胰蛋白酶抑制剂
大豆中的胰蛋白酶抑制剂及其提取方法解读
大豆中的胰蛋白酶抑制剂及其提取方法解读大豆中的胰蛋白酶抑制剂是一种重要的生物活性物质，它能够抑制胰蛋白酶的活性，从而保护大豆不受胰蛋白酶的分解。
这种抑制剂在食品、医药等领域都有广泛的应用。
为了提取大豆中的胰蛋白酶抑制剂，可以采用以下步骤：1. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂初级上清液：将干大豆加水浸泡过夜后磨碎并充分混匀成浆液，然后搅拌后加溶液用3层以上的纱布过滤，得到滤液和豆渣。
接着以2-5:1.5的比例添加柠檬酸钠和磷酸三钠，直至滤液ph值达到4.5～6.0，对添加柠檬酸钠和磷酸三钠后的滤液进行浸提并水浴，水浴后离心去除杂蛋白，得到初级上清液。
2. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物：将初级上清液加热，并在上清液中添加硫酸铵，直至硫酸铵浓度30%，搅拌后得到次级搅拌液。
将次级搅拌液用滤纸过滤去脂，并将滤液静置过夜，即可得到粗提上清液。
在粗提上清液中加入硫酸铵，直至硫酸铵浓度50%，搅拌沉淀后得到大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物。
以上步骤完成后，就可以提取到大豆中的胰蛋白酶抑制剂。
这种抑制剂的应用可以保护大豆不受胰蛋白酶的分解，同时也可以应用到食品、医药等领域中。
在提取过程中，需要严格控制各个步骤中的条件和操作，以保证提取的质量和效率。
除了作为食品和医药领域的原料，大豆胰蛋白酶抑制剂还可以用于研究胰蛋白酶的活性及其作用机制。
通过进一步纯化大豆胰蛋白酶抑制剂，可以获得更高纯度的抑制剂，从而更好地了解其结构和功能。
此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与人工智能技术相结合，开发出更加智能化的方法来提取和纯化这种抑制剂。
例如，可以利用人工智能算法预测大豆胰蛋白酶抑制剂的活性，优化提取和纯化过程，提高抑制剂的产量和质量。
此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的活性研究还可以与营养学、生理学等领域相结合，研究其在人体内的生理作用和营养价值。
例如，可以研究大豆胰蛋白酶抑制剂对人体肠道健康的影响，以及其在预防和治疗某些疾病方面的应用。
同时，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与农业领域相结合，开发出更加环保和高效的农业生产方式。
豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究
·食品科技·豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究杨丽杰吴非霍贵成孙占海（东北农业大学）【摘要】对豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了调查，发现水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白、水豆腐、干豆腐中胰蛋白酶抑制剂活性均被钝化了以上；对腐乳、豆酱中胰蛋白酶抑制剂活性进行检测，结果未检出。
无糖豆粉、豆粉、豆浆以及内酯豆腐中胰蛋白酶抑制剂钝化率低于。
比较了种热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，得到巴氏杀菌可钝化胰蛋白酶抑制剂；高压杀菌可钝化，超高温灭菌可钝化。
【关键词】豆制品；胰蛋白酶抑制剂；热处理中图分类号：文献标识码：文章编号：（）大豆营养价值高，是人和动物的主要蛋白质来源，但其中含有胰蛋白酶抑制剂，有碍营养素的吸收，导致食用后身体不适或豆制食品感官上的缺陷，严重时会造成人或动物的死亡。
豆制品中胰蛋白酶抑制剂的存在还没有引起人们足够的重视。
目前失活胰蛋白酶抑制剂主要采用热处理，为达到彻底钝化而采用的过度加热可使大豆中的蛋白质溶解度降低，营养物质遭到破坏。
而且，胰蛋白酶抑制剂比较耐热，热处理的效果也很有限。
本研究对市场上多种豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了测定调查，比较了常用热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，有利于人们对豆制品安全性的认识，为更彻底地失活胰蛋白酶抑制剂提供依据。
材料与方法材料与设备腐乳、干豆腐、内酯豆腐、豆浆、水豆腐、豆酱、豆粉为市售；无糖豆粉、水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白为大豆蛋白食品公司提供；生豆粉为实验室自备；所用化学试剂为分析纯或生化试剂。
牛胰蛋白酶、、均由美国公司生产。
仪器设备：振荡培养箱（上海医用仪表厂）、离心机（北京医用离心机厂）、型凯氏定氮仪（北京宜兴科教仪器研究所）、多功能恒温水浴锅型（沈阳市医疗器械厂）、紫外可见分光光度计型（日本岛津公司）、高压灭菌器（上海医用核子仪器厂）。
试验方法豆制品中常规营养成分测定d水分含量测定：常压干燥法。
i粗蛋白测定：微量凯式定氮法。
大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法
大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法详情介绍：热处理效果受到大豆的品种、含水量和颗粒大小以及加热的温度、压力和时间等因素的影响。
加热不足则达不到破坏STI的目的；而加热过度会产生Maillard反应，使氨基酸(特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸)遭到破坏，还会使蛋氨酸、异亮氨酸和赖氨酸消化率降低。
STI受热失活分为两个阶段。
一般认为，第一阶段是KTI失活，第二阶段是BBTI失活。
但是，Robvan等(1998)认为。
第一阶段是KTI和BBTI共同失活，第二阶段是KTI进一步失活。
具体方法：1.膨化处理膨化分为湿法和干法两种。
湿法膨化是先将大豆预湿润，使用高压和蒸气强制大豆通过压模或小孔：而干法膨化是先将大豆粗碎。
不加水和蒸气直接进入挤压机螺旋轴内。
经过内摩擦产生的高温高压经由小孔喷出。
2.其他热处理方法蒸气处理分为：常压和高压．常压温度低，为100℃以下，对氨基酸的破坏少；高压使用专门的蒸气锅，效果随温度、时间、压力、pH值和原料的性质不同有很大差异。
曾勇庆等(2000)推荐，常压110℃、60 min或115℃、40 min，高压(3．51 b／in2)105 °C、15 min。
微波处理是通过1～2 nm微波对水分子进行振荡，将电磁能转化为热能。
其效果与原料中的水分和处理时间呈正相关。
3.化学处理：化学处理一般都是利用化学物质破坏STI的二硫键，从而改变STI 的分子结构以达到灭活目的。
4.生物处理：某些真菌和细菌菌株所产生的特异性酶对大豆中的STI有一定灭活效果。
外源蛋白酶可在常温下使STI失活。
杨晓泉等(2000)报道，枯草芽孢杆菌蛋白酶的工业酶A(Alcalase)留胰蛋白酶抑制剂活性为对照组的2027 mgmL，游离氨基酸含量为7．1 mg／mL，大豆蛋白的水解度为8．9％。
5.超声波处理：超声波处理导致二硫键的变化，可能机理是由于在超声波场的作用下，产生空穴，这些空穴随着压力的变化而发生交替的膨胀和破裂，改变了生物活性分子的结构，从而影响活性；或者超声波场振动的泡沫产生了自由基，自由基作用于二硫键上的硫原子从而使胰蛋白酶抑制剂中的二硫键断开，二硫键于是转变成游离巯基，最终导致STI结构的改变。
roche cooktail蛋白酶成分
roche cooktail蛋白酶成分罗氏鸡尾酒（Roche鸡尾酒）是一种用于生物科学研究的常用试剂盒，其中包含多种蛋白酶。
蛋白酶是一类能够加速蛋白质降解的酶类分子，它们具有多种不同的功能和特性。
以下将介绍Roche鸡尾酒中常见的蛋白酶成分。
1.胰蛋白酶（Trypsin）：胰蛋白酶是一种消化酶，由胰腺分泌，用于在消化过程中分解蛋白质。
在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶被用于体外细胞培养中，用于细胞的离析和传代。
它能够通过剪切蛋白质的肽键来降解蛋白质分子。
2.胰蛋白酶抑制剂（Trypsin Inhibitor）：胰蛋白酶抑制剂是一种能够抑制胰蛋白酶活性的分子。
在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶抑制剂被用于停止胰蛋白酶的活性，从而控制蛋白质降解的过程。
3.蛋白激酶抑制剂（Protein Kinase Inhibitors）：蛋白激酶抑制剂是一类能够抑制蛋白激酶活性的分子。
在Roche鸡尾酒中，蛋白激酶抑制剂被用于研究细胞信号传导的过程。
它们能够干扰蛋白激酶的活性，从而影响细胞内信号传递通路。
4.磷酸酶抑制剂（Phosphatase Inhibitors）：磷酸酶是一类能够去磷酸化蛋白质的酶。
在Roche鸡尾酒中，磷酸酶抑制剂用于抑制磷酸酶活性，从而保持蛋白质磷酸化状态。
5.蛋白酶抑制剂混合物（Protease Inhibitor Cocktail）：这是Roche鸡尾酒中的一个重要成分，它由多种蛋白酶抑制剂组成，能够抑制多种蛋白酶的活性。
蛋白酶抑制剂混合物能够保护蛋白质免受蛋白酶降解的影响，从而保持蛋白质的稳定性。
Roche鸡尾酒中的这些蛋白酶成分在生物科学研究中发挥着重要作用。
它们能够帮助研究人员保护蛋白质的完整性，提高实验的可靠性和准确性。
另外，这些蛋白酶成分还能够用于调节细胞内的信号传导过程，从而揭示细胞生物学的各个方面。
需要注意的是，Roche鸡尾酒中的蛋白酶成分不能用于食品加工或药品制造。
它们仅限于科学研究中的使用，需要严格遵守实验室安全操作规程。
豆粕中胰蛋白酶抑制剂间接竞争酶联免疫吸附检测方法的研究
邢春芳等 ： 中胰蛋白酶抑制剂 间 竞争酶联免 疫吸附检型 豆粕 接
一
。
ＬＳ 过程 无法进行 ， 检测不 能完 成 。 了解 决这一 问题 ， 为 本 右对应 的包 被抗原 和 一抗 、二抗 的浓 度为 Ｅ ＩＡ 反 文建立 了间接 竞争 Ｅ ＩＡ检测方 法。 ＬＳ 应 的理想 工作浓度 。
１ 材 料 与 方 法
爨
１ ． 抗原最佳 包被时 间的选择 ．２ ３
邢春 芳 ， 中农 业大 学生命科 学技 术 学院 ，３ ０ ０ 湖北 华 ４ ０７ ，
武 汉 洪 山 区狮 子 山。
间。
１ ． 抗原 和抗 体体积 比及竞争 时间的选择 ．４ ３
葛向阳， 单位及通讯地址 同第一作者 。
收稿 日期 ：０１ — ２ ０ ２ ００—８
以抗 原 和 抗 体 体 积 比 ７ ３ 、０： ０ ５ ５ 、 ０： ０ ６ ４ 、０： ０
最低检 出限 Ｉ 为 ２ｎ／ｌ ｃ ｇ 。选择 ０ ５Ｍ、Ｈ值 ８ ｒ — Ｃ 缓 冲液为样品浸提 液 ， ０ 、．、． ｇ ｌ ｍ ． ｐ ０ ．Ｔｉ Ｈ １ ２ ｓ 以 ．１ ２ ８ ６ ４￣／ ｍ 的浓度添加 到豆粕 中时 ， 回收率 为 ９．％～０ ． 变异 系数 为 ２ ％一 ． 其 ３７ １４９ ％， ． ５１ ８ ％。本研 究成功 建立原 的最佳包被工作浓度 ， ３ 按 ７℃ 释 度 进 行 Ｅ ＩＡ 测 定 ，测 ０ 选 择 最 佳 包 被 时 ＬＳ Ｄ
间。
主要 仪器 ：６ 酶标 板 （Ｅ 加 拿 大制造 ）酶标 １ ２ ３ ４ ５ｈ和 ４℃过夜进 行包被 ，以最佳 抗血清稀 ９孔 Ｊ Ｔ， ； 、 、 、 、
怎样去除大豆中胰蛋白酶抑制剂
怎样去除大 豆中胰蛋白酶抑制剂
物 生 长 产 生 抑 制 作 用 ，一 般 认 为 有 以
下 丽方 面 的原 因 ： （ １ ） 胰 蛋 白酶 抑 制 较 好
３ ． ２ 化 学 处 理 法
一
剂 失 活 。 此 外 ，挤 压 膨 化 的 效 果 也 比
国 内外 对 大 豆 ｒ ｒ ｉ 基因 （ 不 含 胰 蛋
白 酶 抑 制 剂 的 隐性 基 因 ） 及 其 遗 传 规 律 的 研 究 ，为 通 过 作 物 育 种 手 段 降 低
大 豆 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 的 活 性 提 供 了 依 据 。Ｈ ｙ ｍｏ ｗ ｉ ｔ ｚ 于 １ ９ ８ ６年 已成 功 地 培 养 ｍ 了低 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 的 大 豆 新 品 种 ， 其 胰蛋 Ｆ ＝ １ 酶 抑 制 剂 的活 性 比一 般 大 豆 低 ５ Ｏ ％。
２ 大 豆 中胰 蛋 白酶 抑 制剂 的毒 理
热 （ 烘 烤 、红 外 辐 射 等 ） 。 通 常 采 用 常
胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 对 动 物 的 有 害 作 用 主 要 是 引 起 生 长抑 制 和 使 某 些 动 物
引 起 胰 腺 肥 大 。 胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 对 动
蒸汽 加热 ３ ０ ｍｉ ｎ或 ９ ８ Ｋ ｐ ａ压 力 的 蒸
酸 钠 处 理 生 大 豆 一 周 以 上 ，可 使 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 降低 ５ ９ ． ８ ３ ％ 。 张 建 立 等 （ １ ９ ９ ９ ） 报 道 ，用 ５ ％尿 素＋ ２ ０ ％水 处 理 生大豆 ３ ０ ｄ ，使 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 是失 活 牢达到 ７ ８ ． ５ ５ ％。
蛋白酶抑制剂种类
蛋白酶抑制剂种类
蛋白酶抑制剂是一类能够抑制蛋白酶活性的物质，主要存在于某些植物、动物和一些微生物中。
以下是一些常见的蛋白酶抑制剂种类：
1.胰蛋白酶抑制剂：抑制胰蛋白酶活性的蛋白质，是植物中广泛存在的一类蛋白质。
它们可以抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧基肽酶等，从而影响这些酶所催化的蛋白质的水解。
2.丝氨酸蛋白酶抑制剂：这是蛋白质水解酶中的一大类，主要包括抑胃素、抑胰蛋白酶、抑糜蛋白酶等。
它们能可逆地与相应的丝氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够阻断某些内肽酶催化蛋白质水解的能力。
3.天冬氨酸蛋白酶抑制剂：主要存在于豆科植物中，能够抑制枯草杆菌蛋白酶的活性。
4.半胱氨酸蛋白酶抑制剂：这种抑制剂可以与半胱氨酸蛋白酶形成共价键，因而能够抑制这些酶的活性。
5.金属蛋白酶抑制剂：这类抑制剂主要通过与金属蛋白酶的活性中心发生相互作用，从而抑制其活性。
这些抑制剂在生物体的生长、发育和防御等方面有着重要的作用。
同时，在食品工业和医药工业中，它们也有着广泛的应用。
例如，某些蛋白酶抑制剂可以作为防腐剂，用于延长食品的保质期；在医药方面，也可以利用这些抑制剂来研发新药或探索新的治疗手段。
此外，还有一种与蛋白酶抑制剂相似的物质叫做抗蛋白酶，其主要作用是抑制或灭活蛋白酶的活性，以避免食物中的蛋白质被过度分
解或破坏。
例如，胰凝乳蛋白酶抑制剂就是一种抗胰蛋白酶，能抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，从而保护消化道中的蛋白质。
如需获取更多有关蛋白酶抑制剂的信息，建议查阅相关文献或咨询生物学家获取帮助。
胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mgml)
Storage
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mg/ml) 使用说明书
10ml -20℃ 避光 1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。 2、 使用时，根据裂解液的用量加入胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mg/ml)，使其工作
浓度在 1-10μg/ml，多用在 3-5μg/ml。
Leagene 胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mg/ml)主要由胰蛋白酶抑制剂 Aprotinin 等组成，不含 EDTA。适用于从哺乳动物组织、细胞中提取蛋白质，能够更有效的获得目的 蛋白质。提取出来的蛋白可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。
组成：
名称
编号 PI0032
注意事项：
1、 胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mg/ml)有轻微刺激性，小心操作，同时应避免反复 冻融。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12 个月有效。
相：
编号 DC0032 TC0699
名称 Masson 三色染色液 葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)
北京雷根生物技术有限公司
胰蛋白酶抑制剂溶液(Aprotinin,1mg/ml)
简介：
蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor)是指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使 蛋白酶活力下降甚至消失但不使蛋白变性的物质。蛋白酶抑制剂有很多种，包括 EDTA、 E-64、NaVO3、Bestatin、Leupetin、Pepstatin A、Aprotinin 等均可有效抑制蛋白的降 解，并维持原有的蛋白间相互作用。
蛋白酶抑制剂PMSF
PMSF
分子式：C7H7FO2S
分子量：
1）抑制（如胰蛋白酶，，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；
2）10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中；它对异丙醇没有特殊要求，分析纯即可，它也可以用DMSO进行配置，储存浓度同样为100mM
3）在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.；
4）工作浓度：17~174ug/ml（~1mM），储存液浓度为100或200mM；
5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。
（见水分解，使用前加入）
剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
在水溶液中不稳定。
应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。
pH值为时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。
欲长期保存，可冻存在-20℃。
大豆胰蛋白酶抑制剂及其临床应用
抑 制 剂 结构 、 生理 功 能及 其 ， 应 用 方 面 的研 究进 展 。 临床
【 键词 】 关 大豆 ； 蛋 白酶 抑 制 剂 ； 胰 临床 应 用
Ｓ ｂ ａ Ｔｒ ｐｓｎ Ｉ ｈｉ ｉｏ ｎｄ Ｉｓ Ｃｌ ｉ ａ ｐｌ ａｔｏ ｏｙ ｅ ｎ ｙ ｉ ｎ ｂ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｃ ｌＡｐ ｉ ｉ ｎ ｎ ｃ ＺＨＡＮ Ｈｕａ ｎ ＧＵ０ ｌ— ａ ＲＩ ｈｕ ｉ
科技信息
Ｏ临床与 医疗 Ｏ
Ｓ Ｉ Ｎ Ｅ＆Ｔ Ｃ ＮＯ Ｏ Ｆ ＭＡ Ｉ Ｎ ＣＥ Ｃ Ｅ Ｈ Ｌ ＧＹＩ ＯＲ Ｔ Ｏ Ｎ
２１ ０ １年ຫໍສະໝຸດ 第 ７期 大豆胰蛋 白酶抑制剂及其临床应用
詹 欢 郭 瑞 华 （ 河北联 合大 学 药学 院 河北 唐 山
【 摘
０３ ０ ） ６ ０ ０
要 】 蛋 白酶 抑 制 剂 是 具 有 抑 制 胰 蛋 白酶 作 用 的一 类物 质 ， 够参 与 调 节体 内许 多 重要 的 生命 活 动过 程 。 本 文 介 绍 了大 豆 胰 蛋 白酶 胰 能
并 降 大豆中胰蛋 白酶抑制剂约有 ７ １ ～ Ｏ种 ，其 中研 究 较 多 的 是 两 类 ： 制 去 甲 肾 上 腺 素 引 起 的 平 滑 肌 收 缩 ； 抑 制 纤 溶 活 性 ， 低 纤 维 蛋 白 Ｆ Ｐ） 以减 轻 Ｆ Ｐ对 多 器 官 再 灌 注 的 损 害 。 Ｄ Ｋ ｎｔ 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 ｆ Ｓ Ｉ ｕｉ ｚ型 Ｔ）和 Ｂ ｗ ａ ２ ｉ Ｋ ｏ ｍ ｎ Ｂｒ 胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 原 降 解 产 物 （Ｄ 水 平 ， ｋ型 ２３ 抗 肿 瘤 的 作 用 － （Ｂ） 。 Ｂ Ｉ
（ ｏｌｇ ｆＰ ａ ｍａ ｙ Ｈｅ ｄ ｍｔｄ Ｕｎｖ ｒｉ ， ａ ｇ ｈ ｎ Ｈｅ ｅ， ６ ０ ０ Ｃ ｌ ｅｏ ｈ ｒ ｃ ， ｂ Ｕ ｅ ｉｅ ｓｔ Ｔ ｎ ｓ ａ ｂ ｉ ０ ３ ０ ） ｅ ｙ
胰蛋白酶抑制因子作用机制
胰蛋白酶抑制因子是一种抗胰蛋白酶的物质，它通过抑制胰蛋白酶的活性来发挥作用。
胰蛋白酶是一种消化酶，主要负责分解食物中的蛋白质。
正常情况下，胰蛋白酶只在小肠内发挥作用，而不在胃内活化。
胰蛋白酶抑制因子通过与胰蛋白酶形成复合物，阻止其进一步降解食物中的蛋白质。
具体来说，胰蛋白酶抑制因子与胰蛋白酶结合后，改变了胰蛋白酶的构象，使其活性中心无法与底物结合，从而抑制了其酶活性。
这种抑制作用可以减缓或阻止蛋白质的消化和吸收过程。
胰蛋白酶抑制因子的作用机制还包括调节胰蛋白酶的活性，保护胰腺免受自身消化以及其他外界刺激的损伤。
它可以在某些疾病条件下产生自然保护，如胰腺炎、胃十二指肠溃疡等。
此外，一些药物也可以模拟胰蛋白酶抑制因子的作用，用于治疗胰酶过度活化引起的疾病。
总的来说，胰蛋白酶抑制因子通过与胰蛋白酶结合，改变其构象并抑制其酶活性，起到调节和保护胰腺功能的作用。
具有胰蛋白酶抑制剂活性成分的中药筛选及初步鉴定
具有胰蛋白酶抑制剂活性成分的中药筛选及初步鉴定蛋白酶抑制剂（Proteinase Inhibitor, PI）广泛存在于动植物和微生物中,能与相应的蛋白水解酶作用形成复合物，从而抑制蛋白酶的活性,参与体内许多重要生理过程的调节。
其中胰蛋白酶抑制剂（Trypsin Inhibitor, TI）具有重要的药用价值,对于急性胰腺炎、肺气肿、多功能衰竭、抗休克、减少心脏外科手术中失血、防治脑水肿和脑缺血、预防早产、预防单侧肺缺血再灌注引起的损伤等方面都有相关的研究报道，最令人瞩目的是在HIV和肿瘤治疗中的应用。
本文从60种具有抗病毒、清凉下火的传统中药中筛选具有胰蛋白酶抑制活性的组分，选取合适的原生药进行胰蛋白酶抑制剂的提取纯化及部分理化性质的研究。
结果表明：60种中药配方颗粒中有7种在浓度为100mg/mL时对胰蛋白酶抑制率在15%以上，其中麻黄抑制率最大为37.95%，其次是大黄36.35%、鱼腥草28.03%、白芍23.15%、连翘18.66%、桂枝17.96%、凤尾草17.63%；有6种在浓度为50mg/mL时对胰蛋白酶抑制率在10%以上，其中大黄抑制率最大为32.73%，其次是鱼腥草16.51%、麻黄14.67%、白芍13.46%、连翘11.78%、细辛10.49%。
其中有6种中药在两个浓度下对胰蛋白酶抑制率均在10%以上，包括麻黄、大黄、鱼腥草、白芍、连翘、细辛。
选取鱼腥草作为研究对象，对其胰蛋白酶抑制剂（HCTI）进行了分离提取。
实验结果表明：HCTI的最佳粗提取条件是采用pH7.0的双蒸水为提取溶剂，在加30倍体积水，温度为45℃条件下浸提2.0h，提取2次；粗提液经45%-60%饱和度的硫酸铵沉淀后比活力最高，用DEAE-52离子交换层析柱对HCTI进一步纯化， pH8.0Tris-HCL缓冲液为梯度洗脱液，在含240mM NaCl的梯度条件下可检测到HCTI活性峰。
经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，计算出HCTI的分子量约为28KDa。
Worthington胰蛋白酶抑制剂解决方案
Worthington胰蛋白酶抑制剂解决方案大豆胰蛋白酶抑制剂 (Kunitz)由 Kunitz (1945) 首次结晶的大豆胰蛋白酶抑制剂 (SBTI) 是在大豆中发现的几种此类抑制剂之一。
（Fratalli 1969；Millar等人1969；Fratalli 和 Steiner 1968；Birk等人1967）。
最著名的制剂是库尼茨的制剂。
Steiner 和 Fratalli (1969) 回顾了 Kunitz 和 Bowman-Birk 抑制剂。
蛋白质（或多肽）蛋白酶抑制剂可能具有与蛋白酶反应位点相容的肽键。
Finkenstadt 和 Laskowski (1965 和 1967) 以及 Ozawa 和 Laskowski (1966) 表明单个 Arg-Ile 键被胰蛋白酶切割；结果是抑制剂和胰蛋白酶的共价双分子复合物。
解离时出现原始或改性抑制剂；参见 Hixson 和 Laskowski (1970a)，Isheda等人. (1970) 和 Niekamp等人。
（1969 年）。
Worthington 大豆胰蛋白酶抑制剂特异性:大豆抑制剂抑制胰蛋白酶摩尔对摩尔，并在较小程度上抑制胰凝乳蛋白酶。
（Bidlingmeyer等人，1972 年）。
Lanchantin等人。
(1969) 报告大豆抑制剂与牛肉或人凝血酶形成一对一的复合物，从而阻断其激活凝血酶原的特定蛋白水解能力。
Nanninga 和Guest (1964) 报告纤溶酶被抑制。
据报道，STI 可抑制白细胞蛋白酶。
（Lieberman 和 Gawad 1971），但不是猪弹性蛋白酶的酯水解、蛋白水解或弹性水解活性（Gertler 和 Feinstein 1971）。
卵类粘蛋白卵类粘蛋白是禽蛋清的糖蛋白蛋白酶抑制剂。
蛋清中有几种蛋白酶抑制剂。
一种作用于无花果苷和木瓜蛋白酶（Fossum 和 Whitaker 1968）；另一种是卵抑制剂（Matsushima 1958），它是粗制卵类粘蛋白制剂的一种重要污染物，对牛胰蛋白酶和糜蛋白酶以及猪弹性蛋白酶和真菌蛋白酶起作用（Feinstein 和 Gertler 1972；Gertler 和 Feinstein 1971；Liu等人1971；Tomimatsu等人） al . 1966)。
胰蛋白酶抑制剂
胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂是一种小分子蛋白质。
药用商品名称抑肽酶Aprotinin，国外同类产品名有Trasylol、IniProl、PantriPin等。
已经证实，从牛胰、肺、颌下腺等组织中提取的激肽释放酶抑制剂，就是早先Kunitz从胰腺中提取的胰蛋白酶抑制剂。
它对蛋白酶具有广谱抑制作用，如胰蛋白酶、糜蛋白酶，纤溶酶、凝血酶及各种组织或血浆激肽释放酶等。
已广泛用于治疗急性胰腺炎，烧伤后的休克及产后大出血等疾病，有独特的疗效。
1987年英国报道了胰蛋白酶抑制剂可有效地减少高危患者心脏手术出血。
1993年美国临床验证，胰蛋白酶抑制剂可作为高危患者心脏外科手术中大出血时的首选药物，现已广泛被使用。
化学组成和性质 Kunitz胰蛋白酶抑制剂的相对分子质量为6200，是由58个氨基酸残基组成的碱性多肽。
它的一级结构和二级结构均已阐明，分子内有3对二硫键，整个分子呈梨形，活性中心为赖氨酸，位于分子的顶端。
从相对分子质量看有两类，一类是相对分子质量较大的；一类是相对分子质量较小的。
相对分子质量较小的一级结构如下：(略)一级结构是一条肽链组成，晶体空间很丰富，扭转的双链反平行B －折叠，从C末端开始有三圈螺旋，分子内核由苯丙酸，丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等氨基酸残基的侧链组成疏水微区，分子表面是一些亲水基因。
溶液构象测定变性过程，发现小分子的有极高的稳定性。
在碱性溶液中室温放置数天，它的苯酚基还不能全部解离成醌式。
主链构象在尿素的溶液中，室温下可经数天而不全部松散。
这说明特定空间结构不仅能在溶液中依旧保持着，还能够经受相当剧烈的处理而不破坏。
估计与二硫键含量高有关。
Kunitz胰蛋白酶抑制剂在pH1.1和10.5时，以单体占优势，在中性pH时以二聚体占优势。
对高温、酸、碱和酶都很稳定，在稀酸中加热至100℃，在2.5％三氯乙酸中加热至80度都未见活性损失。
在室温、0.14mol／L氯化钠中可保存18个月。
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植物化学物质，如植酸和胰蛋白酶抑制剂等。 胰蛋白酶抑制剂(STI)具有特殊效能，其生物活 性对治疗由营养过剩产生的疾病(如高血压和癌
症)有促进作用。
• 大豆胰蛋白酶抑制剂是具有抑制胰 蛋白酶作用的类物质，可以调控生 物体内生理反应，具有多种药理活 性,包括抗炎、抗病毒、抗肿瘤等。 对结肠癌、前列腺癌、乳腺癌，子 宫内膜癌，人宫颈癌的研究已经证 实大豆胰蛋白酶抑制剂有明显的抗 肿瘤作用。
大豆胰蛋白酶抑制剂 (soybean trypsi inhibitor，简称STI)是大豆 中主要抗营养因子，是一 种多肽类或蛋白质。组成 多肽氨基酸残基在72～ 197个左右，氨基酸残基 组成及性质差异，决定大 豆胰蛋白酶抑制剂差异。 大豆中胰蛋白酶抑制剂约 有7～1O种 ，目前，从大 豆中已分离出两种类型蛋 白抑制剂：即Kunitz型胰 蛋白酶抑制剂(KsTI)和 Bowman．Birk型胰蛋白 酶抑制剂(BBI)。
作用机理
这两种抑制剂使酶失活机理为：大豆胰蛋白 酶抑制剂链环结构中暴露氨基酸残基(活性部 位)与胰蛋白酶中氨基酸发生络合作用，使蛋 白酶失去酶解能力，抑制该酶活性，防止蛋 白质消化成氨基酸，这样就去除了快速生长 的癌细胞所需要的氨基酸。
现状及前景
目前临床上广泛应用于 急性胰腺炎、外科手术、 脑血管疾病、妇产科疾 病和休克。因此，胰蛋 白酶抑制剂是人类重要 的生化试剂和药物资源。
• 但现在胰蛋白酶抑制剂在抗癌方面只在 临床试验阶段，实验室研究已取得成功， 所以开发这方面的药物很有前景。
建议大家多吃豆类食品