土壤蔗糖酶活性测定
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤蔗糖酶的测定方法(一)
土壤蔗糖酶的测定方法(一)土壤蔗糖酶的测定方法简介土壤蔗糖酶是一种重要的土壤酶活性指标，其测定方法可以帮助我们了解土壤中有机质分解和糖类循环的过程。
本文将详细介绍几种常用的土壤蔗糖酶测定方法。
方法一：邻苯二甲酸缓冲法1.准备土壤样品和邻苯二甲酸缓冲液。
2.将土壤样品加入邻苯二甲酸缓冲液中，使样品均匀悬浮。
3.在恒温水浴中将样品搅拌一定时间，通常为1小时。
4.用酚酞指示剂进行滴定，直到溶液从紫色转变为粉红色。
5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。
6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性。
方法二：多酚类抑制法1.准备土壤样品和多酚溶液。
2.将土壤样品与多酚溶液混合，使样品与抑制剂充分接触。
3.静置一段时间，通常为4小时。
4.加入邻苯二甲酸缓冲液和酚酞指示剂，进行滴定。
5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。
6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性，与未添加抑制剂的样品相比较，计算抑制率。
方法三：重组蔗糖酶法1.准备土壤样品和蔗糖酶底物。
2.将土壤样品与蔗糖酶底物混合，使底物与土壤酶反应。
3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。
4.加入试剂，使反应停止。
5.根据试剂的反应产物的浓度变化，利用分光光度法或其他适当方法测定蔗糖酶活性。
方法四：荧光素二葡萄糖测定法1.准备土壤样品和荧光素二葡萄糖底物。
2.将土壤样品与荧光素二葡萄糖底物混合，使底物与土壤酶反应。
3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。
4.根据底物反应产物的荧光强度变化，利用荧光分析仪或其他适当设备测定蔗糖酶活性。
5.根据荧光强度的变化计算蔗糖酶活性。
结论通过以上介绍的几种方法，可以选择适合实际需求的土壤蔗糖酶测定方法。
无论是邻苯二甲酸缓冲法、多酚类抑制法、重组蔗糖酶法还是荧光素二葡萄糖测定法，都可以有效地测定土壤中的蔗糖酶活性，为土壤质量评价和农作物种植提供参考依据。
不同方法的选择应根据实际情况权衡利弊，以提高分析结果的准确性和可靠性。
土壤蔗糖测定实验报告
一、实验目的1. 熟悉土壤蔗糖测定的原理和方法。
2. 掌握3,5-二硝基水杨酸比色法测定土壤蔗糖活性的操作步骤。
3. 了解土壤蔗糖酶活性与土壤肥力、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。
二、实验原理土壤蔗糖酶活性是反映土壤有机碳累积与分解转化规律的重要指标。
蔗糖酶能将土壤中的高分子量蔗糖分子分解成能够被植物和土壤微生物吸收利用的葡萄糖和果糖。
3,5-二硝基水杨酸比色法是一种测定土壤蔗糖酶活性的常用方法。
该方法以蔗糖为基质，根据葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成黄色产物，来确定土壤蔗糖酶活性。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：土壤样品（过2mm筛）2. 试剂：（1）3,5-二硝基水杨酸溶液：称取0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2mol/L氢氧化钠和50ml水中，再加入30g酒石酸钾钠，用水稀释至100ml。
（2）pH值为5.5的磷酸缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠（11.867g NaHPO·2HO 溶于1升蒸馏水中）0.5ml加1/15mol/L 磷酸二氢钾（9.078gKHPO溶于1升蒸馏水中）9.5ml配成。
（3）8%蔗糖溶液。
（4）甲苯。
（5）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml蒸馏水中，即成葡萄糖标准溶液（5mg/ml）。
再将此液稀释10倍制成葡萄糖工作液（0.5mg/ml）。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）分别吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml的葡萄糖标准溶液于6个试管中，加入2ml DNS试剂，混匀，沸水浴5min，冷却后加蒸馏水至10ml。
（2）在波长520nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 土壤蔗糖酶活性测定（1）称取5g土样于50ml三角瓶中，加入5滴甲苯，振荡后静置15min，去除甲苯。
（2）加入5ml pH5.5磷酸缓冲液和5ml 8%蔗糖溶液，混匀。
土壤蔗糖酶实验报告
一、实验目的1. 了解土壤蔗糖酶活性的测定原理和方法。
2. 掌握土壤蔗糖酶活性的测定步骤和操作技巧。
3. 分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。
二、实验原理土壤蔗糖酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法。
该方法以蔗糖为基质，在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖和果糖，再与3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在508nm波长下，通过测定吸光度，可以计算出土壤蔗糖酶活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：风干土壤、蔗糖、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、硫酸、蒸馏水等。
2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、比色计、试管、烧杯、漏斗、滤纸等。
四、实验步骤1. 土壤样品处理：称取风干土壤0.15g，加入5ml蒸馏水，充分振荡后过滤，得到土壤悬液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列葡萄糖标准溶液，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，在508nm波长下测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 土壤蔗糖酶活性测定：取3ml土壤悬液，加入1ml蔗糖溶液和2ml氢氧化钠溶液，混匀后置于50℃恒温水浴锅中反应30分钟。
取出后，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀，在50℃恒温水浴锅中反应10分钟。
取出后，加入硫酸终止反应，冷却至室温。
在508nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性。
4. 数据处理：计算土壤蔗糖酶活性，分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y=0.0628x-0.0026，相关系数R²=0.9989。
2. 土壤蔗糖酶活性测定：根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性为1.23U/g土壤。
3. 分析：土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子呈正相关。
土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B 液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。
三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。
再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm 波长处比色。
然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。
土壤酶的测定方法
参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
③8%蔗糖溶液。
④甲苯。
⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。
再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。
标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。
无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。
土壤蔗糖酶活性测定方法
土壤蔗糖酶活性测定方法方法一：邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)法1.实验原理：邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)可通过蔗糖酶催化水解产生对甲酚背氧钠（PMS），PMS与p-苯醌反应生成紫色物质，紫色物质的光学密度与蔗糖酶活性呈正相关关系。
2.实验步骤：1) 准备土壤样品：将土壤样品通过2mm筛分获得<2mm的土壤颗粒，取适量土壤加入含有0.01mol/L可溶性蔗糖溶液的无磷酸钠缓冲液中制备土壤悬浮液。
2) 补充试剂：将0.5%邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)和0.1mol/L乙酰胆碱溶液准备好。
3) 催化反应：取50ml土壤悬浮液加入50ml离心管中，加入0.5ml 邻苯二甲酸二甲酯(OMPA)溶液和0.5ml乙酰胆碱溶液，摇匀后放置于恒温水浴中，在37℃下培养2小时。
4) 停止反应：加入0.5ml冷却剂（10%w/v次氯酸钠和10%w/v硼酸混合物）停止反应。
5) 比色：每个试管取1ml反应液加入4ml氢氧化钠溶液，并通过pH 试纸调整pH值为7-8，然后以1ml/分钟的速度加入1mol/L硫酸，同时记录反应液的吸光度。
6)计算结果：根据吸光度计算出土壤中蔗糖酶的活性。
方法二：葡萄糖法1.实验原理：葡萄糖测定法使用试剂酚氨试剂和葡萄糖酸嵌合物的形成来测定土壤中蔗糖酶的活性。
葡萄糖酸嵌合物的形成量与蔗糖酶活性呈正相关关系。
2.实验步骤：1) 准备土壤样品：将土壤样品通过2mm筛分获得<2mm的土壤颗粒，取适量土壤加入含有0.3mol/L蔗糖溶液的无磷酸钠缓冲液中制备土壤悬浮液。
2) 补充试剂：准备好酚氨试剂和0.3mol/L葡萄糖溶液。
3) 催化反应：取2ml土壤悬浮液，加入2ml酚氨试剂和1ml葡萄糖溶液，放置于37℃恒温水浴中，培养2小时。
4) 停止反应：加入5ml冷却剂（20%醋酸和20%硼酸混合液）停止反应。
5) 比色：每个试管取4ml反应液加入10ml硫酸进行酸化，然后以每分钟加入2ml五氯酚酸溶液的速度加入到试管中，同时记录反应液的吸光度。
土壤蔗糖酶活性测定方法
土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。
该方法以蔗糖为基质, 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖, 葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸, 并在508nm波长下有最大吸光值。
2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中, 加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5磷酸缓冲液, 再加3mL 8%蔗糖溶液, 摇匀后加盖, 放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出, 摇匀, 并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中, 并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸, 再立即将玻璃管沸水浴中加热5min, 加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml, 在508nm波长下比色, 记录吸光值。
3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水, 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌, 直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。
b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中, 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。
（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。
b.按下表加液编号: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10葡萄糖母液（ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07饱和苯甲酸（ml）0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13葡萄糖浓度（mg/ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.060.07吸光值（A508nm）0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.0061.176c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液, 并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后, 立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后, 用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性测定的实验步骤土壤酶的测定1．三角瓶用稀HNO3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后刷洗，然后再用蒸馏水润洗，晾干。
2．土样研磨精细后分袋装好。
土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g，重复一次，14.5某2=29g。
一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323）1．试剂配制：(1)0.3%过氧化氢溶液：①（1：10030%的H2O2和水）②（0.5molH2O2+49.5ml蒸馏水）③（1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）(2)3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）(3)0.1N 高锰酸钾溶液：（1.58gKMnO4+100ml蒸馏水）2．操作步骤：2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢（现配）→在往复式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以稳定未分解的H2O2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色3．结果计算过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1NKMnO4的毫升数表示：M=（A－B）某T式中：A：空白消耗的0.1NKMnO4毫升数B：滤液消耗的0.1NKMnO4毫升数T：KMnO4滴定度的校正值备注：以容量法测H2O2的酶活：Kappen（1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。
此法根据H2O2与土壤相互作用时，未分解的H2O2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H2O2）测定H2O2的酶活2KMnO4＋5H2O2＋3H2SO4→2MnSO4＋K2SO4＋8H2O＋5O2土壤H2O2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用二、蔗糖酶（P278）滴定法1.试剂配制：(1)20％蔗糖：（20g蔗糖＋80ml水或12.5g蔗糖＋50ml水）(2)甲苯(分析纯)(3)PH5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液0.5ml磷酸氢二钠·12H2O(1/15M)+9.5ml磷酸二氢钾（1/15M）磷酸氢二钠·12H2O(1/15M)：23.88gNa2HPO4,，加H2O溶解，定容至100ml。
土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。
土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B 液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。
三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。
再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm 波长处比色。
然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法综合引言：土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定时间内分解特定底物的能力，是评估土壤生态系统功能和土壤肥力状况的重要指标。
土壤酶活性测定方法是研究土壤酶活性的关键手段之一、本文将综合介绍常用的土壤酶活性测定方法，包括蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法。
一、蔗糖酶活性测定方法：蔗糖酶是一种重要的有机磷酸酶，广泛存在于土壤中，能够水解蔗糖为葡萄糖和果糖。
测定土壤蔗糖酶活性可以反映土壤中酶的数量和活性。
1.提取土壤酶液：将土壤与玻璃棒研磨均匀，用0.5mol/L甘油缓冲液（pH6.8）溶解土壤，离心沉淀，得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入蔗糖底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应30分钟，用酒精停止反应，加入硫酸，取样测定比色液的吸光度。
3.统计分析：根据比色液吸光度与标准曲线对照，计算出土壤蔗糖酶活性。
二、过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤过氧化氢酶活性可以反映土壤中氧化还原反应的发生情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与甘油缓冲液混合，加入液氮使其冷冻破碎，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入过氧化氢底物和缓冲液，在25℃恒温振荡下反应一定时间，停止反应后加入酒精，用紫外分光光度计测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与过氧化氢递减曲线对照，计算出土壤过氧化氢酶活性。
三、脲酶活性测定方法：脲酶是一种解脲酸酯的酶，能够水解尿素为氨和二氧化碳。
测定土壤脲酶活性可以反映土壤中氮循环的情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与脲酸酯缓冲液混合，用玻璃棒研磨均匀，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：将一定量的土壤酶液加入脲酶底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应一定时间，反应停止后加入酒精，用比色法测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与标准曲线对照，计算出土壤脲酶活性。
结论：以上就是蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法的综合介绍。
土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性的测定
土壤酶活性的测定方法及部分样品配制详细请参考《土壤微生物分析方法手册》，《土壤酶及其研究法》土壤样品采集与制备土壤样品取样后混匀，用于土壤酶活性测定的土壤磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测。
1.土壤酶活性的测定方法1.1.脲酶采用靛酚蓝比色法方法原理：本法基于以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，用于尿酶活性的测定。
操作步骤：取10g风干土，置于100ml三角瓶中，加2ml甲苯，15min后加10ml 10%尿素液和20ml pH6.7柠檬酸盐缓冲液。
摇匀后在37℃恒温箱中培养3h。
按此操作，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定，过滤后取0.5ml滤液于50ml比色管中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
pH6.7柠檬酸盐缓冲液：用368g柠檬酸溶于600ml水，另取295g氢氧化钾溶于水，再将二种溶液混合，然后用1M的氢氧化钠调节pH到6.7，定容到2L。
苯酚溶液：称取苯酚（C6H5OH）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O, 化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·12H2O, 化学纯）31.8g 和52.5g·L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液)10mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
标线绘制：取稀释的标准液0、l、2、4、6、8、10ml，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。
再加4mL苯酸钠溶液和4mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法
土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法土壤中的过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶和脲酶是土壤中重要的酶类，对于土壤质量的评价和土壤生态系统的健康状况具有重要意义。
以下将介绍测定这些酶类的方法。
1.土壤过氧化氢酶检测方法：过氧化氢酶（Catalase, CAT）是土壤中一种重要的氧化酶，参与有机物的降解和土壤氧化还原过程。
测定土壤过氧化氢酶的常用方法为测定土壤样品的过氧化氢气体释放量。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如双酚酸），在室温下反应一段时间。
（2）反应结束后，用紫外光度计测定反应液中过氧化氢的吸光度。
（3）根据吸光度的变化，计算出土壤样品中的过氧化氢酶活性。
2.土壤过氧化物酶检测方法：过氧化物酶（Peroxidase, POD）是土壤中一类重要的酶类，参与土壤的有机物降解和氧化还原过程，是土壤抗氧化系统的重要组成部分。
测定土壤过氧化物酶的常用方法为测定土壤样品中过氧化物酶的催化能力。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如过氧化氢），在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。
（2）反应结束后，用显色试剂（如双对苯偶氮、间苯二胺等）与反应液中的过氧化氢发生反应，形成有色物质。
（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中过氧化物酶的活性。
3.土壤磷酸酶检测方法：磷酸酶（Phosphatase, AP）是土壤中一种重要的酶类，参与有机磷的矿化和土壤磷循环过程。
测定土壤磷酸酶的常用方法为测定土壤样品中磷酸酶对底物（如对硝基酚磷酸酯）的水解能力。
实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的磷酸酶底物，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。
（2）反应结束后，用显色试剂（如酚氨反应液）与反应液中的产物发生反应，形成有色物质。
（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中磷酸酶的活性。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
土壤蔗糖酶测定
土壤蔗糖酶测定土壤蔗糖酶测定（比色法）1. 方法选择及原理蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。
蔗糖酶活性的测定方法有用酶学的方法测量所产生的葡萄糖（滴定法或重量法）或是根据蔗糖的非还原性，用生成物（葡萄糖和果糖）能够还原菲林溶液中的铜，再根据生成的氧化亚铜的量求出糖的含量。
也可根据蔗糖水解的生成物与某种物质（3，5-二硝基水杨酸或磷酸铜）生成有色化合物进行比色测定。
还有一种方法，根据蔗糖液酶促反应前后光偏振面的变化（旋光法）进行测定。
目前，我国常用的主要是硫代硫酸钠滴定法，它是测定土壤蔗糖酶活性的经典方法。
3，5-二硝基水杨酸比色法重现性较好，且手续较简便，适于成批样品测定。
测定土壤蔗糖酶活性时，均以蔗糖为基质，蔗糖液浓度范围为5-20％。
在酸性介质中，蔗糖酶活性最大。
为保持该酶最适pH，多使用下列缓冲液：醋酸盐缓冲液（pH4.5-5.5），磷酸盐缓冲液（pH4.9-5.5），醋酸盐-磷酸盐缓冲液（pH5.5）。
2. 试剂配制（1）3，5-二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2N氢氧化钠和50ml水中，再加18.2g酒石酸钾钠，用水稀释至100ml（不超过7天）。
（2）pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（11.867g Na2PO4?2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml 加1/15M 磷酸二氢钾（9.078KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
（3）8％蔗糖溶液。
（4）甲苯。
（5）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml 12mmol苯甲酸溶液中（5mg还原糖/ml），即成标准葡萄糖溶液。
标准曲线绘制：取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg还原糖/ml的标准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中，与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色。
3. 试验步骤称取2.***g新鲜土，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲液和0.25ml甲苯。
蔗糖酶测定方法
蔗糖酶活性的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）（关松萌主编，《土壤酶及其研究法》）酶促反应试剂：（1）pH5.5磷酸缓冲液：1/15M Na2HPO4(11.867克Na2HPO4·2H2O溶于1升蒸馏水中)0.5ml加1/15M KH2PO4（9.078克KH2PO4溶于1升蒸馏水中）9.5ml。
（2）8%蔗糖溶液（用pH5.5磷酸缓冲液配制）。
（3）甲苯。
测定试剂：（1）3,5-二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2N NaOH和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释至100ml（不超过7天）。
（2）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。
取500mg葡萄糖溶于100ml苯甲酸饱和溶液中（5mg还原糖/ml），即成标准葡萄糖溶液。
再由此溶液稀释成1ml含0.01-0.5mg葡萄糖工作溶液。
标准曲线绘制：分别取不同浓度葡萄糖工作溶液1ml于50ml容量瓶中，加入3ml二硝基水杨酸溶液，混匀后在沸水浴中加热5min，取出立即在冷水中冷却，用水稀释至50ml，于波长508nm处比色测定颜色深度。
以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制成标准曲线。
测定操作称5g风干土，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，在沸水浴中加热5min，取出立即在冷水中冷却3min（溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色），用水稀释至50ml，于波长508nm处比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。
结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示：葡萄糖（毫克）=a×4式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数。