菊花组织培养知识点整理
课题三菊花组织培养知识点
课题1菊花的组织培养一、植物组织培养的相关概念和基本过程1、(1)细胞全能性的表达：________的植物组织或细胞，在一定的____________、________和________________的作用下，发育成完整植株的过程。
(2)细胞分化：在植物的________过程中，细胞在________、________和____________上都会出现________的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
(3)植物组织培养的基本过程离体的植物器官、组织或细胞(又叫________)愈伤组织胚状体、丛芽等新个体①愈伤组织的特点：细胞________________，是一群________________的呈________________的薄壁细胞。
②脱分化(去分化)：由____________的植物组织或细胞产生____________的过程。
③再分化：由________________________重新分化成根或芽等器官的过程。
(4)条件：________的植物组织或细胞，在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。
离体的植物组织或细胞叫做________。
2．影响植物组织培养的因素(1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度____________。
对于同一种植物材料，材料的________、________________等也会影响实验结果。
因此菊花的组织培养，一般选择________________的茎________部________的侧枝。
(2)营养物质的影响：常用的________培养基，主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等。
其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐；________提供碳源，维持细胞渗透压。
(3)植物激素的影响：MS培养基常需添加植物激素。
【高中生物】高中生物知识点：菊花的组织培养
【高中生物】高中生物知识点：菊花的组织培养菊花的组织培养：1.植物组织培养(1)原理：植物细胞具有全能性。
（2）方法：愈伤组织培养（固体培养基）和细胞悬浮培养（液体培养基）。
(3)基本过程① A代表一个孤立的组织、器官或细胞。
植物细胞具有全能性是它能被培养成D细胞的根本原因。
②b表示愈伤组织，它与a相比分化程度低，全能性高。
③ 如果a是花药，D是单倍体植株。
如果用秋水仙碱处理，可以获得染色体加倍的植株(4)操作流程MS固体培养基的制备：① 各种母液的配制→ 培养基的制备→ 绝育↓②培养基由大量元素、微量元素、有机成分组成③ 在菊花的组织培养基中，植物激素不可添加，因为它容易在短时间内培养外植体的消毒：用70％的酒精和0.1％的氯化汞溶液对外植体进行消毒↓接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种6-8块外植体。
外植体↓ 接种与细菌接种相似。
操作步骤相同，都需要无菌操作。
培养：接种后的锥形瓶应诙放在无菌箱中进行培养，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照↓移栽：将生根的苗从锥形瓶中移至消过毒的珍珠岩或蛭石中生活一段时间，苗健壮后再移至土中↓栽培2.示例：菊花组织培养（1）菊花的选材：未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
（2）过程：知识点拨：1.影响植物组织培养的因素：①不同植物组织培养的难易程度差别很大。
② 激素调节。
2、肉汤培养基以有机营养为主，ms培养基则需提供大量无机营养。
知识发展：1、植物激素与组织培养生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、去分化和再分化的关键激素。
它们的功能和特点如下：①在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。
② 结果因使用顺序而异，如下所示：使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素它有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞分裂和分化同时使用分化频率增加③用量比例不同，结果也不同（2）在组织培养中，合成激素被用来代替天然激素，因为植物中有相应的酶分解天然激素，但没有相应的酶分解合成激素。
菊花的组织培养
干外植体表面→质量分数为0.1﹪的氯化汞溶液中
1～2min→无菌水中至少清洗3次。 注意事项： 对外植体进行表面消毒时，既要考虑药剂
的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力
二、实验操作
（三）接种 （注意无菌技术的操作、方向）
1.接种前用体积分数为70%的酒精将
工作台擦拭一遍；
切段
2.点燃酒精灯；
3.切段：将消过毒的菊花茎段在无菌
无菌水
浸泡
清洗
？
1～2 min
3次
生长旺盛嫩枝
流水冲洗
无菌吸水纸吸水
70% 的酒精中 摇动2～3次 6～7s
无菌水清洗
无菌吸水纸吸水
0.1氯化汞溶液
无菌水清洗
无菌吸水纸吸水
外植体消毒：
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗20min→无菌吸水 纸吸干外植体表面→体积分数为70﹪的酒精中摇动 2～3次，持续6～7s→无菌水清洗→无菌吸水纸吸
（六）栽培 1.每天观察并记录幼苗生长情况； 2.适时浇水、施肥、直至开花。
二、结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析 接种3～4 d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会
表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率，分析接种
操作是否符合无菌要求。 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化
观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多
长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步 分化成根和芽的比例和时间。
二、结果分析与评价
（三）是否进行了统计、对照与记录 做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科 学态度。从实验的第一步开始就要求学生做好实验记 录，可以让学生分组配制不同培养基，如诱导愈伤或
直接分化丛芽的培养基，然后做不同配方的比较。
3.1菊花的组织培养
2、愈伤组织的继代培养 所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严 格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体 一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代 为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少， 外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打 开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以 转为绿色。 3、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养 基，进行试管苗的见光培养。
脱分化
细胞分 裂素≈ 生长素 不需要光
愈 伤 再分化 组 织
细胞分裂 素<生长素
需要光
思考：你认为组织培养过程中，成功的关 键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？ 组织的脱分化及愈伤组织的再分化。
植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分 化、再分化的最重要因素是植物激素，细胞分 裂素与生长素之间的浓度比可以调控植株组培 过程中芽和根的形成。
（2）脱分化： 由高度分化的植物器官、组织或细胞产生 愈伤组织的过程，又称去分化。 （3）再分化： 脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新 分化根或芽等器官的过程。 （4）愈伤组织的特点： 是通过细胞分裂形成的，细胞结构疏松而 无规则，高度液泡化呈无定形态的薄壁细胞。 思考：如何控制细胞的脱分化与去分化？ 通过激素控制。
（三）接种
1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子， 接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾 使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用 紫外线照射20分钟。
2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种
2、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形 成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需 要的（ C ） A.消毒灭菌 B.适宜的温度 C.充足的光照 D.适宜的养料和激素
生物 菊花的组织培养笔记
菊花的组织培养基础概念：1、细胞分化概念：在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。
原因：基因的选择性表达。
特点：持久性、稳定性、普遍性、（不可逆性)。
2、细胞的全能性概念：已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。
原因：细胞内含有形成完整个体所需的全套基因。
证明：植物组织培养证明植物细胞具有全能性；动物克隆证明动物细胞核具有全能性。
3、植物的组织培养概念：指植物的组织、器官、细胞等在离体条件下，通过无菌操作，在人工控制条件下（一定的营养物质、激素、温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的完整植株的技术。
区别植物组织培养和植物细胞培养：植物组织培养：组织或细胞到植物体形成的过程；植物细胞培养：组织或细胞到愈伤组织的过程。
一、植物组织培养的原理1、原理：植物细胞具有全能性。
2、概念：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。
3、原因：生物体的每一个细胞都是由同一个受精卵通过有丝分裂形成的，都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。
特例：哺乳动物成熟红细胞没有细胞全能性。
（没有细胞核）二、植物组织培养的基本过程和必要条件1、基本过程：外植体——（脱分化）——愈伤组织——（再分化）——芽、根——植物体脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。
愈伤组织：外植体在培养过程中，通过细胞分裂所产生的、排列疏松无规则、高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞群。
2、必要条件：离体；一定的营养物质激素和其他外界条件。
三、影响植物组织培养的因素1、植物材料的选择（菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
）2、培养基的营养成分微量元素和大量元素：提供植物细胞生活所必需的无机盐。
蔗糖：提供碳源，能源，同时能够维持细胞的渗透压。
甘氨酸、维生素等：满足离体植物细胞特殊营养需求。
MS培养基：则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
高二下册生物菊花的组织培养实验操作知识点
高二下册生物菊花的组织培养实验操作知识点
对人类来说，生物太重要了，人们的生活处处离不开生物。
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高二下册生物菊花的组织培养实验操作知识点
(一)制备MS固体培养基
1、配置各种母液
2、配置培养基①定容② 调PH
③培养基的分装3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
(二)外植体消毒
2、消毒：
流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上
(三)接种
用70%的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟
1、接种室消毒
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75%的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3-4块，菊的茎或叶6-8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，不要倒插。
茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分
(四)培养
无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照
(五)移栽
1、打开封口膜
2、清洗转移至消过毒的蛭石或珍珠岩中幼苗长壮后，移栽到土壤中。
《菊花的组织培养》学习要点
课题1 菊花的组织培养知识结构学习目标1.通过对教材的阅读，能够说明植物组织培养的基本原理，进行菊花或其它植物组织培养。
2.通过本节学习，能够掌握植物组织培养的基本技术，学会运用植物组织培养过程中使用的无菌技术。
学习重点与难点重点：1.植物组织培养的相关概念和过程2.影响植物组织培养的因素3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
难点：1.影响植物组织培养的因素。
2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
学习要点总结学习目标一：掌握与本节课知识点密切相关的概念：细胞全能性、细胞分化、愈伤组织、脱分化（去分化）、再分化；掌握植物组织培养的过程（1）基本概念细胞全能性：指当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。
细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
愈伤组织：离体的植物组织或细胞，培养一段时间后，会通过细胞有丝分裂，形成愈伤组织。
愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。
再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。
（2）过程植物组织→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→移栽成活学习目标二：影响植物组织培养的因素（1）材料因素的影响不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。
同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短也有影响。
幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。
菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧芽。
（2）营养因素的影响需要配置适宜的培养基，常用的一种培养基是MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素，以及蔗糖等。
菊花的组织培养
• （4）以组织培养繁殖的种苗与母株有著相同的 遗传基因。所以使用这项技术可让优良的品种不
•
• 1、植物细胞表现出全能性的必要条件是 • A.导入其他植物细胞的基因 • B.将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中 • C.用适当浓度的秋水仙素处理 • D.脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的 • 温度等外界条件
。
•
•2、植物为自养生物，为什么在培养的过程中 需要加入糖类等有机物？
•因为植物组织培养是利用离体的植物组织 或细胞，在其脱分化过程中不能进行光合 作用合成糖类，因此必须加入糖类，作为 碳源和能源物质，同时维持培养基的渗透 压。
•
•植物组织培养过程:
•植物细胞培养
•细胞分裂
•离
素>生长素
体 组
•脱分化
器官、组织、细胞，培养在人工配置的培养基上 ，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤 组织再分化形成丛芽，最终形成完整的植株。
又称：植物离体培养 •思考 ： •1、植物组织培养的原理是什么
？•植物细胞具有全能性
•
•（2）细胞的全能性
•①定义 •已分化的细胞具有发育成完整个体的
：
潜能的特性
•②原理 •生物体的每一个细胞都包含有该物种所
•(2).愈伤组织：愈伤组织是通过细胞分裂形成的 ，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定 形状态的薄壁细胞。
➢2-3周，愈伤组织开始形成。
•
• (1).脱分化（去分化）：已经分化的植物器官 、组织或细胞产生愈伤组织的过程。 •
•(已经分化的植物器官、组织或细胞，当受到创伤或进行 离体（也受到创伤）培养时，已停止分裂的细胞，又重 新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有结构 和功能，成为具有未分化特性的细胞。)
专题3 菊花的组织培养知识点记忆
（二十六）菊花的组织培养一．全能性1.植物细胞的全能性(1)概念：具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力。
(2)原因：生物体的每一个细胞都是由受精卵有丝分裂来的，含有该物种所的全套遗传信息。
(3)全能性大小：一般分化程度越低的细胞，全能性越高。
特例：卵细胞的分化程度和全能性都比较高。
例如：受精卵》生殖细胞》体细胞植物细胞的全能性》动物细胞分裂能力强的细胞》不分裂的，成熟的细胞2.在植物体上，细胞未能表现出全能性的原因是：在特定的时间和空间条件下，通过基因的 选择性表达，构成不同组织和器官。
3.一个高度分化的植物细胞经过细胞分裂和细胞分化，最终形成了完整的植物体，这说明已 分化的植物细胞具有全能性4..全能性表达的条件(1)离体的植物组织或细胞(离体的植物组织或细胞叫做外植体)。
(2)一定的营养物质（例如：水，无机物和有机物）(3)植物激素。
（例如：细胞分裂素，生长素）(4)其他适宜的外界条件（适宜的温度，适宜的PH 等）二.细胞分化1.细胞分化的概念：在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生 理功能上发生稳定性差异的过程。
2.细胞分化的特点：持久性，稳定性，不可逆性。
3.细胞分化的时间：发生在生物体的整个生命历程中，但在胚胎期达到最大限度。
4.细胞分化的实质:在特定的时间和空间，基因选择性表达的结果。
三.实验室内常用的灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌。
在组织培养过程中培 养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。
四．.植物组织培养的基本过程1.原理：植物细胞的全能性。
2.基本过程 ：离体细胞、组织、器官――→A B ――→C 胚状体、丛芽等――→生长新个体 ①B 是愈伤组织，特点是：细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态 的薄壁细胞。
注意：愈伤组织分裂能力强，全能性高，没有中央大液泡。
②A 过程是脱分化，指由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，又叫去分化。
菊花组织培养
生物体的每一个体细胞都含有该物种所特有的全 套遗传物质（全套基因）
基因的选择性表达
14
10
个
200多种
植物组织培养的基本过程是怎样的？
离体的植
物组织或 细胞 ( 外植体)
脱分化: 由高度分化的植物器官、组织或细胞产生
愈伤组织的过程，又称去分化。
5.消毒 在培养的整个过程中, 都需要是一个无菌环境。
二、实验操作
1.实验操作流程
制备MS固 体培养基
外植体 消毒
栽培
接种 培养 移栽
2.实验具体操作
（1）.制备MS固体培养基
实验室一般使用__4___℃保存的配制好的培养基母液 来制备
①配制各种母液
配制母液时, 大量元素浓缩___1_0__倍____ , 微量元 素浓缩___1_0_0_倍____ 。常温保存。激素类、维生素 类以及用量比较小的有机物可以按照_1_m__g_/_m__l __ 的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时, 需要根据各种母液的浓缩倍数, 计算用量。
➢3-5周之后, 诱导出的新叶片和芽。
(二)影响植物组织培养的因素
1.外植体的选取
阅读教材，思考影响植物组织培养 的△因不素同植有物哪的些组？织培养难度 差___别___很___大__
△同一种植物的不同组织培养难度__不__同_____
如菊花的组织培养, 一般选择__未__开__花___植株 茎__上__部__新__萌__生__的__侧__枝__。 对于同一种植物材料, 材料的___年__龄____、 _保__存__时__间__的__长__短_____等也会影响实验结果。
课题菊花的组织培养
是
。
答案：（1） aB Ab （2）纤维素酶 （3）聚乙二醇 （4）愈伤组织 （5）2 甲、乙两烟草品种旳花粉 48 AaBb 7/16
专题知识归纳
菊花旳组织培养
植物组 织培养
月季旳花药培养
概念：
原理：细胞旳全 基础：
能性
条 件 ： 脱分化
再分化
植物组织培养旳基本过 外植体
愈伤组织
胚状体
程：
外植体旳选择
• 2.你能说出MS培养基中多种营养物质旳作用吗？ 同专题2中微生物培养基旳配方相比，MS培养基 旳配方有哪些明显旳不同？
提醒：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所 必需旳无机盐；蔗糖提供碳源，同步能够维持细 胞旳渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了 满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响 后所产生旳特殊营养需求。微生物培养基以有机 营养为主。与微生物旳培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物涉及植物生长 必须旳大量元素和微量元素两大类。
• 取甲乙两品种旳花粉分别培养成植株，将它们旳叶肉细胞制成原 生质体，并将两者相混，使之融合，诱导产生细胞团。然后，放 到不小于800勒克斯光照下培养，成果有旳细胞团不能分化，有 旳能分化发育成植株。请回答下列问题：
• （1）甲、乙两烟草品种旳花粉旳基因型分别为 和 。
• （2）将叶肉细胞制成原生质体时，使用 破除细胞壁。
• 3．基因型为AaBb旳水稻（24条染色体）旳花药经过无菌操作， 接入试管后，在一定条件下培养形成试管苗。
• （1）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成旳不规则旳细胞团，
愈伤组织形成中，必须从培养基中取得
和小分子有机
物等营养物质。
• （2）要增进花粉细胞分裂生长，培养基中应有
3.1菊花的组织培养
大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖 等
培养基中的各种成分的作用是什么？
大量元素和微量元素提供植物细胞需要 的各种无机盐；蔗糖提供碳源的同时维 持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质 主要是满足离体植物细胞的特殊营养物 质需求
专题3 植物组织培养技术
课题一 菊花的组织培养
细 胞 分裂
细 胞 分 化
一、基础知识 （1）细胞的分化
概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在 形态、结构、生理功能上发生稳定 性差异的过程 .
本质：基因选择性表达
细胞分化的特点： （1）持久性：
是一种持久性的变化，它发生在生物体的整 个生命过程中,在胚胎期达到最大限度
四、实验操作
（哪6步？） 1、配制各种母液（大量元素、微量元素 各浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）
2、配制培养基（菊花组培是否添加植物激
素？）
制备MS固 体培养基
3、灭菌（哪种灭菌方法？）
外植体消毒
接种
流水冲洗—无菌纸吸干—70%酒精—无
菌水冲洗—无菌纸吸干—0.1%氯化 培 养
注 将直菊意接汞 （花接移流—茎种栽无水段时到菌是插的土水为入各壤冲消培种中洗毒养无吗至吗基菌？少？时操三能特作次消别。之毒应上的注是意什什么么？？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析 （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 （三）是否进行了统计、对照与记录 （四）生根苗的移栽是否合格
菊花的组织培养技术汇总
嫁接方法有枝条嫁接和块茎嫁接两种。
（三）快速繁殖技术
二、培养程序（二）培养程序
1.外植体的选择 2.外植体的处理、接种与初代培养 3.增殖与继代培养 4.壮苗与生根培养 5.驯化移植
1.外植体选择
蝴蝶兰的组织培养外植体有茎尖、茎段、叶片、花 梗腋芽、花梗节间、根尖等，各部位都能诱导成功， 只是难易程度不一。
用花梗腋芽或花梗节间作外植体，容易诱导，外 植体表面灭菌成功率高，是最合适的外植体取样部位。
1.外植体的选择与接种
以幼枝切段为外植体：取直径为 5～ 15mm的当年枝条，整理成长度为2～2.5cm左右 的小段。表面消毒后接种到诱导培养基上。
2.初代培养
外植体接种到诱MS+BA0.5mL+NAA0.1mg ／L上，置25℃±2℃培养间进行培养。15d左 右即可萌发出嫩芽。
3.增殖与继代培养
2.外植体消毒与接种
剪取1～2cm长的芽，剥去易除叶片，在自来水 下冲洗1h左右，于超净工作台上进行消毒灭菌。 把消毒好的芽放在解剖镜下进行仔细剥离，剥去 幼叶和叶原基，露出圆滑的半球形生长点，用解 剖刀仔细切取带有1～2个叶原基的茎尖（0.2～ 0.3mm)，迅速接种到培养基达2～3cm时，将培 养瓶放置于有明亮散射光的温室进行炼苗，15d后 即可打开瓶盖再放置2～3d。移栽前洗净苗根部的 培养基，移栽于预先消毒过的基质中。大花蕙兰 对基质的要求不太严格，泥炭土与蛭石的混合物、 碎陶粒、水苔都可作为基质，小苗移栽后，只要 注意保湿、通风，就能正常生长，1个月后每周浇 一次稀释的营养液，移栽成活率可达95%。
（2）无根嫩茎直接插植到 基质中生根。剪取2～3 cm无根 苗，插植到珍珠岩或蛭石的基 质中，基质事先用生根激素溶 液浸透，l0d后生根率可达95 ％～100％。
菊花组织培养(1)
？
思考
在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。
菊花组织培养(1)
三、结果分析与评价
1. 外植体在培养过程中可能会被污染， 你认为造成污染的原因有哪些？ 培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底； 接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。
菊花组织培养(1)
？
思考
培养过程中为什么需要进行光照？
在培养过程中，是脱分化、再分化的 过程，随着芽和根的形成，就具有了 自养的能力，是由细胞到一个个体的 演变过程
菊花组织培养(1)
（5）.移栽
移栽生根的试管苗之前，应 先打开封口膜，在培养间生 长几日；然后用流水清洗 _根__部_培__养__基___，将幼苗移植 到__消__过_毒__的__蛭__石__或_珍__珠__岩__ 等环境中生活一段时间，进 行壮苗。最后进行露天栽培。
（6）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适
时浇水、施肥，直至开花.
菊花组织培养(1)
？
思考
在植物组织培养的过程中，为什么 要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求 无菌操作？
植物组织培养所利用的植物材料 体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。 用于植物组织培养的培养基同样适合于某些 微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。 而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致 实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。
②消毒流程：
流水 冲洗
酒精
无菌水
氯化汞
无菌水
浓度__7_0_%__ 摇动_2_～__3_次 时间_6_～__7_s
菊花的组织培养2
有以下优点：
• （1）快速。
• 采用常规的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生产几株或
几十株，但用组织培养的方法则每年可以繁殖出几万甚至数百
万的小植株。
• （2）周年生产。花卉组织培养快速繁殖是在实验室中进行，因
条件可控，所以不受季节限制，可以全年进行连续生产。而常
规的无性繁殖则受季节限制，只能在花卉生长季节进行繁殖。
•答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复 。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培 养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养 ，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
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•（四）培养
•1、愈伤组织的培养
•从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
• （3）经济效益高。花卉组织培养快速繁殖所需要的空间小，在
一个200平方米的培养室内一年可生产试管苗上百万株。如按每
株1元计算，每年产值上百万元。
• （4）以组织培养繁殖的种苗与母株有著相同的遗传基因。所以
使用这项技术可让优良的品种不断地延续。
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•二、实验操作 •（一）制备MS固体培养基
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•讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专 题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配 方有哪些明显的不同？
•答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持培养 基的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了 满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响 后所产生的特殊营养需求。
菊花的组织培养
D．任何枝条均可
谢谢大家！
菊花的组织培养
大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。 有没有不用种子来培育植物的方法呢？ 扦插
组织培养
压条 嫁接
菊花的组织培养
一、基础知识
1、植物的组织培养
（1）细胞的分化 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异
的过程 。
a、特点： ➢持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期达到最大限度； ➢稳定性：细胞分化是稳定的，一般不可逆转； ➢全能性：已分化的细胞，仍具有发育的潜能。
原理:细胞的全能性
离体组织或器官或细胞 脱分化
愈伤组织
再分化
根芽
移栽
植株
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。
（二）影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 ➢不同植物的组织培养难度不同 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易，枸杞愈伤组织的芽诱导比较难。
➢同一种植物的不同组织培养难度不同 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果。
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培
3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
三、课题延伸 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
植物组织培养过程:
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在 18~22℃，并且每日用日光灯光照12h。
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。
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课题1菊花的组织培养
一、植物组织培养的相关概念和基本过程
1、(1)细胞全能性的表达：________的植物组织或细胞，在一定的____________、________和________________的作用下，发育成完整植株的过程。
(2)细胞分化：在植物的________过程中，细胞在________、________和____________上都会出现________的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
(3)植物组织培养的基本过程
离体的植物器官、组织或细胞(又叫________)――→ 愈伤组织――→ 胚状体、丛芽等
――→ 生长 新个体
①愈伤组织的特点：细胞________________，是一群________________的呈________________的薄壁细胞。
②脱分化(去分化)：由____________的植物组织或细胞产生____________的过程。
③再分化：由________________________重新分化成根或芽等器官的过程。
(4)条件：________的植物组织或细胞，在一定的________、________和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。
离体的植物组织或细胞叫做________。
2．影响植物组织培养的因素
(1)培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度____________。
对于同一种植物材料，材料的________、________________等也会影响实验结果。
因此菊花的组织培养，一般选择________________的茎________部________的侧枝。
(2)营养物质的影响：常用的________培养基，主要成分包括____________、____________、________以及蔗糖等。
其中____________和____________提供植物细胞所必需的无机盐；________提供碳源，维持细胞渗透压。
(3)植物激素的影响：MS 培养基常需添加植物激素。
其中________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的________、________________以及____________等，都会影响实验结果。
(4)环境因素的影响：________、________、________等条件也能影响植物组织培养。
类、培养基的营养条件、植物激素的种类和比例以及适宜的PH 、温度等。
二、实验操作过程：
1.制备
实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备
（1）配制各种母液。
配制母液时，大量元素浓缩__________ ，微量元素浓缩__________ 。
常温保存。
激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。
用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。
（2）配制培养基。
配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。
__________，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__________。
（3）灭菌。
高压蒸汽灭菌
2．外植体
选取菊花茎段时，要取____________________。
无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。
对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_______________；另一方面还要考虑植物材料的__________。
不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。
一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_________灭菌不当。
过程：流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗①过程
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2～3次，持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次
3、接种
接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。
所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌
4、培养
接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。
培养期间定期消毒，温度控制在18-22℃，并且每天用日光灯光照12h
5、移栽
6、栽培
附：一般来说，容易进行__________的植物，也容易进行组织培养。
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