病原生物学实验设计论文

病原生物学实验设计论文论文题目：（尿路感染的病原生物学试验）研究内容摘要（200字以内）目的：根据此病人的症状对其清洁尿进行细菌学检查、鉴定和药敏试验，确定病原菌的种类。

方法：实验室检查，一般细菌学检查，通常采用一般的细菌分离培养，假菌丝酵母菌培养和L 型培养等。

药敏试验，通常采用制片扩散法，出现反应后读出结果。

结果：（1）尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数>105CFU/ml提示可能为泌尿系统感染。

（2）细菌及假丝酵母菌培养菌落计数104~105/ml时，需要结合患者的临床症状分析是否为泌尿系统感染。

结论：通过以上实验过程，基本可确定该致病菌的种类等。

从而对此病症及其治疗方法做准确判断。

关键词（3-5个）：尿路感染病原菌分离鉴定药敏试验一、选题的目的和意义（主要说明：进行研究的必要性、预期达到的目的、实际应用价值和学术意义）（600字以内）随着医疗卫生事业的发展，人们越来越重视自己的健康问题，在这其中，尿路感染和尿道炎越来越受到人们的重视，尿路感染是由细菌、真菌（极少数可由原虫、病毒）直接侵袭所引起。

这种病虽然并不是很严重，但是若不够重视的话会引起很严重的后果。

比如女性尿道炎如果不及时治疗会引起不孕。

同时，尿路感染还会引起很多严重的并发症：如肾乳头坏死，肾周围炎和肾周围脓肿，感染性肾结石，革兰氏阴性杆菌败血症等，这些并发症往往比原症状引起更严重的后果，一次不得不引起人们的重视。

我们从病原学的角度来进行研究，对其清洁中段尿进行细菌学检查、鉴定及药敏试验，预期检查出该患者疾病的致病菌的种类及其致病性和药敏反应。

临床上的尿路感染和尿道炎的诱发因素有很多，由于泌尿、生殖系统在解剖、生理方面的特点，使致病菌在正常情况下不易停留、繁殖，故不易引起感染。

但是，一旦泌尿、生殖系统发生病理改变，感染的防御功能被破坏，致病菌乘虚而人，从而诱发感染。

诱发感染的因素主要有四方面：梗阻因素，机体抗病能力减弱，医源性因素，女性尿道特点。

同时，感染因素也很多，常见的有以下四种：上行感染，血行感染，淋巴道感染和直接感染。

此研究可以为临床对尿路感染和尿道炎的快速诊断提供依据，同时在在学术方面也为细菌学的研究提供例子，同时也有可能为细菌学的发展以及尿路感染及尿道炎的诊断和治疗方面提供新的方法。

二、国内研究现状：（1000字以内）尿路感染（Urinary tract infection UTI)是常见的医院感染，仅次于呼吸道感染，占医院感染的30%~40%。

目前，据研究引起泌尿道感染的主要病原菌依次为大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、肠球菌属、克雷伯菌属、阴沟肠杆菌及酵母样真菌等。

这些细菌大多为条件致病菌，在机体免疫力低下及先天性泌尿生殖系异常、结石、前列腺增生等疾病，引起尿液滞留，降低膀胱防御细菌的能力；另外，随着泌尿系统器械检查及导尿管插管增多等原因致尿道局部损伤；妇女尿道较短且距肛门较近等生理原因有关。

值得注意的是，由于近年来激素、免疫抑制剂及大剂量广谱抗生素的广泛应用，酵母样真菌感染呈上升趋势。

目前体外药敏试验表明，大肠埃希菌对阿米卡星、头孢唑啉类药物敏感性较好；其它肠杆菌科细菌对喹诺酮类、氨基糖苷类较为敏感；葡萄球菌属对万古霉素、环丙沙星、哌拉西林较好；对肠球菌属以万古霉素和哌拉西林为好。

根据国内研究现状，治疗尿路感染的主要措施有:1.应用抗菌药物抗菌药物是国内外公认的短期内防治UTI的有效方法，主要分为全身性应用和局部性应用两种。

全身应用抗菌药物可杀灭尿液中的细菌，延缓UTI的发生。

经验治疗UTI的静脉用药物有头孢曲松、头孢他啶、内酰胺酶抑制剂复方(如阿莫西林／克拉维酸、氨苄西林／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦等)、氨基糖苷类、氟喹诺酮类及碳青霉烯类等抗菌药物。

局部应用抗菌药物常采取涂抹抗菌药物的方法。

习惯采用青霉素、氯霉素、利福平、二甲胺四环素和葡萄糖胺基等，能有效防止细菌及炎性产物的黏附，预防早期生物膜的形成。

2.增加营养补充水分UTI的发生与基础疾病有关，慢性呼吸系统疾病、糖尿病、严重胸脑外伤和心血管系统疾病患者在留置导尿管期间容易发生菌尿症，这些患者大多年老体弱、自身免疫功能低下，并常伴有其他疾病，病情较为严重和复杂，在侵人性医疗操作时，很容易诱发外源性或内源性感染。

3. 应用物理因子微波和超短波作用于局部组织时可通过血液的加速，使血液量增加，氧分压提高，白细胞及淋巴细胞浸润，提高组织的抗炎能力，并提高机体的免疫功能；超声波技术可以模拟体外超声碎石的方法，将生物膜击碎，使其脱落；红外线和紫外线有使局部组织升温，消毒杀菌的功能。

物理因子的共同特点是没有药物不良反应或手术治疗对组织的破坏，这是目前为止最理想的防治UTI的方法。

三、拟采取的技术路线及实验方案（1000字以内）实验诊断一、一般实验室检查对该患者做选择尿液常规实验，应用同时检测多个项目的试纸条，检测尿液酸碱度、比重、蛋白、葡萄糖、酮体、胆红素等。

尿液常规检查还应同时进行尿液沉渣检测，包括细胞(白细胞、红细胞、上皮细胞等)、尿结晶体，将尿液离心后在光学显微镜下观察，或利用尿液沉渣自动分析仪直接对尿液进行检测。

二、细菌学与真菌学检查（一）标本采集清洁中段尿采集：采集晨起第一次尿液在使用抗生素之前采集。

留尿前先用肥皂水或清洗液清洗外阴部，再用0.1%清洁液（如新洁尔灭等）消毒尿道口，但不可用抗生素和肥皂等清洗尿道口，以免影响细菌生存力。

在排尿过程中，弃去前段排出的尿液，留取中段尿10ml于戴盖灭菌容器内，立即送检，2h内接种培养基。

（二）直接显微镜检查（1）一般细菌检查直接将新鲜中段尿涂片后进行革兰染色，如果油镜下平均每个视野细菌数大于等于1个，则提示细菌定量培养一般大于等于105CFU/ml。

进一步无菌操作取尿液5~8ml 放入无菌试管内，经3000r/min离心15分钟，弃去上清液，取沉渣涂片，干燥后固定，进行革兰染色，油镜下观察，根据革兰染色阳性或阴性、球菌或杆菌、排列方式等进行初步报告。

报告方式一般为“找到革兰x性x菌xx排列，疑似xxx菌。

（2）假丝酵母菌检查取尿沉渣涂片于玻片上，盖上盖玻片，在高倍镜下观察。

如果沉渣较多可滴加10g/l的氢氧化钾溶液数滴消化后在观察。

如果观察到发亮的软圆形真菌孢子，且伴有出芽现象或管状假菌丝，则可初步报告“找到酵母样细胞，形似假丝酵母菌”。

(三) 细菌培养（1）一般细菌培养采用定量接种环取样涂布法：选用可重复使用的金属环（常为铂金环或者镍铬合金环），也可使用一次性的已灭菌处理的塑料环，一般使用1μl或10μl定量接种环。

蘸取尿液前，先漩涡混匀尿液，将接种环垂直插入尿液中，整个环刚好进入尿液下，取出接种环涂抹均匀，不要将接种环过深插入尿液。

然后将标本接种于血平板及肠道弱选择性培养基（如中国蓝、伊红美蓝或可抑制变形杆菌迁徙生长的CLED琼脂平板）上，35℃、5%~10%CO2环境中孵育18~24h，计数平板上的菌落数，乘以稀释倍数即为每毫升尿液中的菌落数。

如果培养18~24h平板上无细菌生长，则继续培养至48h，若仍无细菌生长，则报告细菌培养阴性。

（2）假菌丝酵母菌培养取尿液定量接种于假丝酵母菌选择性平板，35℃培养18~24h，如有可疑菌落生长，进行涂片革兰染色证实为真菌，则在继续鉴定到种。

(3)细菌L型培养将尿液同时接种于血液琼脂平板、高渗液体及固体双相平板上，35℃培养，如果高渗液体中出现颗粒状生长，可黏附于管壁固体培养基上，则可吸取颗粒在显微镜下观察，如可疑，则进一步按细菌L型，继续鉴定。

细菌L型生长较缓慢，一般需观察一周，仍无细菌生长，则报告细菌L型培养阴性。

(四)鉴定1、临床常见葡萄球菌的主要鉴别特征见表2表2（1）血浆凝固酶试验（2）耐热核酸酶试验（3）磷酸酶试验（4）吡咯烷酮芳基酰胺酶试验2、肠杆菌科与其他革兰阴性杆菌区别见表3表3（1）克氏双糖铁琼脂（KIA）接种（2）IMViC试验3、假丝酵母菌的共同特征：芽生孢子和假菌丝，酵母样菌落。

白假丝酵母菌的鉴定表4表4应用商品化的科码嘉念珠菌显色培养基。

将样本接种于显色培养基上，30℃培养48~72h，根据菌落颜色即可鉴别。

药敏试验（一）试验方法纸片扩散法(改良Kirby -Bauer 法，K-B 法)(二)操作方法1.制备接种菌液挑选琼脂平板上、形态相同的菌落移种于M-H 液体培养基中，置35℃水浴箱中孵育4 h，校正浊度至0.5 号麦氏管浊度。

2. 接种平板制备好的接种菌液必须在15mm 内使用。

用灭菌的棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。

用拭子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿平板周边绕两圈，保证涂布均匀。

3. 贴纸片须待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。

首先选择菌种的敏感药物纸片，用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面。

用镊子尖压一下，使其贴平，纸片一旦贴下就不再拿起。

因纸片中的药物已扩散到琼脂中。

每张纸片间距不少于24 mm ，纸片中心距平皿边缘不少于15 mm。

直径为90 mm 的平板最好贴6 张。

贴上纸片后，须在15 min 内放(35 ± 2)℃孵箱中培养。

4. 孵育必须用35℃:孵箱，平板在孵箱内最好单独摆放，不超过两个叠在一起，否则中间的平板达不到孵箱温度而产生预扩散的作用，平板孵育规定时间(一般为18 - 24 h) 后，读取结果。

注：1、葡萄菌属药敏试验常规首选抗生素为苯唑西林、青霉素、阿奇霉素、克林霉素、甲氨苄啶、万古霉素。

肠杆菌属细菌药敏试验常规首选抗生素氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻吩、克拉维酸。

白假丝酵母菌药敏试验常规首选抗生素为两性霉素B、制霉菌素、5-氟胞嘧啶。

2、细菌L型的药敏试验方法与细菌型相同，但由于临床上所分离的L型大多数不稳定，若移种于普通培养基上很容易回复为原菌。

所以在测定药敏时必须应用高渗L型培养基，否则不是L型不生长，就是L型已回复，测到的结果不能反映L型的药敏情况。

四、预期结果（600字以内）尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数>105CFU/ml提示可能为泌尿系统感染。

尿液中一般细菌及假丝酵母菌菌落计数<104CFU/ml提示可能为采集时污染。

尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数104~105/ml时，需要结合患者的临床症状分析是否为泌尿系统感染。

一般一份尿液中多检出一种病原菌，但是约10%的尿路感染患者，可能会在同份尿液中分离出2种细菌，并且都是病原菌。

如果尿液中培养出3种或以上细菌及假丝酵母菌，且没有优势菌，则可能为标本在采集时泌尿生殖道污染所致，建议患者重留标本。

1、葡萄球菌的主要特征是：革兰染色阳性球菌，不规则葡萄串珠排列；菌落圆形、凸起、不透明，产生金黄色、白色或柠檬色等脂溶性色素，在含有10%~15%的NaCl平板中生长；触酶阳性。