无菌检查法培训课件
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无菌检查法培训-PPT课件
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
Βιβλιοθήκη 菌悬液在室温下放置应在 2小时内使用，若保 存在2～8℃可在 24小时内使用。黑曲霉孢子 悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内 使用。 培养基接种 取每管装量为 12ml的硫乙醇酸 盐流体培养基 9支，分别接种小于100 cfu的金 黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌、生孢梭菌各 2支，另 1支不接种作为空白 对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马 丁培养基5支,分别接种小于 100 cfu的白色念 珠菌、黑曲霉各 2支，另 1支不接种作为空白 对照，培养5天。逐日观察结果。 结果判定 空白对照管应无菌生长，若加菌的 培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度 检查符合规定。
薄膜过滤法，应增加 1/2的最小检验数量作阳性对 照用；若采用直接接种法，应增加供试品 1支（或 瓶）作阳性对照用。）
表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽 验样品的最少检验数量
无 菌 检 查 法
表3. 固体制剂最少检验量及上市抽 检样品的最少检验数
金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕 生孢梭菌( Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕 白色念珠菌( Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉( Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
无菌检查法及其验证
15－25
供试品溶液的制备
④非水溶性制剂供试品 取规定量，直接过滤或混合溶于含聚山梨酯80或其
它适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，立即过滤。 用含0.1%-1%聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3 次。滤膜于含或不含聚山梨酯80的培养基中培养。 培养基接种照水溶液供试品项下的方法操作。 其他类供试品： ⑤可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试 品 ⑥无菌气（喷）雾剂供试品 ⑦装有药物的注射器供试品 ⑧具有导管的医疗器具(输血、输液袋等)供试品
❖ 若供试品中任何1管显混浊并确证有菌生长， 判供试品不符合规定。
❖ 除非能充分证明，生长的微生物非供试品所含。 ❖ 当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果
无效：
15－30
❖ 对无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结 果不符合无菌检查法的要求；
❖ 回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素；
❖ 供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤 膜每次冲洗量为100ml，且冲洗量不超过1000ml，以避免 滤膜上的微生物受损伤。
❖ 过滤器应优先选择封闭式薄膜过滤），也可使用一般薄膜 过滤器。滤膜孔径不大于0.45μm，直径约为50mm。
15－21
供试品的无菌检 查法
❖ 检验数量 指一次检验所用供试品最小包装容器的数量 ❖ 采用薄膜过滤法应增加1/2的最小检验数量作为阳性对照；
❖试验同时应做空白对照
15－16
培养基说明
❖ 无菌检验培养基所能支持生长的微生物是有限的。 ❖ 微生物种类繁多，这些微生物有广泛的生长要求，如：营
养、温度和氧等。 ❖ 无菌检验培养基不可能支持所有微生物的生长，选择了支
持那些最有可能污染药品和在药品中生长的微生物的营养 的培养基。
供试品溶液的制备
④非水溶性制剂供试品 取规定量，直接过滤或混合溶于含聚山梨酯80或其
它适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，立即过滤。 用含0.1%-1%聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3 次。滤膜于含或不含聚山梨酯80的培养基中培养。 培养基接种照水溶液供试品项下的方法操作。 其他类供试品： ⑤可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试 品 ⑥无菌气（喷）雾剂供试品 ⑦装有药物的注射器供试品 ⑧具有导管的医疗器具(输血、输液袋等)供试品
❖ 若供试品中任何1管显混浊并确证有菌生长， 判供试品不符合规定。
❖ 除非能充分证明，生长的微生物非供试品所含。 ❖ 当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果
无效：
15－30
❖ 对无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结 果不符合无菌检查法的要求；
❖ 回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素；
❖ 供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤 膜每次冲洗量为100ml，且冲洗量不超过1000ml，以避免 滤膜上的微生物受损伤。
❖ 过滤器应优先选择封闭式薄膜过滤），也可使用一般薄膜 过滤器。滤膜孔径不大于0.45μm，直径约为50mm。
15－21
供试品的无菌检 查法
❖ 检验数量 指一次检验所用供试品最小包装容器的数量 ❖ 采用薄膜过滤法应增加1/2的最小检验数量作为阳性对照；
❖试验同时应做空白对照
15－16
培养基说明
❖ 无菌检验培养基所能支持生长的微生物是有限的。 ❖ 微生物种类繁多，这些微生物有广泛的生长要求，如：营
养、温度和氧等。 ❖ 无菌检验培养基不可能支持所有微生物的生长，选择了支
持那些最有可能污染药品和在药品中生长的微生物的营养 的培养基。
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无 菌 检 查 法
表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
1
无 菌 检 查 法
2
表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量
1
无 菌 检 查 法
2
表3. 固体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数
无 菌 检 查 法
五、实验材料的准备
培养基及稀释液 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
实验设备 过滤装置（无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子） 电子天平 压力蒸汽灭菌器 电热鼓风干燥箱 恒温培养箱 集菌仪
无 菌 检 查 法
5、供试品的准备
操作前，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，如果供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）向容器内导入无菌空气，再按无菌操作起开容器取出内容物。
无 菌 检 查 法
以上材料可以采用干热灭菌（只限于剪刀、镊子，灭菌时将剪刀和镊子装入专用灭菌器具内）或湿热灭菌。干热灭菌为160℃ 2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
无 菌 检 查 法
培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。
无 菌 检 查 法
202X
无Байду номын сангаас检查法培训
01.
无
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03.
检
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表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
1
无 菌 检 查 法
2
表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量
1
无 菌 检 查 法
2
表3. 固体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数
无 菌 检 查 法
五、实验材料的准备
培养基及稀释液 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
实验设备 过滤装置（无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子） 电子天平 压力蒸汽灭菌器 电热鼓风干燥箱 恒温培养箱 集菌仪
无 菌 检 查 法
5、供试品的准备
操作前，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，如果供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）向容器内导入无菌空气，再按无菌操作起开容器取出内容物。
无 菌 检 查 法
以上材料可以采用干热灭菌（只限于剪刀、镊子，灭菌时将剪刀和镊子装入专用灭菌器具内）或湿热灭菌。干热灭菌为160℃ 2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
无 菌 检 查 法
培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。
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微生物检验技术培训PPT课件
17
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
16
第16页/共80页
二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
24
第24页/共80页
二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
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培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
无菌检查法
修订为：“ 液体制剂最少检验量及上市抽验 样品的最少检验数量”。——明确液体制剂 最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验 数量见表2的第3列。 · 修订了表2下的 注: ——对供试品容器装 量不够接种两种培养基的情况，明确规定最 少检验数量应加倍。
表3
• 将表3原名称：“上市抽验样品（固体制 剂）的最少检验量”
的必检项目，为对所检供试品的质量负责， 对检验质量的负责，应对检出菌有一定的 证明。
● 理由（3） 全国微生物重点实验室的建立和发展，
以及现有微生物检定能力的证明，是药典 增加检出菌检定规定的基础建设和技术支 撑。
相信随着科技的进步、国家对药品安全的 关注，和我们对无菌检查法的深入研究及微 生物检定能力的发展，药典无菌检查法中增 加对检出菌的检定要求是必须的，也是能够 做到的！！
——美国药典中同时收载两种巯乙醇酸 盐流体培养基供选择，其中之一无刃天青 和琼脂。
引入思考：什么情况下应选择用？为甚我 国只收载一种？
理由（4） 可能存在严格厌氧菌——巯乙醇酸盐
流体培养基中所营造的厌氧环境是否足 以满足严格厌氧菌的培养需要。
引入思考：现无菌检查的实验操作、培 养条件是否满足严格厌氧菌的检出。
轮船正招式成商立局，标志着中国新式航运业的诞生。
(2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是
在列强排挤中艰难求生。
2．航空
(1)起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始
研制 。
(2)发展水：上1飞918机年，北洋政府在交通部下设“
”；此后十年间，航空事业获得较快发展。
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·5、增、修订：装有药物的注射器供试
品的检验方法 ——删除 “装上无菌针头（非包装中
表3
• 将表3原名称：“上市抽验样品（固体制 剂）的最少检验量”
的必检项目，为对所检供试品的质量负责， 对检验质量的负责，应对检出菌有一定的 证明。
● 理由（3） 全国微生物重点实验室的建立和发展，
以及现有微生物检定能力的证明，是药典 增加检出菌检定规定的基础建设和技术支 撑。
相信随着科技的进步、国家对药品安全的 关注，和我们对无菌检查法的深入研究及微 生物检定能力的发展，药典无菌检查法中增 加对检出菌的检定要求是必须的，也是能够 做到的！！
——美国药典中同时收载两种巯乙醇酸 盐流体培养基供选择，其中之一无刃天青 和琼脂。
引入思考：什么情况下应选择用？为甚我 国只收载一种？
理由（4） 可能存在严格厌氧菌——巯乙醇酸盐
流体培养基中所营造的厌氧环境是否足 以满足严格厌氧菌的培养需要。
引入思考：现无菌检查的实验操作、培 养条件是否满足严格厌氧菌的检出。
轮船正招式成商立局，标志着中国新式航运业的诞生。
(2)1900年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是
在列强排挤中艰难求生。
2．航空
(1)起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始
研制 。
(2)发展水：上1飞918机年，北洋政府在交通部下设“
”；此后十年间，航空事业获得较快发展。
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·5、增、修订：装有药物的注射器供试
品的检验方法 ——删除 “装上无菌针头（非包装中
无菌检查法
无菌检查法1.目的：建立对成品无菌检查的标准操作规程。
2.范围：对成品的无菌检查。
3.责任：质量监督部。
4.内容：4.1概述：无菌检查是检查药品与敷料是否染有活菌的一种方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，同时也应避免在有抑菌条件下操作。
4.2仪器、设备和用具：℃及除湿装置。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
℃的生化培养箱。
4.2.3离心机、显微镜、高压消毒炉、标准pH比色器（0.02酚红指示剂和溴钾酚蓝指示剂）、恒温烤箱。
℃灭菌30分钟。
4.2.4.1移管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞入少许棉花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，消毒备用。
±0.5）℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。
适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。
4.3试液：4.3.175％乙醇溶液配制酒精棉球用。
4.3.2碘酊溶液配制碘酒棉球用。
4.3.3灭菌生理盐水0.9％氯化钠溶液，分装于试管或三角瓶中，瓶口用棉塞或海棉胶专用塞塞紧并用牛皮纸包扎，灭菌备用。
4.3.4新洁尔尔灭（1:1000）溶液。
4.3.53-5％甲酚溶液。
4.3.60.02％酚红指示剂pH6.8-8.4系列比色液管。
无菌检查法课件
微生物的检测方法
01
02
03
04
培养法
通过培养基培养微生物，观察 其生长情况，进行检测。
显微镜检查
通过显微镜观察微生物的形态 、大小、染色等情况，进行检
测。
生物发光检测法
利用生物发光原理，检测微生 物的存在。
免疫学方法
利用抗原抗体反应，检测微生 物的存在。
03
无菌检查法的操作流程
样品采集
采样前准备
霉菌
常见的无菌检查对象，包 括酵母菌、霉菌等。
病毒
体积较小的微生物，需要 特殊的方法进行检测。
微生物的生长条件
营养物质
微生物生长需要各种营养 物质，如碳源、氮源、水 、无机盐等。
温度
不同微生物需要在不同的 温度下生长，一般温度范 围在20℃-45℃之间。
pH值
微生物生长的酸碱度条件 ，不同微生物适应的pH值 范围不同。
操作规范
严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。
样本处理
对样本进行适当的处理，以去除杂菌并保留所需检测的微生物。
培养条件
确保培养基处于适宜的温度和湿度条件下，以促进微生物的生长。
观察记录
对实验过程进行详细记录，包括操作步骤、观察结果等。
实验后的处理
器具清洗
实验结束后，对使用过的器具进行彻底清洗 和消毒。
防止污染
在接种和培养过程中，应采取措施防 止培养基和培养物受到污染。
结果观察与判定
观察微生物生长情况
定期观察培养物的生长情况，记录生 长特征和菌落形态等信息。
菌落计数
结果判定
根据检验目的和标准要求，对观察到 的微生物生长情况进行判定，如是否 符合无菌要求或特定微生物的存在与 否。
无菌检查法PPT
培养基与试验菌
培养基种类及用途
维扬我武 克壮其猷 第5页
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 硫乙醇酸盐流体培养基 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基
稀释液和冲洗液
菌液制备中用于生孢梭菌的液体培养；无菌检查方法学验证中 用于滤筒中金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的 培养。
用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的 活化培养与平板计数。
无菌方法学验证
维扬我武 克壮其猷
薄膜过滤法
第19页
为降低在洁净区操作菌液风险，也可在保证滤膜 完整性的前提下，将装有培养基的滤筒移至阳性 室，然后使用注射器吸取1ml合适浓度（<100 cfu）的菌液注入供试品及阳性对照滤筒内。
阳性对照 取一装有同体积培养基的集菌培养器，加入等量试验菌，做为阳性对照。 阴性对照 取相同稀释液、冲洗液及同批次集菌培养器同法操作，做为阴性对照。
——中国药典第三部附录XII A 《无菌检查法》
定义与要求
标准依据 《中国药典》2010年版： 一部 附录XIII B 二部 附录XI H 三部 附录XII A
标准依据、人员要求
维扬我武 克壮其猷 第3页
人员要求
无菌检查人员需要具备微生 物专业知识，并经过无菌技 术培训。
定义与要求
环境要求
维扬我武 克壮其猷 第4页
如含供试品的任意容器内试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验 量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基用量、使用灭活剂 和中和剂、更换滤膜品种等方法消除抑菌作用，并重新进行方法学验证。如使用中 和剂、灭活剂和表面活性剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
无菌方法学验证
图片来自网络
无菌方法学验证 薄膜过滤法-操作
无菌技术操作培训教材(PPT 31张)
无菌技术的基本操作方法
无菌持物钳的使用法
无菌持物钳是用来夹取和传递无菌物品的器械
持物钳的类别
三叉钳
三叉，呈 弧形向内 弯曲
卵圆钳
卵圆形 环
镊子
由于两环平行紧贴，不能持重物。用以夹取刀、
用以夹取盆、盒、瓶、罐等较重的物品。 剪、钳、镊、治疗碗及弯盘等。
用以夹取棉
无菌持物钳的使用法
方法一 ：消毒 液浸泡 1、经压力蒸汽灭菌后浸泡在内盛消毒液的大口有盖容器内 法
抓住 四个角
递无菌碗
无菌包使用法
无菌包使用注意事项
检查无菌包的有效期及质量，潮湿、破损时不可使
用。
打开无菌包时避免系带污染无菌区。 开包、关包时手不可触及包布内面、污染包内无菌 物品，不能跨越无菌区 。 无菌物品一次未使用完，关包时系带横向缠绕，表 示此包已打开过，且要准确注明开包日期及时间， 剩余物品可在24h内使用。
2、容器深度与钳长度比例适合
持物钳的存放
3、消毒液面浸没无菌持物钳轴节以上 2～3cm或镊子长度的1／2
4、每个容器只能放置一把无菌持物钳 ， 以免相互碰撞 5、容器及无菌持物钳应保持无菌，每周消毒、灭菌一次，同时更 换消毒液。手术室、门诊换药室、注射室等每日消毒、灭菌。
2-3
将盛有无菌持物钳的无菌干罐保 治疗前开包，4～8h更换一次
无菌罐
无菌容器的使用法
手托底部，手指 不能触及容器边 缘及内面
手持无菌容器
打开无菌容器
无菌容器的使用法
无菌容器注意事项
保持无菌容器盖的内面无菌，避免灰尘落入无菌容
器内。
用无菌持物钳取物时，钳及物品未触及容器边缘 用毕盖严容器盖，避免无菌容器内无菌物品在空气 中暴露过久
无菌微生物限度检查及方法验证.ppt
• 非必要品禁止带入实验室，必要资料和记录应消毒后进入并应远离操作 台。
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
• 实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、戴手表、戒指等首饰；不得 吃东西。应严格按更衣程序更衣。
• 记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微 生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将 报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌 室前，至少开启机房运转1小时以上。
菌种的传代和保藏
菌种的保藏方法
• 使菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，从而在一定时间内 不发生变异并保持生命活力。
• 一般来说，低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的三个 重要因素
• 无论使用那种菌种保藏方法，都应进行验证，以确保在相应保存条 件下的菌种不会变异并且性能稳定。
• 菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代（GMP，药 典）
微生物实验室应制定菌种的保藏管理规程来规范菌种的来源、申购、保 管、转种传代、存储和领用等方面的要求，确保菌种的溯源性和稳定性； 防止试验用菌种因多次传代而失去典型生物学特征发生变异或死亡，保 证菌种长期正确、稳定，从而确保实验的灵敏度和重现性。
微生物实验室的质量管理
•菌种保存应有专人负责，加锁保存于冰箱中。 •实验室的标准菌株应来自CMCC（中国药品生物制品检定所医学菌种保 藏中心或ATCC（美国菌种保藏中心）等国际法定菌种保藏机构。有接 收、确认记录。 •菌种的转种等均应在超净工作台进行，以防污染。 •各种菌种应按规定时间接种，所有保藏的菌种均应贴有相应的标签，有 菌种清单。
• 培养箱、冰箱需在设备的每个腔室内放置经校准过的玻璃温度计，每天 检查设备腔室内的温度状况并且在日志上做好相应的记录。定期回顾每 个设备的温度记录数据，以考察设备的运行状态。
无菌检测ppt课件
01
《医疗器械监督管理条 例》
02
《医疗器械注册管理办 法》
03
《医疗器械生产质量管 理规范》
04
《医疗器械生产质量管 理规范附录：无菌医疗 器械》
05
无菌检测案例分析
药品无菌检测案例
案例概述
某制药公司生产的注射用头孢曲松钠在使用后出 现发热、寒战等不良反应，经调查发现是不合格 产品导致。
检测结果
无菌检测ppt课件
目录
CONTENTS
• 无菌检测简介 • 无菌检测方法 • 无菌检测流程 • 无菌检测标准与法规 • 无菌检测案例分析 • 无菌检测的未来发展
01
无菌检测简介
无菌检测的定义
01
无菌检测是指通过一定的方法和 手段，对产品或环境中的微生物 进行检测，以确定其是否符合无 菌要求的过程。
采样
采样时间
选择合适的采样时间，确保样品 具有代表性。
采样部位
根据需要检测的物品或环境，选 择适当的采样部位。
采样方法
采用无菌操作，避免交叉污染和 外界微生物的引入。
样品处理
样品稀释
将采集的样品进行稀释，以便后续检测操作。
样品预处理
根据检测方法的要求，对样品进行适当的预处理 ，如加热、过滤等。
样品保存
国内标准
GB/T 14233.1-2008 - 医用输 液、输血、注射器具检验方法 第1部分：化学分析方法
GB/T 14233.2-2005 - 医用输 液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法
GB/T 16886.1-2011 - 医疗器 械生物学评价 第1部分：评价 与试验
相关法规与政策
选择适当的保存条件和方法，确保样品在检测前 不受污染。
《无菌技术》PPT课件精选全文完整版
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2021/6/10
主要内容
无菌技术概念 无菌操作意义 无菌技术操作原则 无菌技术基本操作方法
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一、概念
❖ （一）无菌技术：是指在医疗、护理操作中，
防止一切微生物侵入人体和防止无菌物品、无 菌区域被污染的操作技术。
❖ （二）无菌物品：是指经过灭菌处理后未被污 染的物品
13
操作中保持无菌的原则
❖ 操作时：面向无菌区域，操作者身体应与无菌区保 持20cm距离 ；手臂应保持在腰部或治疗台面以上；
❖ 四不可：跨越，讲话，咳嗽，打喷嚏 ❖ 取物 ❖ 无菌物品一经取出，即使未用，也不可再放回无菌
包或无菌容器内。 ❖ 用后处理 ❖ 无菌物品已被污染或疑有污染，均不可再用，应更
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操作中
不可跨越无菌 区 无菌钳取无菌 物品 防止交叉感染
无菌物 品保管
标明灭菌日 期 分柜放置 定期检查
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环境准备
❖ 清洁、宽敞、定期消毒 ❖ 物品布局合理 ❖ 操作前半小时停止清扫工作、减少人员走动，
避免尘埃飞扬
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操作前人员的准备
❖ 衣帽整齐 ❖ 剪短指甲、规范洗手、手消毒 ❖ 带口罩 ❖ 必要时穿无菌衣，
❖ 5手不得触及瓶口及瓶塞内面。
❖ 6不可将物品伸入无菌溶液瓶内蘸取溶液，已倒出 的溶液不可再倒回瓶内。
❖ 7记录开瓶日期以打开溶液的时间有效期为24小时
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27
无菌包使用法
无菌包布是用质厚、致密、未脱脂的棉布制成 双层包布。其内可存放器械、敷料以及各种 技术操作用物，经灭菌处理后备用
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无菌培训讲解材料
细胞培养
将接种好的细胞放在恒温、恒湿、无菌的培养箱 中进行培养。定期观察细胞生长情况和培养基颜 色变化，及时更换培养基和处理异常情况。
细胞接种
在无菌条件下进行细胞接种，避免细胞受到污染 。接种前要检查细胞状态和培养基质量。
细胞传代和冻存
根据实验需要进行细胞传代和冻存操作。传代时 要保持无菌条件，避免细胞受到机械损伤和污染 ；冻存时要选择合适的冻存液和温度条件，以保 证细胞的存活率和稳定性。
试剂分装
将配制好的试剂分装到无菌容器 中，如无菌试管、无菌瓶等。分
装过程中要避免污染和溅出。
标记和储存
对分装好的试剂进行标记，包括 名称、浓度、配制日期等信息。 储存时要放在干燥、避光、低温 的环境中，以保证试剂的稳定性
和有效性。
细胞培养过程中无菌操作要点
操作前准备
对操作台、器具、培养基等进行无菌处理。操作 人员要穿戴无菌工作服、手套和口罩等防护用品 。
废弃物处理及生物安全防范措施
废弃物处理
对实验过程中产生的废弃物进行分类处理。一般废弃物可放入指定垃圾桶内；感染性废 弃物要进行高压灭菌或化学消毒处理后再排放；锐器类废弃物要放入专用锐器盒内以防
刺伤。
生物安全防范措施
实验室内要设置生物安全柜或超净工作台等设施来保障实验人员的安全；实验人员要定期进 行健康检查和免疫接种以预防职业暴露；实验室要定期进行消毒和灭菌处理以保持环境的清 洁和无菌状态。同时，要建立健全实验室生物安全管理制度和应急预案以应对突发事件。
无菌操作技术要点
如正确穿戴无菌手套、使用无菌器械、避免 污染等。
常见污染原因及预防措施
分析导致污染的主要因素，并提出有效的预 防措施。
学员心得体会分享
深刻认识到无菌技术的重要性
将接种好的细胞放在恒温、恒湿、无菌的培养箱 中进行培养。定期观察细胞生长情况和培养基颜 色变化，及时更换培养基和处理异常情况。
细胞接种
在无菌条件下进行细胞接种，避免细胞受到污染 。接种前要检查细胞状态和培养基质量。
细胞传代和冻存
根据实验需要进行细胞传代和冻存操作。传代时 要保持无菌条件，避免细胞受到机械损伤和污染 ；冻存时要选择合适的冻存液和温度条件，以保 证细胞的存活率和稳定性。
试剂分装
将配制好的试剂分装到无菌容器 中，如无菌试管、无菌瓶等。分
装过程中要避免污染和溅出。
标记和储存
对分装好的试剂进行标记，包括 名称、浓度、配制日期等信息。 储存时要放在干燥、避光、低温 的环境中，以保证试剂的稳定性
和有效性。
细胞培养过程中无菌操作要点
操作前准备
对操作台、器具、培养基等进行无菌处理。操作 人员要穿戴无菌工作服、手套和口罩等防护用品 。
废弃物处理及生物安全防范措施
废弃物处理
对实验过程中产生的废弃物进行分类处理。一般废弃物可放入指定垃圾桶内；感染性废 弃物要进行高压灭菌或化学消毒处理后再排放；锐器类废弃物要放入专用锐器盒内以防
刺伤。
生物安全防范措施
实验室内要设置生物安全柜或超净工作台等设施来保障实验人员的安全；实验人员要定期进 行健康检查和免疫接种以预防职业暴露；实验室要定期进行消毒和灭菌处理以保持环境的清 洁和无菌状态。同时，要建立健全实验室生物安全管理制度和应急预案以应对突发事件。
无菌操作技术要点
如正确穿戴无菌手套、使用无菌器械、避免 污染等。
常见污染原因及预防措施
分析导致污染的主要因素，并提出有效的预 防措施。
学员心得体会分享
深刻认识到无菌技术的重要性