本实验2凝集反应课件
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实验二
一、凝集反应 二、沉淀反应 三、免疫器官的组织结构观察
12
目的要求
（一）掌握凝集反应、沉淀反应原理、 方法及用途。 （二）熟悉实验的操作手法。
一 、凝集反应
定义：颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应 的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两
者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成
肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。
分类： 直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制反应
直接凝集反应
细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解质 存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性结 合，形成肉眼可见的凝集块。
玻片凝集：
• ABO血型鉴定
1、ABO血型鉴定
ABO血型系统
原理： 人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细
胞膜上有A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB 型有A、B两种抗原，O型则不含A、B抗原。
用已知的抗A或抗B抗体与受检者红细胞混合， 抗A和或抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而 引起红细胞凝集，根据其凝集状况判定受试者的血 型。
实验材料
1、抗A 及抗B抗体、生理盐水； 2、玻片、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、
记号笔等。
步骤
注意事项
1.消毒处干燥后再取血
2.滴管不可与抗体液面接触
3.牙签不可混用
红细胞血悬1液滴 NS 10滴
抗A 1滴
抗B 1滴
A
B
红细胞悬液1-2滴
结果观察
抗A
抗B
A型
B型
AB型
O型
二、沉淀反应
原理
可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体 特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定 温度的条件下，经过一定的时间，可形成肉眼可见 的沉淀物。
沉淀反应可在液体中进行，如 环状沉淀。 沉淀反应大多用半固体琼脂凝胶为介质进行琼脂扩散或称免疫扩散。即 可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散并相遇，在比例合适处形成可见的白色 沉淀。
• 环状沉淀 •免疫扩散技术：单向免疫扩散、 双向免疫扩散 •电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳
环状沉淀反应
将少量高浓度的抗体置于小试管底层，再将抗原 沿管壁徐徐加入，使之重叠于抗体的上面，室温下 静置数分钟，可以看到在抗原与抗体的接触面形成 白色沉淀环。
此试验常用于抗原的定性试验。
阳性
抗原 抗体
阴性
NS 抗体
1、单向免疫扩散（示教）
将某种特异性抗体混合于琼脂中，再于其上打孔，将一 定量的抗原加入孔中。抗体不会再扩散 ，孔中抗原向四周呈 辐射状扩散。如抗原与已知的抗体相对应，在两者比例适合 处即出现由IC所形成的沉淀环，直径大小与抗原浓度成正比。
定性和定量
2、双向免疫扩散（示教）
可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，
两者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两
者相遇即发生特异性结合，并在比例合适处形成
白色沉淀线。
抗体
抗原
此试验可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体）。
实验器材
1、1.2％生理盐水琼脂。 2、待检抗原血清、肝癌病人AFP阳性血清。 3、AFP诊断血清（含AFP抗体）。 4、载玻片、琼脂板、打孔器、微量加样器、吸管等。
• 实验步骤
1
6
2
5
3
4
24h
1
6
2
5
3
4
（1）
孔：抗体（AFP诊断血清）；
（2）1、4孔：阳性对照（AFP阳性血清）；2、3、5、6孔
为 待检抗原；
（3）琼脂板放入湿盒内，24h后检查结果。
3、对流免疫电泳实验
（在双向扩散基础上加电泳的方法）
原理
带电的胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有 关。抗原在pH8.6的缓冲液中带负电荷，由阴极向阳 极移动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量 又大，因为电渗作用反而向负极倒退。当抗原与抗体 在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉 淀线。
由于抗原、抗体在电场中定向移动，被限制了多方向自由 扩散的倾向，因而提高了实验敏感度。而且，沉淀线出现 较快，可在1小时之内观察结果，所以可用于快速诊断。
材料
1、抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检血清。 2、微量加样器、打孔器、电泳仪等。
实验步骤 ＋
1
2
－
1
2
已知阳性血清
3
4
抗AFP血清
3
4
抗AFP血清
待检血清
1、制备琼脂板，按照模板打孔 2、加样：分别向1、3孔内加入抗AFP血清；向2孔内加肝癌病人 AFP阳
性血 清作为阳性对照，4孔内加病人待检血清。 3、通电：将琼脂板置于电泳槽内，抗原端放阴极侧，抗体放阳极侧，固定
电压5~6v/cm，通电45min左右。
结果观察：
1
2
3? 4
注意事项
1. 打孔时将孔内琼脂全部吸出、尽量不破坏孔边缘琼脂 2. 加样时不可溢出或加入气泡，不可将琼脂吹起 3. 电泳时分清正、负极 （试验完毕请将琼脂弃入垃圾袋）
三、胸腺、淋巴结、脾脏组织结构的观察
免疫器官
法氏囊（Bursa of Fabricius）
1.胸腺（Thymus）:
位于胸腔纵隔上部、胸骨后方，分左右两叶，青春期后开始缓慢退化。
胸腺的结构
胎儿胸腺 HE 4×10
胸腺的结构 胸 腺 HE染色 10×40
小叶间隔 皮质
髓质
2.淋巴结（lymph node）
淋巴结的结构
被膜 淋巴小结 被膜下淋巴窦
深（副）皮质区
淋巴结的结构
被膜 被膜下淋巴窦
淋巴滤泡
深皮质区 （副皮质区）
髓索 髓窦
淋巴小结的结构----生发中心
小结帽：小淋巴 细胞为主
明区：中淋巴 细胞为主
暗区：大淋巴 细胞为主
3.脾的基本结构
脾脏的基本结构:白髓
红髓 边缘区（T、B、M） 中央动脉与动脉周围淋巴鞘
脾小体（B细胞区）
实验报告
ABO血型鉴定的原理、步骤、结果及结果分析 对流免疫电泳的原理、步骤、结果及结果分析 绘制淋巴结、脾脏、胸腺镜下所见。
（HE染色，10×10） 用红蓝铅笔认真画图！
实验报告：周一 or 周五 地点：实验楼 21207
请各位同学清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。 值日生：实验材料、地面的清洁等。注意门窗，水电开关
下次试验内容：
补体参与的反应：（*免疫血清制备与应用之3） 补体的溶血反应；补体结合实验
T细胞数量的测定:E花环形成实验 T细胞功能测定：淋巴细胞转化试验
临床案例 患者陈×，男性，30岁，未婚。自述有静脉注射毒品史2年余，1年前体重明 显减轻、近3月发热、干咳，因近日自感觉呼吸不畅，并伴进行性视力下降， 到医院就诊。 体格检查：腿部及手臂皮肤多个紫褐色结节，直径约lmm至lcm大小不等、 触痛；口咽部白膜合并溃疡；全身浅表淋巴结肿大；肺部可闻及干啰音。 眼底检查显示视网膜动脉充血、视乳头水肿出血。胸片显示肺门周围间质 性肺浸润。支气管肺泡灌洗液中可见成团微生物，银染阳性。HIV抗体阳性。 CT扫描轻度脑萎缩。口腔涂片发现念珠菌。HIV mRNA水平为20 000拷贝 ／m1。 临床诊断：艾滋病。 问题：1.该病人需要检测T淋巴细胞的数量和功能，有哪些方法进行测定？ 并简述其原理 要求：1.查资料，T细胞数量、功能的测定方法有哪些？（至少2种方法） 2.每人都要求去查资料，可以是word打印，宋体、小四号、1.5倍行 距，2000字左右。 组长负责或安排同学归纳整理。 以小组为单位，下次实验课时上交预习报告。
Thank you for your attention! See you next time!
一、凝集反应 二、沉淀反应 三、免疫器官的组织结构观察
12
目的要求
（一）掌握凝集反应、沉淀反应原理、 方法及用途。 （二）熟悉实验的操作手法。
一 、凝集反应
定义：颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应 的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两
者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成
肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。
分类： 直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制反应
直接凝集反应
细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解质 存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性结 合，形成肉眼可见的凝集块。
玻片凝集：
• ABO血型鉴定
1、ABO血型鉴定
ABO血型系统
原理： 人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细
胞膜上有A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB 型有A、B两种抗原，O型则不含A、B抗原。
用已知的抗A或抗B抗体与受检者红细胞混合， 抗A和或抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而 引起红细胞凝集，根据其凝集状况判定受试者的血 型。
实验材料
1、抗A 及抗B抗体、生理盐水； 2、玻片、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、
记号笔等。
步骤
注意事项
1.消毒处干燥后再取血
2.滴管不可与抗体液面接触
3.牙签不可混用
红细胞血悬1液滴 NS 10滴
抗A 1滴
抗B 1滴
A
B
红细胞悬液1-2滴
结果观察
抗A
抗B
A型
B型
AB型
O型
二、沉淀反应
原理
可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体 特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定 温度的条件下，经过一定的时间，可形成肉眼可见 的沉淀物。
沉淀反应可在液体中进行，如 环状沉淀。 沉淀反应大多用半固体琼脂凝胶为介质进行琼脂扩散或称免疫扩散。即 可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散并相遇，在比例合适处形成可见的白色 沉淀。
• 环状沉淀 •免疫扩散技术：单向免疫扩散、 双向免疫扩散 •电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳
环状沉淀反应
将少量高浓度的抗体置于小试管底层，再将抗原 沿管壁徐徐加入，使之重叠于抗体的上面，室温下 静置数分钟，可以看到在抗原与抗体的接触面形成 白色沉淀环。
此试验常用于抗原的定性试验。
阳性
抗原 抗体
阴性
NS 抗体
1、单向免疫扩散（示教）
将某种特异性抗体混合于琼脂中，再于其上打孔，将一 定量的抗原加入孔中。抗体不会再扩散 ，孔中抗原向四周呈 辐射状扩散。如抗原与已知的抗体相对应，在两者比例适合 处即出现由IC所形成的沉淀环，直径大小与抗原浓度成正比。
定性和定量
2、双向免疫扩散（示教）
可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，
两者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两
者相遇即发生特异性结合，并在比例合适处形成
白色沉淀线。
抗体
抗原
此试验可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体）。
实验器材
1、1.2％生理盐水琼脂。 2、待检抗原血清、肝癌病人AFP阳性血清。 3、AFP诊断血清（含AFP抗体）。 4、载玻片、琼脂板、打孔器、微量加样器、吸管等。
• 实验步骤
1
6
2
5
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4
24h
1
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（1）
孔：抗体（AFP诊断血清）；
（2）1、4孔：阳性对照（AFP阳性血清）；2、3、5、6孔
为 待检抗原；
（3）琼脂板放入湿盒内，24h后检查结果。
3、对流免疫电泳实验
（在双向扩散基础上加电泳的方法）
原理
带电的胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有 关。抗原在pH8.6的缓冲液中带负电荷，由阴极向阳 极移动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量 又大，因为电渗作用反而向负极倒退。当抗原与抗体 在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉 淀线。
由于抗原、抗体在电场中定向移动，被限制了多方向自由 扩散的倾向，因而提高了实验敏感度。而且，沉淀线出现 较快，可在1小时之内观察结果，所以可用于快速诊断。
材料
1、抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检血清。 2、微量加样器、打孔器、电泳仪等。
实验步骤 ＋
1
2
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1
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已知阳性血清
3
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抗AFP血清
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抗AFP血清
待检血清
1、制备琼脂板，按照模板打孔 2、加样：分别向1、3孔内加入抗AFP血清；向2孔内加肝癌病人 AFP阳
性血 清作为阳性对照，4孔内加病人待检血清。 3、通电：将琼脂板置于电泳槽内，抗原端放阴极侧，抗体放阳极侧，固定
电压5~6v/cm，通电45min左右。
结果观察：
1
2
3? 4
注意事项
1. 打孔时将孔内琼脂全部吸出、尽量不破坏孔边缘琼脂 2. 加样时不可溢出或加入气泡，不可将琼脂吹起 3. 电泳时分清正、负极 （试验完毕请将琼脂弃入垃圾袋）
三、胸腺、淋巴结、脾脏组织结构的观察
免疫器官
法氏囊（Bursa of Fabricius）
1.胸腺（Thymus）:
位于胸腔纵隔上部、胸骨后方，分左右两叶，青春期后开始缓慢退化。
胸腺的结构
胎儿胸腺 HE 4×10
胸腺的结构 胸 腺 HE染色 10×40
小叶间隔 皮质
髓质
2.淋巴结（lymph node）
淋巴结的结构
被膜 淋巴小结 被膜下淋巴窦
深（副）皮质区
淋巴结的结构
被膜 被膜下淋巴窦
淋巴滤泡
深皮质区 （副皮质区）
髓索 髓窦
淋巴小结的结构----生发中心
小结帽：小淋巴 细胞为主
明区：中淋巴 细胞为主
暗区：大淋巴 细胞为主
3.脾的基本结构
脾脏的基本结构:白髓
红髓 边缘区（T、B、M） 中央动脉与动脉周围淋巴鞘
脾小体（B细胞区）
实验报告
ABO血型鉴定的原理、步骤、结果及结果分析 对流免疫电泳的原理、步骤、结果及结果分析 绘制淋巴结、脾脏、胸腺镜下所见。
（HE染色，10×10） 用红蓝铅笔认真画图！
实验报告：周一 or 周五 地点：实验楼 21207
请各位同学清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。 值日生：实验材料、地面的清洁等。注意门窗，水电开关
下次试验内容：
补体参与的反应：（*免疫血清制备与应用之3） 补体的溶血反应；补体结合实验
T细胞数量的测定:E花环形成实验 T细胞功能测定：淋巴细胞转化试验
临床案例 患者陈×，男性，30岁，未婚。自述有静脉注射毒品史2年余，1年前体重明 显减轻、近3月发热、干咳，因近日自感觉呼吸不畅，并伴进行性视力下降， 到医院就诊。 体格检查：腿部及手臂皮肤多个紫褐色结节，直径约lmm至lcm大小不等、 触痛；口咽部白膜合并溃疡；全身浅表淋巴结肿大；肺部可闻及干啰音。 眼底检查显示视网膜动脉充血、视乳头水肿出血。胸片显示肺门周围间质 性肺浸润。支气管肺泡灌洗液中可见成团微生物，银染阳性。HIV抗体阳性。 CT扫描轻度脑萎缩。口腔涂片发现念珠菌。HIV mRNA水平为20 000拷贝 ／m1。 临床诊断：艾滋病。 问题：1.该病人需要检测T淋巴细胞的数量和功能，有哪些方法进行测定？ 并简述其原理 要求：1.查资料，T细胞数量、功能的测定方法有哪些？（至少2种方法） 2.每人都要求去查资料，可以是word打印，宋体、小四号、1.5倍行 距，2000字左右。 组长负责或安排同学归纳整理。 以小组为单位，下次实验课时上交预习报告。
Thank you for your attention! See you next time!