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课题1菊花的组织培养

一、植物组织培养的相关概念和基本过程

1、(1)细胞全能性的表达：________的植物组织或细胞，在一定的____________、________和________________的作用下，发育成完整植株的过程。

(2)细胞分化：在植物的________过程中，细胞在________、________和____________上都会出现________的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。

(3)植物组织培养的基本过程

离体的植物器官、组织或细胞(又叫________)――→ 愈伤组织――→ 胚状体、丛芽等

――→ 生长 新个体

①愈伤组织的特点：细胞________________，是一群________________的呈________________的薄壁细胞。

②脱分化(去分化)：由____________的植物组织或细胞产生____________的过程。 ③再分化：由________________________重新分化成根或芽等器官的过程。

(4)条件：________的植物组织或细胞，在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做________。

2．影响植物组织培养的因素

(1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度____________。对于同一种植物材料，材料的________、________________等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择________________的茎________部________的侧枝。

(2)营养物质的影响：常用的________培养基，主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等。其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐；________提供碳源，维持细胞渗透压。

(3)植物激素的影响：MS 培养基常需添加植物激素。其中________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的________、________________以及____________等，都会影响实验结果。

(4)环境因素的影响：________、________、________等条件也能影响植物组织培养。

注意：植物组织培养的原理是细胞的全能性，而影响植物组织培养的因素有：植物材料的种类、培养基的营养条件、植物激素的种类和比例以及适宜的PH 、温度等。

二、实验操作过程：

1.制备

实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备

（1）配制各种母液。

配制母液时，大量元素浓缩__________ ，微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。

（2）配制培养基。

配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。__________，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__________。（3）灭菌。高压蒸汽灭菌

2．外植体

选取菊花茎段时，要取 ____________________。

无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_______________；另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_________灭菌不当。

过程：流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗①过程

流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2～3次，持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次

3、接种

接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌

4、培养

接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22℃，并且每天用日光灯光照12h

5、移栽

6、栽培

附：一般来说，容易进行__________的植物，也容易进行组织培养。

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