1）石蜡切片脱蜡至水。

（2）将切片投入2%氨酒精（2毫升氨水溶于100毫升95%酒精）中12小 时或更长时间，后入80%酒精快洗一下。
（3）直接由蒸馏水入40%硝酸银溶液，在56℃温箱内放置15-20分钟(此 液可以重复用，染色时间与温度有关)。 （4）在蒸馏水中洗一下。 （5）入20%中性甲醛5分钟，后入5%甲醛。 （6）以吸纸吸干，后滴入重氨银溶液1分钟。 （7）吸干，后放20%甲醛5分钟，或至切片呈锈橘黄色。 （8）用蒸馏水洗 ，再放入0.2%氯化金中15分钟，或至切片呈灰色。 （9）用蒸馏水洗，后固定于5%硫代硫酸钠中1/2分钟。 （10）常规脱水、封固。

1.Wathin-starrg 胃幽门螺杆菌染色
染色原理：
胃幽门螺杆菌含有蛋白和多糖类物质，在一定
温度下能吸附硝酸银溶液中的银离子，再经还 原反应，形成金属银。
试剂配制
1. 醋酸缓冲液 0.2mol/L醋酸缓冲液 蒸馏水 2. 1%硝酸银 硝酸银 醋酸缓冲液 3. 2%硝酸银 硝酸银 醋酸缓冲液 4. 5%明胶液 明胶 醋酸缓冲液 10ml 240ml 1g 100ml 0.2g 10ml 5g 100ml
第四节 组织内铁、钙的显示
在某些病理情况下，细胞代谢所产生和 沉着的色素，如脂褐素、黑色素、含铁血黄 素、嗜铬、嗜银颗粒及组织内的微量金属离 子等，则需要一些特殊染色加以证明。
一、含铁血黄素染色法

在慢性淤血的脏器组织内常有含铁血黄素沉 着，一般易于同其它色素鉴别，但在不易区分 的情况下可作铁反应加以证明。



（5）流水洗。
（6）苏木素或0.5%次甲蓝水溶液染核。 （7）常规脱水、透明、封固。
结 果：
抗酸菌红色，核蓝色。
2. 抗酸杆菌的荧光法
在组织切片中大量的抗酸杆菌易于见到，少量
时则难于寻找，用荧光法则比齐一尼氏染色易 于找到。
试剂配制：
金胺O(Auramino 若丹明B(Rh 甘油 酚结晶(50℃液化) 蒸馏水