结直肠癌BRAF和K_ras基因状态及其病理意义
结直肠癌KRAS和NRAS及BRAF基因突变状态分析
结直肠癌KRAS和NRAS及BRAF基因突变状态分析沙如拉;李文新【摘要】目的检测结直肠癌组织KRAS、NRAS及BRAF基因突变状态,分析突变与临床特征的关系.方法收集结直肠癌手术切除或穿刺活检标本218例,提取DNA 经探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应扩增后,检测KRAS、NRAS及BRAF基因的突变状态,分析结直肠癌组织中3个基因间突变的内在关系,并分析KRAS突变与临床特征的关系.结果 218例CRC中,KRAS基因突变率为37.6％(82/218);NRAS 基因突变率为4.1％(9/218);BRAF突变率为3.7％ (8/218),在136例KRAS野生型病例中NRAS与BRAF的突变频率为6.6％(9/136)和5.9％ (8/136).BRAF与KRAS、NRAS基因突变相互排斥.KRAS基因突变更倾向发生于Ⅲ～Ⅳ期(P=0.014)和淋巴结转移的患者(P=0.049),与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度等病理特征无关(P＞0.05).NRAS和BRAF基因突变与病理特征无关(P＞0.05).结论结直肠癌患者的KRAS突变速率较高,KRAS突变与淋巴结转移和肿瘤进展相关.联合检测KRAS、NRAS及BRAF基因,能正确指导和选择抗EGFR单抗药,实现个体化治疗的目标.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2017(049)001【总页数】4页(P4-7)【关键词】结直肠癌;EGFR;KRAS;NRAS;BRAF【作者】沙如拉;李文新【作者单位】内蒙古自治区人民医院肿瘤内科,内蒙古呼和浩特 010017;内蒙古自治区人民医院肿瘤内科,内蒙古呼和浩特 010017【正文语种】中文【中图分类】R735.34结肠癌是常见的恶性肿瘤。
世界上结肠癌的发病率不断攀升,以每年超过130万新病例的速度递增[1]。
晚期的转移性结直肠癌患者5年生存率不到10%，化疗可以改善生活条件,但平均生存率仍不超过2年。
结直肠癌组织 KRAS 和 BRAF 基因突变情况及意义
结直肠癌组织 KRAS 和 BRAF 基因突变情况及意义宋敏;孙亚琼;张莉;潘琼【摘要】目的：观察结直肠癌组织KRAS、BRAF基因突变情况，并探讨其意义。
方法采用实时荧光PCR及多重PCR-STR法检测477例结直肠癌组织KRAS基因外显子2第12、13位密码子的基因突变情况，其中315例同时检测BRAF基因外显子15的突变情况。
随访记录无进展生存期（ PFS），并分析基因突变与临床因素的关系。
结果结直肠癌患者中KRAS基因突变率为24．5％，BRAF基因突变率为11．4％，未检测到同时发生KRAS与BRAF基因突变者。
KRAS基因突变型和野生型患者中分别有69．2％、30．0％出现肝转移，P＜0．01；KRAS基因突变率在≥65岁、原发部位为右侧的患者中升高，P≤0．05。
BRAF基因突变率在男性、高分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者中升高，P均＜0．05。
KRAS、BRAF 基因突变型和野生型的PFS比较，P均＞0．05。
结论在结直肠癌患者中，KRAS基因突变与年龄、发病部位及发生肝转移有关，BRAF基因突变与性别、分化程度、肿瘤TNM分期有关；联合检测两基因突变情况有助于判断病情。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2014(000)032【总页数】3页(P32-34)【关键词】结直肠癌;KRAS;BRAF;基因突变;序列分析【作者】宋敏;孙亚琼;张莉;潘琼【作者单位】郑州大学第一附属医院，郑州450052;郑州大学第一附属医院，郑州450052;郑州大学第一附属医院，郑州450052;郑州大学第一附属医院，郑州450052【正文语种】中文【中图分类】R739.5结直肠癌是三大常见的恶性肿瘤之一，多数患者就诊时已经处于晚期，失去了手术治疗的最佳机会。
临床试验证明，西妥昔单抗、帕尼单抗等表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂治疗转移性结直肠癌的疗效较常规化疗显著提高，但只有KRAS野生型患者从中受益［1，2］。
KRAS基因突变影响化疗最终效果
KRAS基因突变影响化疗最终效果KRAS基因突变是一种在癌症中常见的突变。
特别是在结直肠癌等癌症中，KRAS基因突变是相当常见的。
KRAS基因突变对于化疗的最终效果有着重要的影响。
本文将探讨KRAS基因突变对化疗效果的影响，并介绍一些针对KRAS突变的新型治疗方法。
KRAS基因是一个编码RAS蛋白的基因，它在细胞信号传导途径中具有重要的作用。
当KRAS基因突变时，会导致RAS蛋白的功能异常。
RAS 蛋白负责细胞的增殖、分化和存活等过程，因此KRAS基因突变会导致细胞增殖无节制，从而形成肿瘤。
此外，KRAS基因突变也会导致肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性。
首先，KRAS基因突变会降低化疗的疗效。
研究表明，KRAS基因突变的肿瘤往往对于传统的化疗药物如氟尿嘧啶和奥沙利铂的敏感性较低。
这是因为KRAS突变会激活细胞内的信号传导途径，从而导致肿瘤细胞的增殖和生存能力增强。
此外，KRAS突变还会导致细胞线粒体功能减弱，从而降低细胞对化疗药物的灭活能力。
因此，KRAS基因突变的肿瘤往往对化疗药物产生抗药性，使治疗效果不佳。
其次，KRAS基因突变还会影响化疗的耐受性。
研究发现，KRAS基因突变的患者往往在化疗过程中出现更多的不良反应，例如恶心、呕吐、腹泻等。
这些不良反应不仅影响患者的生活质量，还会导致治疗计划的中断或减量，从而影响治疗的最终效果。
然而，近年来针对KRAS基因突变的新型治疗方法得到了广泛研究。
一种常见的治疗方法是针对KRAS突变的靶向药物。
例如，EGFR抑制剂可有效抑制KRAS突变肿瘤细胞的增殖和存活能力。
这些靶向药物与KRAS突变所激活的细胞内信号传导途径相互作用，从而抑制肿瘤细胞的发展。
虽然一些靶向药物已经在临床中得到应用，但是由于KRAS突变的复杂性和多样性，目前还没有找到完全有效的靶向治疗方法，临床应用效果还有待进一步研究。
此外，一些个体化治疗策略也显示出了潜在的治疗效果。
例如，一项研究发现，KRAS基因突变结直肠癌患者中，亚群中一些肿瘤细胞不依赖KRAS突变进行生长和生存。
2023结直肠癌基因检测的临床意义
2023结直肠癌基因检测的临床意义结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，目前研究发现结直肠癌中存在一些相关基因可以用于结直肠癌患者的治疗、预后评估以及筛查林奇综合征，提示对这些基因进行检测具有重要的临床意义。
本文主要汇总了结肠癌常见基因异常的临床意义以及罕见基因异常的潜在临床意义。
结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和病死率一直都位居前列，并且多数结直肠癌患者在初诊时已属于中晚期，正确的治疗决定患者的预后。
随着对结直肠癌发病机制的深入研究和基因检测能力的提高,与结直肠癌发病和治疗相关的基因越来越多。
目前,国内外已有的相关指南及实践推荐检测的结直肠癌相关基因包括APC.MS1RAS和BRAF等。
此外,对于其他一些具有潜在临床意义的基因也得到越来越多的关注,包括Her-2扩增/过表达、PIK3CA突变和NTRK融合等。
合理的检测及应用结直肠癌相关分子标志物已经成为目前临床实践的重要部分。
为此，《结直肠癌分子生物标志物检测专家共识》及《结直肠癌分子标志物临床检测中国专家共识》等共识相继出台，为结直肠癌的基因检测的提供了指导方案。
结直肠癌常见基因异常RAS、BRAF和MSI检测的临床意义1、RAS基因点突变：RAS是表皮生长因子受体（EGFR）信号通路里的下游基因，可以调控细胞生长、分化、增殖和存活，其中KRAS和NRAS是由RAS家族成员基因编码的两种GTP酶蛋白，约有40%~50%的结直肠癌患者存在KRAS点突变，3.8%的结直肠癌存在NRAS点突变。
目前已有多项临床研究表明,RAS野生型的晚期结直肠癌患者能从抗EGFR单抗治疗中获益，患者的总生存时间显著延长。
因此，对于这部分患者推荐首选化疗联合抗EGFR单抗的治疗方案。
而对于RAS 基因突变患者，应用抗EGFR单抗则无明确获益，一般采用化疗联合VEGF单抗治疗。
因此，推荐在晚期或转移性结直肠癌患者开始治疗前，应进行RAS突变的检测，有助于帮助患者选择最佳的个体化治疗方案。
晚期结直肠癌患者癌组织K-ras、BRAF基因突变情况观察
晚期结直肠癌患者癌组织K-ras、BRAF基因突变情况观察姜晓东;季楚舒;李明;王刚;王峰;王玲玉;胡世莲【摘要】目的观察晚期结直肠癌患者癌组织K-ras、BRAF基因的突变情况.方法86例晚期(Ⅳ期)结直肠癌患者的癌组织标本,PCR法对K-ras、BRAF基因进行检测,分析K-ras、BRAF基因突变情况.结果 86例晚期结直肠癌患者癌组织的K-ras突变率为41.8％(36/86).36例癌组织K-ras突变中,12密码子突变的有30例,其中12密码子GGT>GAT(G12D)者10例、12密码子GGT>GTT(G12V)者7例、12密码子GGT>AGT(G12S)者6例、12密码子GGT>TGT(G12C)者5例、12密码子GGT>GCT(G12A)者2例;13密码子突变的有6例,均为13密码子GGC>GAC(G13D)者.86例晚期结直肠癌患者癌组织BRAF突变率4.7％(4/86),4例突变者均为密码子600 GTG>GAG(V600E)者.K-ras基因突变与晚期结直肠癌患者的发病部位、肿瘤分化程度、脉管癌栓及神经侵犯、淋巴转移、肝转移有关,与年龄、浸润深度、CEA水平均无关(P均>0.05),BRAF基因突变与晚期结直肠癌患者的浸润深度、发病部位有关(P均<0.05),与肿瘤分化程度、淋巴转移、脉管癌栓及神经侵犯、肝转移、年龄、CEA水平无关(P均>0.05).结论晚期结直肠癌患者癌组织K-ras基因突变率较高,且以点突变为主,主要为第2外显子的第12密码子突变.晚期结直肠癌患者癌组织BRAF基因突变均为V600E突变.K-ras、BRAF基因突变可能在晚期结直肠癌的发生、发展中起重要作用.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2019(059)006【总页数】4页(P1-4)【关键词】K-ras基因;BRAF基因;基因突变;结直肠肿瘤;结直肠癌;晚期结直肠癌【作者】姜晓东;季楚舒;李明;王刚;王峰;王玲玉;胡世莲【作者单位】中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;肿瘤免疫与营养治疗安徽省重点实验室;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院,合肥230000;肿瘤免疫与营养治疗安徽省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R735我国的结直肠癌发病率、病死率均较高。
KRAS基因突变的检测及其临床意义
KRAS基因突变的检测及其临床意义KRAS基因位于人类染色体12上，编码一种重要的蛋白质参与细胞生长、分化和存活。
KRAS基因突变是其编码的K-Ras蛋白质的氨基酸序列中发生的改变，导致蛋白质功能上的异常。
在结直肠癌中，KRAS基因突变是最常见的基因突变，发生概率高达30%至50%。
基于KRAS基因突变的特性，可以通过多个检测方法进行检测。
常见的方法包括基因测序、聚合酶链式反应(PCR)和质谱法。
其中，基因测序是最常用的方法，可以对全基因进行测序，并鉴定其中的突变。
PCR方法则可以通过扩增目标片段，再通过限制性内切酶切割的方式来检测突变。
质谱法则利用质谱仪直接检测突变基因片段的质量。
KRAS基因突变的检测结果能够对患者的治疗方案选择提供有力的依据。
目前临床上已经证实，KRAS基因突变与抗EGFR（表皮生长因子受体）治疗的反应性密切相关。
使用EGFR抗体药物治疗的病人，如果KRAS基因突变阳性，则药物的疗效会大大降低甚至无效。
因此，进行KRAS基因突变的检测可以明确患者是否可以从EGFR抗体药物治疗中获益。
此外，KRAS基因突变的检测结果还可以用于判断患者的预后。
一些研究表明，KRAS基因突变阳性的结直肠癌患者较KRAS基因突变阴性的患者预后较差。
因此，在制定治疗方案和评估患者预后时，KRAS基因突变的检测是非常重要的。
虽然KRAS基因突变检测在肿瘤治疗中已经取得了重要的进展，但仍然存在一些挑战和不足之处。
首先，现有的检测方法尚不够高效和准确，可能会出现假阴性或假阳性的结果。
其次，KRAS基因突变的异质性也是一个问题，即肿瘤中不同区域的KRAS突变状态可能存在差异。
最后，KRAS基因突变只是肿瘤发生发展过程中的一个因素，还需要结合其他基因突变和肿瘤特征来进行综合评估。
综上所述，KRAS基因突变的检测在癌症治疗中具有重要的临床意义。
通过对KRAS基因突变的准确检测，可以明确患者是否适合接受EGFR抗体药物治疗，并对疗效和预后进行评估。
结直肠癌组织中MMR蛋白表达、MSI、RAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系
㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2024.01.001结直肠癌组织中MM R 蛋白表达㊁M S I ㊁R A S 和B R A F基因突变与临床病理特征的关系*向林果,谭憬一,姚 远,孙雪琴,张阳丽ә重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心,重庆400016摘 要:目的 探讨结直肠癌患者癌组织中错配修复(MMR )蛋白表达㊁微卫星不稳定性(M S I)㊁大鼠肉瘤(R A S )基因和致癌同源体B 1(B R A F )基因突变与临床病理特征的关系㊂方法 选取该院2022年1-12月接受根治手术治疗的352例结直肠癌患者的肿瘤组织和血液标本㊁42例非肠癌患者的实体瘤组织和血液标本,采用免疫组化法检测MM R 蛋白表达,一代测序片段分析法检测M S I ,实时荧光定量聚合酶链反应检测K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变状态,分析MM R 蛋白表达㊁M S I 和3种基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系㊂结果 352例C R C 患者肿瘤组织中检出MM R 缺陷(d MM R )29例(8.2%),高度微卫星不稳定(M S I -H )26例(7.4%),K R A S 基因突变161例(45.7%),N R A S 基因突变13例(3.7%),B R A F 基因突变11例(3.1%)㊂与d MM R 有关因素为低龄㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠癌(P <0.05);与M S I -H 相关因素包括低龄㊁肿瘤家族史㊁原发于右半结肠癌(P <0.05);K R A S 和N R A S 基因高突变率分别与黏液腺癌和淋巴结转移有关(P <0.05);B R A F 基因高突变率与低分化和原发于右半结肠癌有关(P <0.05)㊂B R A F 基因突变与d MM R和M S I -H 有关(P <0.05)㊂结论 MM R 蛋白表达,M S I ,以及K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变与不同的临床病理特征有关㊂通过这5种分子标志物的联合检测可以对肿瘤进行分子分型,进一步为结直肠癌患者的个体化精准诊疗提供理论依据㊂关键词:结直肠癌; 大鼠肉瘤基因; 致癌同源体B 1基因; 错配修复蛋白; 微卫星不稳定性; 基因突变中图法分类号:R 735.3文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)01-0001-07R e l a t i o n s h i p b e t w e e n m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n e x pr e s s i o n ,M S I ,R A S a n d B R A F g e n e m u t a t i o n i n c o l o r e c t a l c a n c e r t i s s u e s w i t h c l i n i c o p a t h o l o gi c a l c h a r a c t e r i s t i c s *X I A N G L i n g u o ,T A N J i n y i ,Y A O Y u a n ,S U N X u e q i n ,Z HA N G Y a n g l i әC l i n i c a l M o l e c u l a r M e d i c a lD e t e c t i o n C e n t e r ,F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f C h o n g q i n gM e d i c a l U n i v e r s i t y ,C h o n g q i n g 400016,C h i n a A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n (MM R p r o t e i n )e x p r e s s i o n ,m i c r o s a t e l l i t e i n s t a b i l i t y (M S I ),r a t s a r c o m a g e n e (R A S )a n d c a r c i n o g e n i c h o m o l o g B1g e n e (B R A F )g e n e m u t a t i o n i n c o l o r e c t a l c a n c e r (C R C )t i s s u e s w i t h t h e c l i n i c o p a t h o l o gi c f e a t u r e s .M e t h o d s T h e t u m o r t i s s u e a n d b l o o d s a m p l e s i n 352p a t i e n t s w i t h c o l o r e c t a l c a n c e r r e c e i v i n g t h e r a d i c a l o pe r a t i o n t r e a t m e n t a n d t h e m a s s t u m o r t i s s u e a n d b l o o d s a m p l e s i n 42p a t i e n t s w i t h n o n -i n t e s t i n a l c a n c e r i n t h i s h o s pi t a l f r o m J a n u a r y t o D e c e m b e r 2022w e r e c o l l e c t e d .T h e i mm u n o h i s t o c h e m i s t r y wa s u s e d t o d e t e c t t h e MM R p r o t e i n ,t h e f i r s t g e n e r a t i o n s e q u e n c i n g f r a g m e n t a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d t o d e t e c t M S I ,a n d t h e r e a l -t i m e q u a n t i t a t i v e P C R w a s u s e d t o d e t e c t t h e g e n e m u t a t i o n s t a t u s o f K R A S ,N R A S a n d B R A F .T h e r e l a t i o n s h i p be t w e e n MM R p r o t e i n e x p r e s s i o n ,M S I a n d t h r e e g e n e m u t a t i o n s t a t e s w i t h t h e c l i n i c o p a t h o l o gi c f e a t u r e s o f C R C w a s a n a -l y z e d .R e s u l t s I n t h e t u m o r t i s s u e s o f 352p a t i e n t s w i t h C R C ,t h e 29c a s e s (8.2%)o f MM R (d MM R )a n d 26c a s e s (7.4%)o f M S I -H w e r e d e t e c t e d r e s p e c t i v e l y.T h e m u t a t i o n r a t e s o f K R A S ,N R A S ,B R A F g e n e s w e r e 45.7%(161c a s e s ),3.7%(13c a s e s )a n d 3.1%(11c a s e s ),r e s p e c t i v e l y.T h e f a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h d MM R w e r e t h e a g e ,m u c i n o u s c a r c i n o m a a n d o r i g i n a t e d f r o m r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r .T h e f a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h M S I -H i n c l u d e d t h e l o w a g e ,f a m i l y t u m o r h i s t o r y a n d o r i g i n a t e d f r o m r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r (P <0.05).H i g h m u t a t i o n r a t e s o f K R A S a n d N R A S g e n e s w e r e r e l a t e d w i t h m u c i n o u s a d e n o c a r c i n o m a a n d l y m p h n o d e m e t a s t a s i s ,r e s p e c t i v e l y .H i g h B R A F m u t a t i o n r a t e w a s a s s o c i a t e d w i t h p o o r d i f f e r e n t i a t i o n a n d o r i gi n a t e d ㊃1㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1*基金项目:重庆市科卫联合医学科研项目(2020F Y Y X 145)㊂ 作者简介:向林果,女,技师,主要从事临床检验诊断新技术研究㊂ ә通信作者,E -m a i l :346170823@q q.c o m ㊂ 网络首发 h t t p://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /50.1167.R.20231130.1627.002.h t m l (2023-12-04)f r o m f r i gh t -s i d e d c o l o n c a n c e r (P <0.05).T h e B R A F g e n e m u t a t i o n w a s r e l a t e d w i t h d MM R a n d M S I -H.C o n c l u s i o n T h e MM R p r o t e i n e x pr e s s i o n ,M S I s t a t u s ,a n d t h e g e n e m u t a t i o n s o f K R A S ,N R A S a n d B R A F a r e c o r r e l a t e d w i t h d i f f e r e n t c l i n i c o p a t h o l o gi c f e a t u r e s .T h e c o m b i n e d d e t e c t i o n o f t h e s e f i v e m o l e c u l a r m a r k -e r s c o u l d b e u s e d t o c l a s s i f yt h e t u m o r m o l e c u l e s ,w h i c h f u r t h e r p r o v i d e s t h e t h e o r e t i c a l b a s i s f o r t h e i n d i v i d u -a l i z e d p r e c i s i o n d i a gn o s i s a n d t r e a t m e n t o f t h e p a t i e n t s w i t h C R C .K e y w o r d s :c o l o r e c t a l c a n c e r ; r a t s a r c o m a g e n e ; c a r c i n o g e n i c h o m o l o g B 1g e n e ; m i s m a t c h r e p a i r p r o t e i n ; m i c r o s a t e l l i t e i n s t a b i l i t y; g e n e m u t a t i o n 结直肠癌(C R C )是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率分别位于恶性肿瘤的第2位和第5位,且呈逐渐上升趋势[1]㊂C R C 的发生㊁发展涉及多个基因和多条细胞信号传导通路,是由一系列复杂的遗传和表观遗传事件逐步累积所致[2-3]㊂相关分子标志物的检测不仅可作为C R C 筛查的有效补充,还在用药方案选择㊁预后判断及疗效预测等方面起到关键作用㊂错配修复(MM R )蛋白㊁微卫星不稳定性(M S I)㊁大鼠肉瘤(R A S )基因和致癌同源体B 1(B R A F )基因突变已被公认是影响C R C 患者个体化治疗策略的主要标志物[4]㊂此前虽有研究报道了关于MM R 蛋白㊁M S I ㊁R A S 和B R A F 基因在C R C 患者中的表达情况,但由于病例纳入标准的差异,标志物组合不同和临床资料的覆盖度不同以及样本量的限制,研究结果不尽相同[5-6]㊂因此,本研究分析了352例C R C 患者的病理标本和详细的临床资料,旨在更完整地探讨MM R蛋白表达㊁M S I ㊁R A S (含K R A S 和N R A S )基因和B R A F 基因突变与各临床病理特征的关系,以及R A S 和B R A F 基因分别与MM R 蛋白表达和M S I 的关系,为C R C 患者的个体化治疗提供理论依据㊂1 资料与方法1.1 一般资料 收集本院2022年1-12月352例病理诊断明确㊁临床病历资料完整患者(C R C 组)的C R C 组织和血液标本,以及42例非C R C 的其他实体瘤患者(非C R C 组)癌组织和血液标本㊂非C R C 的其他实体瘤包括胆管癌㊁肝癌㊁卵巢癌㊁胰腺癌㊁肺癌等共计42例㊂所有患者未接受放化疗㊁靶向或免疫治疗,未合并其他肿瘤㊂患者和家属对本次研究均知情同意,并签署知情同意书㊂本研究通过本院医学伦理委员会的审核批准(伦理审批号:K 2023-566号)㊂C R C 组和非C R C 组研究对象之间性别㊁年龄㊁病理特征等比较,差异均无统计学意义(P >0.05),具有可比性㊂见表1㊂表1 两组患者的临床及病理特征比较[n (%)]组别n性别男女年龄(岁)ɤ50>50高血压史有无糖尿病史有无吸烟史有无饮酒史有无C R C 组352201(57.1)151(42.9)51(14.5)301(85.5)86(24.4)266(75.6)53(15.1)299(84.9)97(27.6)255(72.4)78(22.2)274(77.8)非C R C 组4222(52.4)20(47.6)5(11.9)37(88.1)5(11.9)37(88.1)5(11.9)37(88.1)11(26.2)31(73.8)4(9.5)38(90.5)χ20.3400.2053.3150.2970.0353.635P0.5600.6500.0690.5860.8510.057组别n肿瘤家族史有无分化程度中+高分化低分化T NM 分期(期)Ⅰ+ⅡⅢ+Ⅳ淋巴结转移有无远处转移有无C R C 组35239(11.1)313(88.9)290(82.4)62(17.6)185(52.6)167(47.4)149(42.3)203(57.7)50(14.2)302(85.8)非C R C 组424(9.5)38(90.5)30(71.4)12(28.6)19(45.2)23(54.8)21(50.0)21(50.0)10(23.8)32(76.2)χ20.0022.9540.8050.9002.682P0.965a0.0860.3700.3430.102注:a 为连续性校正χ2检验㊂1.2 仪器与试剂 仪器:全自动免疫组化染色仪(D a k o c yt o m a t i o n )㊁基因测序仪(A B I 3500D x )㊁荧光定量P C R 仪(S L A N 96S )㊁移液器(E p pe n d o rf )㊁紫外分光光度计(N a n o D r o p On e )㊁全自动核酸提取仪(奥盛A u t o -P u r e 32A )㊁涡旋混匀器(其林贝尔Q B -328)㊁微型高速离心机(M i n i -15K )㊁恒温金属浴(奥盛M i n i T -H 2C )㊂试剂:友芝友人类K R A S 基因7种突变检测试剂盒㊁人类N R A S 基因突变检测试剂盒㊁人类B R A F 基因V 600E 突变检测试剂盒㊁新百基F F P E核酸提取或纯化试剂盒㊁桐树M S I 检测试剂盒㊁福州迈新抗体㊂1.3 方法1.3.1 MM R 蛋白表达检测 使用全自动免疫组化染色仪检测394例癌组织标本MM R 蛋白(含㊃2㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1㊁P M S 2)表达㊂M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1和P M S 2四者均表达为(+)判断为错配修复功能完整(p MM R ),任意一种表达为(-)则判为错配功能修复缺陷(d MM R )㊂1.3.2 K R A S ㊁N R A S 和B R A F 基因突变检测 每个癌组织标本制备3张8μm 厚的石蜡切片用于核酸提取,1张4μm 白片用于H E 染色㊂H E 染色后由两位病理医师镜下阅片标识出肿瘤细胞比例>20%的区域㊂于H E 染色片肿瘤富集区域刮取3张白片对应区域组织用于D N A 提取㊂采用全自动核酸提取仪进行D N A 提取并采用紫外分光光度计测得D N A 标本的浓度和纯度㊂采用实时荧光定量聚合酶链反应(P C R )技术检测标本D N A 中K R A S 基因第2外显子,N R A S 基因第2㊁3㊁4号外显子,B R A F 基因第15号外显子的热点突变㊂D N A 标本的提取㊁稀释㊁加样㊁扩增程序和结果判读均严格按照试剂盒说明书进行㊂1.3.3 M S I 检测 采用一代测序片段分析法(荧光P C R -毛细管电泳法),使用M S I 检测试剂盒对所有患者肿瘤组织和血液标本进行M S I 检测㊂试剂盒覆盖5个M S 位点(B A T -25㊁B A T -26㊁D 5S 346㊁D 2S 123㊁D 17S 250)㊂结果判定:ȡ2个M S 位点不稳定为高度微卫星不稳定(M S I -H );1个M S 位点不稳定为低度微卫星不稳定(M S I -L );若5个M S 位点均稳定,则为微卫星稳定(M S S )㊂1.4 统计学处理 采用S P S S 25.0统计软件处理和分析数据㊂计数资料采用例数或百分率表示,突变状态及临床特征单因素分析采用χ2检验,当理论数1ɤT<5时用连续性校正χ2检验;当T<1或n ɤ40时,用F i s h e r 确切概率法;多因素L o gi s t i c 回归分析基于单因素分析结果㊂采用一致性检验(K a p p a 值)统计分析免疫组化法检测MMR 蛋白和荧光P C R -毛细管电泳法检测M S I 结果的一致性程度:K a p p a 值<0表示极差;0~0.2表示微弱;>0.2~0.4表示弱;>0.4~0.6表示中度;>0.6~0.8表示高度;>0.8~1.0表示极强㊂以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况 352例C R C 患者中d MM R 检出率为8.2%,4种MM R 蛋白(M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1㊁P M S 2)的缺陷检出率分别为0.9%㊁1.7%㊁4.5%和6.8%㊂M S I -H 检出26例,M S I -L 检出3例,M S S 共323例㊂K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变率依次为45.7%㊁3.7%㊁3.1%;N R A S 基因只检出G 12D 和Q 61R 位点突变,未发现K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因之间存在交叉突变㊂42例非C R C 的肿瘤患者d M -M R 检出率㊁M S I -H 检出率㊁K R A S 和N R A S 基因突变率依次为2.4%㊁4.8%㊁23.8%㊁2.4%,未检出B R A F 基因突变㊂与非C R C 组相比,C R C 组的K R A S 基因突变率显著升高(P <0.05),两组MM R 蛋白表达,M S I ㊁N R A S 和B R A F 基因突变情况比较,差异无统计学意义(P >0.05)㊂见表2㊂表2 d MM R ,M S I -H 以及K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 常见基因突变类型分析[n (%)]组别nd MM RM S H 2缺陷M S H 6缺陷M L H 1缺陷P M S 2缺陷合计M S I -H C R C 组3523(0.9)6(1.7)16(4.5)24(6.8)29(8.2)26(7.4)非C R C 组421(2.4)0(0.0)0(0.0)1(2.4)1(2.4)2(4.8)χ21.0920.095P0.296a0.758a组别nK R A S 基因突变G 12CG 12SG 12RG 12VG 12DG 12AG 13D合计N R A S 基因突变G 12D Q 61R合计B R A F基因突变V 600EC R C 组35213(3.7)11(3.1)1(0.3)31(8.8)64(18.2)10(2.8)31(8.8)161(45.7)7(2.0)6(1.7)13(3.7)11(3.1)非C R C 组421(2.4)0(0.0)0(0.0)5(11.9)3(7.1)0(0.0)1(2.4)10(23.8)0(0.0)1(2.4)1(2.4)0(0.0)χ27.346<0.001-P 0.007>0.999a0.616b注:a 为连续性校正χ2检验;b为F i s h e r 确切概率法;表示无数据㊂2.2 不同临床病理特征C R C 癌组织中MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变状态 352例C R C 患者的5种分子标志物与临床病理特征关系的分析结果显示:年龄ɤ50岁㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠的患者d MM R 检出率更高(P <0.05);M S I -H 多见于年龄ɤ50岁㊁有肿瘤家族史㊁黏液腺癌㊁原发于右半结肠㊁T NM 分期Ⅰ+Ⅱ期㊁无淋巴结转移的患者(P <0.05)㊂K R A S 基因高突变率的临床特征表现为女性㊁无吸烟史㊁黏液腺癌(P <0.05);N R A S 基因仅在有淋巴结转移的患者中突变率升高㊃3㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1(P <0.05);B R A F 基因突变率在低分化和原发于右半结肠的患者中更高(P <0.05)㊂见表3㊂将单因素分析中差异有统计学意义的变量纳入多因素L o g i s t i c 回归模型㊂由于在单因素分析中只有淋巴结转移与N R A S 基因突变有关,因此在多因素分析中排除了N R A S 基因突变㊂多因素L o gi s t i c 回归分析结果显示,黏液腺癌患者更易发生K R A S 基因突变(P <0.05);低龄㊁有肿瘤家族史的右半结肠癌患者更易表现出M S I -H (P <0.05);d MM R 和B R A F 基因突变多因素分析结果与单因素分析一致㊂见表4㊂表3 不同临床特征下MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目nM M R 蛋白d M M Rχ2PM S IM S I -Hχ2PK R A S 基因突变χ2PN R A S 基因突变χ2PB R A F 基因突变χ2P性别 男20120(10.0)1.8160.17815(7.5)0.0040.95081(40.3)5.5870.01810(5.0)2.1650.1418(4.0)0.5690.451a女1519(6.0)11(7.3)80(53.0)3(2.0)3(2.0)年龄(岁) ɤ50519(17.6)5.6040.018a 10(19.6)11.0170.001a 21(41.2)0.5000.4791(2.0)0.0950.758a1(2.0)0.0070.935a>5030120(6.6)16(5.3)140(46.5)12(4.0)10(3.3)高血压史 有865(5.8)0.8850.3474(4.7)1.2450.26540(46.5)0.0270.8692(2.3)0.1980.657a2(2.3)0.0180.894a无26624(9.0)22(8.3)121(45.5)11(4.1)9(3.4)糖尿病史 有535(9.4)0.0050.942a4(7.5)<0.001>0.999a 21(39.6)0.9400.3324(7.5)1.4860.223a1(1.9)0.0180.894a无29924(8.0)22(7.4)140(46.8)9(3.0)10(3.3)吸烟史 有9710(10.3)0.7590.3847(7.2)0.0060.94034(35.1)6.1620.0134(4.1)<0.001>0.999a 5(5.2)1.0140.314a 无25519(7.5)19(7.5)127(49.8)9(3.5)6(2.4)饮酒史 有788(10.3)0.5400.4636(7.7)0.0140.90732(41.0)0.8970.3442(2.6)0.0670.796a3(3.8)0.0020.963a无27421(7.7)20(7.3)129(47.1)11(4.0)8(2.9)肿瘤家族史 有396(15.4)1.9950.158a 8(20.5)8.9950.003a 19(48.7)0.1570.6920(0.0)-0.376b1(2.6)<0.001>0.999a 无31323(7.3)18(5.8)142(45.4)13(4.2)10(3.2)病理类型 普通腺癌30820(6.5)8.1650.004a 19(6.2)4.0110.045a 132(42.9)8.2430.00412(3.9)0.0110.915a 10(3.2)<0.001>0.999a 黏液腺癌449(20.5)7(15.9)29(65.9)1(2.3)1(2.3)分化程度中+高分化29021(7.2)2.1660.14121(7.2)<0.001>0.999a 136(46.9)0.8890.34610(3.4)0.0240.876a 3(1.0)20.009<0.001a 低分化628(12.9)5(8.1)25(40.3)3(4.8)8(12.9)原发部位 左半结肠+直肠27217(6.3)6.2610.01215(5.5)6.1290.013119(43.8)1.9070.16712(4.4)0.9620.327a5(1.8)4.8090.028a 右半结肠8012(15.0)11(13.8)42(52.5)1(1.3)6(7.5)分期(期) Ⅰ+Ⅱ18518(9.7)1.1470.28420(10.8)6.6850.01078(42.2)2.0100.1564(2.2)2.5700.1093(1.6)2.9110.088Ⅲ+Ⅳ16711(6.6)6(3.6)83(49.7)9(5.4)8(4.8)淋巴结转移 有14910(6.7)0.7970.3725(3.4)6.1360.01373(49.0)1.1030.29410(6.7)6.6170.0107(4.7)1.3070.253a 无20319(9.4)21(10.3)88(43.3)3(1.5)4(2.0)㊃4㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1续表3 不同临床特征下M M R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁N R A S ㊁B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目nM M R 蛋白d M M Rχ2PM S IM S I -H χ2PK R A S 基因突变χ2PN R A S 基因突变χ2PB R A F 基因突变χ2P远处转移 有502(4.0)0.8090.369a2(4.0)0.4850.486a29(58.0)3.5300.0601(2.0)0.0790.779a3(6.0)0.6770.411a无30227(8.9)24(7.9)132(43.7)12(4.0)8(2.6) 注:a 为连续性校正χ2检验;b 为F i s h e r 确切概率法;-表示无数据㊂表4 影响MM R 蛋白表达,M S I ,K R A S ㊁B R A F 基因突变的多因素分析项目d M M RO R 95%C IP M S I -HO R 95%C IP K R A S 突变O R95%C IP B R A F 突变O R95%C IP性别(女v s .男)1.360.83~2.240.225年龄(ɤ50岁v s .>50岁)2.831.17~6.850.0224.681.80~12.170.002病理学类型(黏液腺癌v s .普通腺癌)3.011.23~7.390.0162.160.75~6.200.1532.481.27~4.840.008原发部位(左半结肠+直肠v s .右半结肠)0.410.18~0.920.0300.310.12~0.760.0110.230.06~0.820.024分期(Ⅰ+Ⅱ期v s .Ⅲ+Ⅳ期)2.230.26~19.400.468淋巴结转移(有v s .无)0.510.05~5.130.569分化程度(高v s .低)0.070.02~0.28<0.001肿瘤家族史(有v s .无)4.621.70~12.540.003吸烟史(有v s .无)0.670.38~1.170.157注:括号内a v s .b 表示a 同b 比较,b 为参考,b 的O R 赋值为1㊂2.3 不同MM R 蛋白表达和M S I 状态下R A S 和B R A F 基因突变情况 352例C R C 患者中,K R A S ㊁B R A F 基因突变与d MM R 有关,与p MM R 患者相比,d MM R 患者K R A S 基因突变率降低而B R A F 突变率显著升高(P <0.05)㊂M S I -H 的患者同样具有更高的B R A F 基因突变率(P <0.05),而K R A S 和N R A S 基因突变率与M S I 状态无关(P >0.05)㊂见表5㊂表5 不同MM R 蛋白表达和M S I 状态下R A S 和B R A F 基因突变情况分析[n (%)]项目n K R A S 突变χ2P N R A S 突变χ2P B R A F 突变χ2Pd MM R 297(24.1)5.9420.0152(6.9)0.1940.659a4(13.8)8.3510.004apMM R 323154(47.7)11(3.4)7(2.2)M S I -H268(30.8)2.5350.1110(0.00)-0.610b3(11.5)3.9060.048a M S I -L 及M S S326153(46.9)13(4.0)8(2.5) 注:a 为连续性校正χ2检验;b为F i s h e r 确切概率法;-表示无数据㊂2.4 MM R 蛋白检测与M S I 检测一致性分析 将M S S 和M S I -L 划为一组,d MM R 对应M S I -H ,p M -M R 对应M S S 或M S I -L ,分析免疫组化法检测MM R 和荧光P C R -毛细管电泳法检测M S I 结果的一致性㊂两组共394份标本中,MMR 蛋白检测和M S I 检测结果相符的共有378例,总体相符率为95.9%,K a p pa 一致性检验结果表明,两种检测方法检测结果高度一致(K a p p a =0.702,P <0.001)㊂结果不一致标本中有9例免疫组化检测为d MM R ,P C R -毛细管电泳结果为M S S ;7例P C R -毛细管电泳结果为M S I -H ,免疫组化显示p MMR ㊂3 讨 论MM R 基因的主要功能是修复D N A 复制和重组过程中的碱基错配,以确保基因结构的稳定性,其编码的最重要的蛋白家族包括M S H 2㊁M S H 6㊁M L H 1和P M S 2㊂d MM R 可引起微卫星复制错误㊁不能被修㊃5㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n ,J a n u a r y 2024,V o l .21,N o .1复,导致微卫星长度改变,从而表现为M S I㊂既往研究已经证实,MM R基因突变或高甲基化和M S I不仅是林奇综合征的主要原因,也是C R C的重要发病机制之一[2,7]㊂本研究显示,d MM R在C R C患者中的检出率为8.2%,与之前报道3%~13%的亚洲C R C患者表现出d MM R状态的结果相符[8];M S I-H检出率为7.4%,略低于d MM R检出率㊂在本研究中,与d MM R和M S I-H高检出率有关的共同临床病理因素为低龄和原发部位为右半结肠癌,表明d MM R和M S I-H与C R C疾病早发性和原发部位有关㊂也有研究报道,T NM分期为Ⅰ~Ⅱ期的无淋巴结转移的C R C患者中M S I-H的发生率较高[9-10],这与本研究中M S I的单因素分析结论相符㊂但在多因素L o g i s-t i c回归分析中,与M S I相关因素排除了病理学类型㊁分期和淋巴结转移,显示有肿瘤家族史的患者更容易发生M S I-H,黏液腺癌更容易发生d MM R㊂既往研究发现,d MM R或M S I-H的C R C患者中B R A F V600E突变和M L H1启动子甲基化与散发性C R C密切相关[11-12]㊂本研究显示,B R A F V600E突变与d MM R和M S I-H密切相关,其突变率在d MM R 和M S I-H患者中明显高于p MM R和非M S I-H(M S S 和M S I-L)患者㊂因此,当C R C患者单独检测到M S I-H或M L H1缺失时,有必要进行B R A F基因突变和(或)M L H1启动子甲基化的后续检测,如有B R A F V600E突变则不能确诊为林奇综合征㊂有报道指出,在d MM R或M S I-H的转移性C R C患者中,若存在B R A F基因突变则提示生存率更差,而R A S基因突变可能与生存率无关[13]㊂尽管MM R蛋白表达和M S I反映的是同一生物学事件,但本研究中MM R蛋白表达和M S I与临床病理特征的关系仍存在略微不同,这可能是由于两种标志物检测结果不完全一致所致㊂同一标本出现免疫组化结果为p MM R而荧光P C R-毛细管电泳法结果为M S I-H这种情况的原因:一方面可能是MM R蛋白的基因发生变异,这些变异虽不影响蛋白的抗原结构,但却能影响其MM R功能,导致微卫星位点MM R 失败;另一方面可能是其他MM R蛋白(除外M S H2㊁M S H6㊁M L H1和P M S2这4种主要的MM R蛋白)的缺失亦会影响微卫星的稳定性,表现出p MM R而微卫星不稳定[14]㊂当然,由于MM R蛋白之间存在功能重复(P M S2和P M S1㊁M S H6和M S H3),当孤立性的M S H6缺失时,M S H3可以功能性替代部分M S H6,活化MM R系统而继续保留M S S状态,从而表现为d MM R而M S S[14]㊂此外,免疫组化法依赖于染色过程,染色质量不佳会影响结果准确判读,同一份标本不同的切取角度也有可能造成两种检测结果不一致㊂因此,为提高检测准确性,不管是在林奇综合征的筛查时,还是C R C患者治疗指导时,建议进行MM R蛋白和M S I联合检测,相互补充㊂表皮生长因子受体(E G F R)是临床上治疗C R C 的主要靶点之一㊂K R A S㊁N R A S和B R A F基因是E G F R依赖的下游丝裂原活化蛋白激酶(MA P K)信号通路中的3个关键分子,这些基因的突变可导致MA P K通路的激活,促进大多数癌细胞增殖和抗凋亡,使E G F R受体抑制剂无效㊂临床研究表明,M S S㊁R A S和B R A F基因野生型的转移性C R C患者能从抗E G F R单抗治疗中获益[15]㊂本研究中K R A S基因第2外显子突变率为45.7%,与文献[16]报道结果相近㊂在单因素分析中,与K R A S基因突变有关的临床病理参数为女性㊁黏液腺癌和无吸烟史,但多因素L o-g i s t i c回归分析显示,仅黏液腺癌是K R A S基因突变的独立影响因素㊂已有研究报道,由于C R C中K R A S等位基因的多样性,不同K R A S基因突变可能具有不同的预后,但导致预后不同的原因尚不清楚㊂其中K R A S基因第2外显子12号密码子G12C已被证明与较差的总生存率相关[17-18]㊂N R A S基因突变较少发生,本研究中C R C组N R A S基因突变检出率为3.7%,有淋巴结转移的患者N R A S基因突变率高于无淋巴结转移者(P=0.010),有肿瘤家族史和M S I-H的C R C患者未检测出N R A S基因突变㊂笔者推测N R A S突变可能与淋巴结转移㊁肿瘤家族史及M S I有一定关系,但因本次N R A S基因突变例数较少,有待增加病例数进一步分析证实㊂B R A F基因编码一种R A F激酶蛋白,参与调控细胞生长㊁增殖㊁分化和凋亡等过程,其突变状态与多种肿瘤的发生㊁发展和临床预后相关㊂B R A F基因V600E突变往往被认为是肿瘤侵袭性的标志,与B R A F野生型相比,它是转移性C R C患者预后不良和总生存期更短的危险因素[19]㊂本研究中,C R C组B R A F基因V600E突变率为3.1%,低于西方人群8%~12%的突变率[20],但与之前报道的中国C R C患者B R A F基因突变率相当[21],进一步证实C R C患者B R A F基因突变在中国和西方人群存在种族差异㊂本研究显示B R A F基因在低分化㊁原发于右半结肠的患者中突变率高,但未发现与淋巴结转移和远处转移等其他不良预后的临床病理特征有关㊂B R A F和R A S基因同处于R A S-R A F-MA P K通路,突变结果相互排斥,本研究未发现R A S和B R A F基因同时发生突变㊂毋庸置疑,MM R蛋白,M S I,以及K R A S㊁N R A S㊁B R A F基因已经成为需要新辅助治疗和转移性C R C肿瘤患者的常规检测项目[4]㊂随着分子诊断技术的飞速发展,适用于肿瘤早筛早诊的分子标志物也得到越来越多的关注和重视㊂硫酸类肝素蛋白多糖2(S D C2)㊁隔膜蛋白9(S E P T9)㊁组织因子通路抑制因子2(T F P I2)基因被认为是潜在的C R C早筛分子标志物,特别是粪便标本S D C2基因甲基化检测,有望普及作为一种新的无创的高灵敏度㊁高特异度的㊃6㊃检验医学与临床2024年1月第21卷第1期 L a b M e d C l i n,J a n u a r y2024,V o l.21,N o.1C R C辅助诊断方法[22]㊂循环肿瘤细胞(C T C)检测也是一种理想的临床肿瘤液体活检技术,可提供C R C 患者疾病状态的实时信息,有助于C R C的预后评估㊁治疗反应监测㊁复发转移风险评估等㊂综上所述,本研究分析了C R C患者的MM R蛋白,M S I,以及K R A S㊁N R A S㊁B R A F基因共5个分子标志物,发现它们与多种临床病理特征相关㊂这些发现为C R C的临床诊断和个体化精准治疗提供了额外的支持㊂本研究也存在不足,缺乏这些患者的临床治疗和预后的数据,不能分析这些分子标志物与疗效或预后之间的关系,下一步将继续完善随访数据,进行更深入全面的探讨㊂参考文献[1]X I A C,D O N G X,L I H,e t a l.C a n c e r s t a t i s t i c s i n C h i n aa n d U n i t e d S t a t e s,2022:p r o f i l e s,t r e n d s,a n d d e t e r m i-n a n t s[J].C h i n M e d J,2022,135(5):584-590. 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结直肠腺癌BRAF基因突变对临床治疗和预后的意义
结直肠腺癌BRAF基因突变对临床治疗和预后的意义目的研究结直肠腺癌BRAF基因突变对临床治疗和预后的意义。
方法整群收集该院2009年1-12月经病理科诊断手术的166例癌组织标本及61例癌旁正常组织。
用PCR-DNA测序法测BRAF突变情况，对病理资料统计和随访60个月生存情况。
结果①癌组织中BRAF突变率9.04%，常见类型BRAF-V600E，癌旁正常组织无突变。
②癌组织分级低突变率较组织分级高的患者高，有淋巴转移突变率较无转移患者的高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与患者性别、年龄、发病部位、远处转移无相关性（P>0.05）。
③癌组织为BRAF突变型的患者生存率较野生型的低，两条生存曲线明显分开差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论结直肠癌患者中，癌组织BRAF基因突变率明显高于癌旁正常组织与分化程度、淋巴转移有相关性，与患者生存率成负相关提示预后不良。
标签：结直肠癌：BRAF基因：生存率[文献标识码]A我国CRC发病率以每年3.9%速度递增占恶性肿瘤的第3位，病死率第5位。
患者确诊后5年存活率仅为55%左右。
随着对CRC发病分子机制和信号传导通路的深入研究，证明RAS-BRAF-MAPK细胞信号转导通路激活与恶性肿瘤的发病、进展和恶性程度密切相关。
原癌基因BRAF作为一种基因编码的丝/苏氨酸特异性激酶，是该通路重要的细胞内信号转导因子，使凋亡诱导因子失活减少细胞凋亡促进肿瘤细胞增殖、组织分化、血管生成和侵袭转移等。
随着靶向药物临床应用，有效降低了患者死亡率提高生存质量，同时出现了临床耐药。
临床证实KRAS、BRAF基因突变患者在抗EGFR靶向治疗中无效，预后生存差，只有野生型患者才能从抗EGFR单克隆抗体治疗中获益。
BRAF基因与临床耐药及不良预后的关系尚有争议圈，该研究旨在探讨其对临床治疗和预后的影响。
1 资料与方法1.1 一般资料收集该院2009年1-12月经病理科诊断手术166例原发结直肠癌腺癌组织标本及其癌旁正常组织61例作为对照组。
结直肠癌组织中KRAS和BRAF基因突变与临床病理特征及预后的关系
Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１ａｎｄｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅ ｓｅａｒｃｈ，２００７，１３（１０）：２８３６－２８４８．［２７］ ＣＨＵＮＧＨＷ，ＬＥＥＳＧ，ＫＩＭＨ，ｅｔａｌ．Ｓｅｒｕｍｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１（ＨＭＧＢ１）ｉｓｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００９，７：３８．［２８］ ＢＡＯＧ，ＱＵＦ，ＨＥＬ，ｅｔａｌ．ＰｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＴａｇＳＮＰｒｓ１０４５４１１ｉｎＨＭＧＢ１ｏｆｔｈｅａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｎａｃｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌｏＳＯｎｅ，２０１６，１１（４）：ｅ０１５４３７８．［２９］ ＰＯＳＥＲＩ，ＧＯＬＯＢＭ，ＢＵＥＴＴＮＥＲＲ，ｅｔａｌ．ＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＨＭＧ１ｌｅａｄｓｔｏｍｅｌａｎｏｍａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍａｌｉｇ ｎａｎｔｍｅｌａｎｏｍａｃｅｌｌｓａｎｄｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｉｒｍａｌｉｇｎａｎｃｙｐｈｅｎｏ ｔｙｐｅ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００３，２３（８）：２９９１－２９９８．［３０］ ＳＡＳＡＨＩＲＡＴ，ＫＩＲＩＴＡＴ，ＯＵＥＮ，ｅｔａｌ．Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｍｅｌａｎｏｍａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｎｏｄａｌｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒ ｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，９９（９）：１８０６－１８１２．［３１］ ＴＡＧＵＣＨＩＡ，ＢＬＯＯＤＤＣ，ＤＥＬＴＯＲＯＧ，ｅｔａｌ．ＢｌｏｃｋａｄｅｏｆＲＡＧＥ－ａｍｐｈｏｔｅｒｉｎｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｕｍｏｕｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅ ｔａｓｔａｓｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０５（６７８４）：３５４－３６０．［３２］ ＳＵＮＳ，ＺＨＡＮＧＷ，ＣＵＩＺ，ｅｔａｌ．Ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ－１ａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｖａｌｕｅｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓＴｈｅｒ，２０１５，８：４１３－４１９．［３３］ ＹＡＮＧＧＬ，ＺＨＡＮＧＬＨ，ＢＯＪＪ，ｅｔａｌ．ＩｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃ ｅｒ［Ｊ］．ＪＳｕｒｇＯｎｃｏｌ，２０１２，１０６（１）：５７－６１．［３４］ ＪＩＡＮＧＣ，ＱＵＸ，ＫＥＨ，ｅｔａｌ．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＨＭＧＢ１／ＴＬＲ４ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄｔｈｅｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｏ ｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｐｏｒｔｓ，２０１８，１８（３）：３０９３－３０９８．［３５］ ＱＩＥＧＱ，ＷＡＮＧＣＴ，ＣＨＵＹＦ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１／ＲＡＧＥｐｒｏｔｅｉｎｉｎｒｅｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒ ｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１５，８（６）：６２６２－６２６８．［３６］ ＺＨＡＮＧＸ，ＹＵＪ，ＬＩＭ，ｅｔａｌ．ＴｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎＡｓｉａｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙ，２０１６，９：４９０１－４９１１．［３７］ ＺＨＡＮＧＬ，ＳＨＩＨ，ＣＨＥＮＨ，ｅｔａｌ．Ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｄｒｉｖｅｎｂｙｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ－ｉｎｄｕｃｅｄＨＭＧＢ１／ＴＬＲ２／ＹＡＰ／ＨＩＦ－１ａｌｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｅｎｈａｎｃｅｓｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｎｅｓｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｓ，２０１９，１０（１０）：７２４．（编校：谈静）结直肠癌组织中ＫＲＡＳ和ＢＲＡＦ基因突变与临床病理特征及预后的关系陈海霞，何亚楠，王维娜，马晓梅ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＫＲＡＳａｎｄＢＲＡＦｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄｐｒｏｇｎｏ ｓｉｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓＣＨＥＮＨａｉｘｉａ，ＨＥＹａｎａｎ，ＷＡＮＧＷｅｉｎａ，ＭＡＸｉａｏｍｅｉＰａｔｈｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＴｕｍｏｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｒｕｍｑｉ８３００１１，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＫＲＡＳａｎｄＢＲＡＦｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ（ＣＲＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１３４ｃａｓｅｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｌｏｃｋｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ（ＡＲＭＳ）ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＫＲＡＳｇｅｎｅｉｎ１３４ｃａｓｅｓｏｆＣＲＣｗａｓ４９．３％（６６／１３４），ａｎｄｔｈｅｅｘｏｎ２ｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ４２．５％（５７／１３４），ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅ１２ａｎｄ１３ｃｏｄｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｓ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ３５．１％（４７／１３４）ａｎｄ７．５％（１０／１３４）．Ｔｈｅｅｘｏｎ３ｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｃｏ ｄｏｎ６１ｗａｓ１．５％（２／１３４）．Ｔｈｅｅｘｏｎ４ｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ１１７／１４６ｃｏｄｏｎｓｗｅｒｅ５．２％（７／１３４）．ＴｈｅＢＲＡＦＶ６００Ｅｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ４．５％（６／１３４）．ＴｈｅＫＲＡＳｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ５４．５％（５４／９９）ｉｎｔｈｅｌｅｆｔｃｏｌｏｎ，ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｒｉｇｈｔｃｏｌｏｎ３４．３％（１２／３５）．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅＢＲＡＦｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ１４．３％（５／３５）ｉｎｔｈｅｒｉｇｈｔｃｏｌｏｎ，ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｌｅｆｔｃｏｌｏｎ１．０％（１／９９）．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎＫＲＡＳａｎｄＢＲＡＦｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓｓｕｃｈａｓｇｅｎｄｅｒ，ａｇｅ，ｎａｔｉｏｎ，ｔｕｍｏｒｓｉｚｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｄｅｇｒｅｅ，ｌｙｍｐｈａｔｉｃｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｇｅ（Ｐ＞０．０５）．ＴｈｅｍｅｄｉａｎｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆＣＲＣｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＫＲＡＳｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｗａｓ４８ｍｏｎｔｈｓ【收稿日期】 ２０２０－０１－１９【修回日期】 ２０２０－０４－１１【基金项目】 新疆维吾尔自治区自然科学基金（编号：２０１８Ｄ０１Ｃ２５４）【作者单位】 新疆医科大学附属肿瘤医院病理科，新疆 乌鲁木齐 ８３００１１【作者简介】 陈海霞（１９８３－），女，蒙古族，陕西人，主治医师，硕士，主要从事肿瘤病理诊断工作。
结直肠癌KRAS和BRAF基因突变及其与临床病理的相关性
结直肠癌KRAS和BRAF基因突变及其与临床病理的相关性谢明智;李科志;利基林;蔡政民;胡榜利【摘要】目的探讨结直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系.方法应用实时荧光TaqMan探针法检测322例结直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变情况,分析患者不同年龄、性别、肿瘤大小、分化程度等不同组别的基因突变情况与临床病理特征的关系.结果 322例结直肠癌患者中,结肠癌患者182例,直肠癌患者140例,KRAS基因突变105例(32.6％),BRAF基因突变13例(4.0％).结肠癌患者和直肠癌患者在性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);但结肠癌患者T3 +T4的比例高于直肠癌患者(P=0.004).结肠癌和直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变情况比较差异无统计学意义(P＞0.05).在105例KRAS基因突变中,G12D突变40例(38.1％),G12S突变38例(36.2％),G12A突变12例(11.4％),G12V突变9例(8.6％),Gl3A突变6例(5.7％).13例BRAF基因突变型均为V600E型.右半结肠癌的KRAS基因突变率显著高于左半结肠癌和直肠癌(P=0.010);BRAF基因突变的患者年龄高于未突变者(P =0.022),突变患者发生淋巴结转移的比例比未发生转移的比例低(P =0.020);突变患者Ⅲ+Ⅳ期的比例低于未突变患者(P =0.044).结论结直肠癌患者存在较高的KRAS基因突变率,而BRAF基因突变率较低.KRAS基因突变与肿瘤的原发部位密切相关,且与BRAF基因突变无直接相关性.【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2019(040)008【总页数】4页(P1128-1131)【关键词】结直肠肿瘤;KRAS;BRAF;基因突变【作者】谢明智;李科志;利基林;蔡政民;胡榜利【作者单位】广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部广西南宁530021;广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部广西南宁530021;广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部广西南宁530021;广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部广西南宁530021;广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R735.3;R394.3结直肠癌是消化系统最常见的肿瘤之一，除了手术治疗外，肿瘤靶向治疗成为结直肠癌的重要治疗方式，其中抗表皮生长因子受体(EGFR)是目前治疗转移性结直肠癌的主要靶向药物[1]。
结直肠癌的肿瘤基因突变及靶向治疗策略
结直肠癌的肿瘤基因突变及靶向治疗策略引言结直肠癌作为常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内造成了很高的发病率和死亡率。
随着生物技术和基因工程的发展，我们对结直肠癌的分子机制有了更深入的认识，尤其是肿瘤基因突变。
了解结直肠癌的肿瘤基因突变及靶向治疗策略对于疾病的预防、早期诊断和治疗具有重要意义。
结直肠癌的肿瘤基因突变肿瘤基因突变是结直肠癌发生和发展的关键环节之一。
通过对结直肠癌组织样本的基因组学分析，已经发现了很多与结直肠癌相关的肿瘤基因突变。
以下是一些常见的结直肠癌肿瘤基因突变：1.APC基因突变：APC基因是人类结直肠癌发生的重要抑制基因，突变可以导致Wnt信号通路的活化，促进肿瘤的生长和扩散。
2.KRAS基因突变：KRAS基因突变是结直肠癌中最常见的突变之一，约占50%的肿瘤病例。
KRAS基因突变会导致RAS/MAPK信号通路的持续激活，促进肿瘤细胞的增殖和存活。
3.TP53基因突变：TP53基因编码的p53蛋白是细胞周期调控和DNA损伤修复的主要调节因子之一。
TP53基因突变会导致p53功能丧失，增加结直肠癌细胞的恶性程度和化疗耐药性。
4.BRAF基因突变：BRAF基因突变在结直肠癌中较为罕见，但与它在其他肿瘤中突变相关的V600E突变位点却异常活跃。
BRAF基因突变会导致RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的异常激活，促进肿瘤的进展。
以上只是结直肠癌肿瘤基因突变中的一部分。
通过对这些突变的分析和研究，我们可以更好地理解结直肠癌的发生机制，为临床治疗提供更精准的靶向策略。
结直肠癌的靶向治疗策略基于对结直肠癌肿瘤基因突变的深入了解，靶向治疗成为了一种有前景的治疗策略。
以下是一些常用的结直肠癌靶向治疗策略：1.EGFR抑制剂：EGFR（表皮生长因子受体）在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用，EGFR抑制剂可以阻断信号通路的传导，抑制肿瘤生长。
例如西妥昔单抗（Cetuximab）和曲妥珠单抗（Panitumumab）等。
结直肠癌患者肿瘤组织中KRAS、NRAS和BRAF基因各亚型突变状况分析
结直肠癌患者肿瘤组织中KRAS、NRAS和BRAF基因各亚型突变状况分析郑宏江;尤雅坤;索成云【摘要】目的：分析结直肠癌患者肿瘤组织中 KRAS、NRAS和BRAF基因各亚型突变状况。
方法选取我院2014年6月至2015年6月期间就诊并经病理学检查确诊的结直肠癌患者82例作为本次研究对象，常规石蜡包埋组织，并使用甲醛固定，提取DNA组织，采取实时荧光定量PCR技术测定石蜡组织中KRAS基因、NRAS基因和BRAF基因突变情况。
结果本组82例患者中，有34例（41.46%）检测到KRAS基因突变，其中12密码子突变26例（31.71%），包括G12A 点突变4例（4.88%）、G12C 点突变4例（4.88%）、G12D点突变12例（14.63%）、G12S点突变3例（3.66%）、G12V点突变2例（4.88%）、G12R点突变1例（1.22%）；有8例（9.76%）检测到KRAS基因13密码子突变，均为G13D点突变；有4例（4.88%）检测到NRAS基因突变，其中12密码子突变2例（2.44%），包括G12D点突变1例（1.22%）、G13D点突变1例（1.22%），检测到61基因突变2例（2.44%），包括Q61H点突变1例（1.22%）、Q61R点突变1例（1.22%）；有3例（3.66%）检测到BRAF基因突变，均为V600E点突变。
结论 KRAS基因在结直肠癌患者中的突变率较高，虽然NRAS基因和 BRAF 基因突变率较低，但临床不容忽视。
通过KRAS基因、NRAS基因和BRAF基因检测，为临床结直肠癌患者的治疗提供重要参考信息。
【期刊名称】《现代消化及介入诊疗》【年(卷),期】2016(021)004【总页数】3页(P559-561)【关键词】结直肠癌;KRAS;NRAS;BRAF;基因突变【作者】郑宏江;尤雅坤;索成云【作者单位】056200 冀中能源峰峰集团有限公司总医院病理科;056200 冀中能源峰峰集团有限公司总医院手术室;056200 冀中能源峰峰集团有限公司总医院消化内科【正文语种】中文结直肠癌是我国常见的消化道肿瘤之一，发病率较高，位居我国恶性肿瘤第3位，仅次于肺癌、乳腺癌，且死亡率较高，占全部恶性肿瘤人数的6%～8%［1］。
结直肠癌中KRAS基因突变及意义
结直肠癌中KRAS基因突变及意义丁莉;韩义明;郑杰;沈金花;邹先进【摘要】目的观察结直肠癌患者的KRAS基因突变,探讨其生物学意义.方法收集湖北省荆门市第一人民医院2012年9月～ 2015年7月以双脱氧末端标记法行KRAS基因测序的结直肠癌根治标本378例,分析KRAS基因12/13密码子基因状态.结果 378例标本中,KRAS基因12/13密码子野生型247例,突变型131例(34.7％).KRAS基因突变与患者年龄、性别无关;密码子G12突变率在有淋巴结转移组中较高,而G13突变与淋巴结转移无关.实验共检测到8种突变类型,以G12D、G12V、G13D三种类型最多,G12F(GGT＞ TIT)为罕见突变类型.结论 KRAS基因突变的机制尚不明确,测序法能够判读少见的突变类型,有利于精准化治疗.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2016(032)010【总页数】4页(P1156-1159)【关键词】结直肠肿瘤;测序;KRAS基因状态;G12F【作者】丁莉;韩义明;郑杰;沈金花;邹先进【作者单位】湖北省荆门市第一人民医院病理科,荆门448000;湖北省荆门市第一人民医院病理科,荆门448000;湖北省荆门市第一人民医院病理科,荆门448000;中山达安基因有限公司,广州510665;湖北省荆门市第一人民医院病理科,荆门448000【正文语种】中文【中图分类】R735.3我国结直肠癌年新发病例数高达15万，40%以上的结直肠癌患者确诊时肿瘤已经发生转移而失去根治性手术治疗的机会，而常规化疗无法获得长期疗效。
2015年《美国国立癌症综合网络(NCCN)结直肠癌指南》提出，结直肠癌患者应该进行全RAS及BRAF基因突变检测。
RAS基因家族的KRAS基因突变是结直肠癌的早期事件，其在转移灶及原发灶中保持高度一致性[1]。
检测KRAS基因状态，是结直肠癌连续规范性治疗的基础。
KRAS基因的2号外显子12/13密码子因突变率高、突变方式多样化、药物治疗差异化备受关注。
结直肠癌靶向治疗个体化检测—KRASNRAS与BRAF基因
结直肠癌靶向治疗个体化检测—KRAS，NRAS 与BRAF基因突变检测来源：玩转文献一、结直肠癌与肿瘤靶向治疗概述结直肠癌（Colorectal Cancer, CRC）是常见的消化道恶性肿瘤。
在我国常见恶性肿瘤死亡中，结直肠癌患者在男性占第五位，女性占第六位。
发病多在60~70岁，且男性发病率高于女性。
结直肠癌早期诊断不明确，癌细胞转移率高,预后效果差，导致大多数患者发现时多为晚期。
传统同病同治的治疗手段忽略了患者的个体差异，往往治疗效果不佳。
个体化治疗通过相关基因的检测，可以帮助患者选择合适的靶向药物，提高治疗的针对性，最大程度的延长患者的生存期。
分子靶向药物已成为结直肠癌个体化治疗和综合治疗的一线方案。
目前针对结直肠癌靶向治疗的药物主要为抗EGFR(表皮生长因子受体，Epidermal growth factor receptor，EGFR)单抗（西妥昔单抗和帕尼单抗）。
多项研究表明，抗EGFR单抗的治疗疗效与RAS(KRAS 与NRAS)和BRAF基因型密切相关。
二、KRAS、NRAS和BRAF基因型与靶向药物疗效的相关性1. KRAS与BRAF基因的概述RAS(KRAS与NRAS)与BRAF基因均为原癌基因，分为野生型和突变型。
在正常人群基因组中，RAS与BRAF基因通过EGFR/RAS/RAF/MAPK信号通路来调控细胞的生长、分化和凋亡。
当RAS与BRAF基因在各种内外诱因的诱导下发生突变时，不受上级EGFR信号的调控，保持该信号通路的持续活化状态，从而使得细胞过度的增殖，血管生成，最后导致肿瘤的发生与转移。
2. KRAS、NRAS与BRAF基因型与靶向药物疗效密切相关靶向药物的治疗有效性受RAS和BRAF基因状态的影响。
RAS与BRAF基因突变都会导致EGFR 靶向药物无效或者疗效差。
有文献报道，在结直肠癌患者中约30%～55%伴有KRAS基因突变，约1%～6%NRAS基因突变。
结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF基因突变与临床病理特征关系的研究
结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF基因突变与临床病理特征关系的研究贠田;王长松;李富林;吕学霞;蒙念龙;高春芳【摘要】目的探讨在结直肠癌中KRAS、NRAS和BRAF基因突变的状态与病理学因素之间的关系.方法采用RT-PCR的方法检测389例结直肠癌患者的KRAS、NRAS和BRAF基因突变情况,并用统计学方法分析与临床病理学因素之间的关系.结果KRAS总突变率为42.4％,该基因在直肠的突变率显著高于结肠.NRAS和BRAF基因的突变率分别为4.6％和4.1％,这两个基因的突变状态与临床病理学关系不大.结论KRAS、NRAS和BRAF基因属于相互联系的通路,一个发生突变将制约另外两个基因的发生改变,检测结直肠癌中KRAS、NRAS和BRAF基因的突变状态能够更好地指导个体化治疗.【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2019(036)008【总页数】4页(P733-736)【关键词】结直肠癌;KRAS;NRAS;BRAF;临床病理特征【作者】贠田;王长松;李富林;吕学霞;蒙念龙;高春芳【作者单位】471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科;471031 河南洛阳,解放军第989医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R735.34散发性结直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率长期高居恶性肿瘤前列。
结直肠癌的发生发展是多基因、多步骤的复杂过程，个体差异较大，随着精准治疗时代的来临，基于基因检测治疗策略的选择在提升结直肠癌的诊治水平中发挥着巨大的作用，在结直肠癌靶向治疗过程中检测KRAS、NRAS、BRAF基因突变状态对于结直肠癌的治疗有很重要的意义［1，2］。
结直肠癌是一个复杂的多基因参与的疾病，这些个体化药物的靶点基因在结直肠癌中起到关键的作用，因此探讨这些靶点与病理学因素之间的关系也很有必要。
结直肠癌患者肿瘤组织中 KRAS和 BRAF基因突变的分子病理检测分析
结直肠癌患者肿瘤组织中 KRAS和 BRAF基因突变的分子病理检测分析王海艳;许春伟;吴永芳;张博;邵云;满秋红;邰艳红;李晓兵【摘要】Objective To investigate the mutations of gene subtypes of KRAS gene and BRAF gene in colorectal cancer .Method Direct sequencing methods was used to test the tissues in 263 patients of colorectal cancer with par‐affin tissue KRAS and BRAF gene mutation .Result The total mutation rate in KRAS gene was 31 .56% (83/263) in colorectalcancer .KRAS gene mutation rate in codon 12 of exons 2 was 23 .95% (63/263) ,including point muta‐tionsG12C(3/263) ,G12D(28/263) ,G12V(23/263) ,G12S(4/263) ,G12A(3/263) and G12R(1/263) .KRAS gene mutation rate in codon 13 of exons 2 was 6 .46% (17/263) ,which were detected all point mutation G13D and was not detected G13C ,and KRAS gene mutation rate in codon 61 of exons 3 was 1 .14% (3/263) ,including point mutations Q61H(1/263) ,Q61L(1/263) and Q61R(1/263) .The total mutation rate in BRAF gene was 1 .52%(4/263) ,which was detected all point mutation V 600E .Conclusion The mutation rate of KRAS gene is high in colorec‐tal cancer and these mutations predominantly occur in G 12D ,G12V and G13D .KRAS and BRAF mutation can guide the Rituximab or Panitumumab target for therapy .%目的：探讨结直肠癌患者肿瘤组织中KRAS和BRAF基因各亚型突变情况。
结直肠癌KRAS，NRAS，BRAF基因突变分析及临床意义
结直肠癌KRAS，NRAS，BRAF基因突变分析及临床意义赵丽辉;吴杏儿;孟凤娇【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(46)A03【摘要】目的检测结直肠癌（CRC）组织中KRAS／NRAS、BRAF基因突变情况，探讨与CRC临床病理特征的关系。
方法通过探针扩增阻滞突变系统（ARMS）荧光定量PCR法对36例CRC患者同时进行KRAS／NRAS及BRAF基因检测，研究其突变率及与临床特征的相关性。
结果36例CRC患者中KRAS／NRAS基因突变19例（52．78％），其中KARS基因突变18例（50．00％），以外显子2（G12C、G12R、G12V、G12A、G13C）突变率最高，占25．00％，其次为外显子2（G12S、G12D）16．67％，外显子2（G13D）2．78％和外显子4（K117N、A146T、A146V、A146P）5．59％，未检测到外显子3突变，其中1例为外显子2上G12S、G12D和G12C、G12R、G12V、G12A、G13C均突变；NRAS基因突变1例（2．78％），为外显子2（G12D、G12S）的点突变，1例直肠中分化腺癌患者在不同时期检测出不同位点的突变。
不同性别、年龄、病理分级、转移及部位的KRAS基因突变比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。
中分化腺癌的NRAS基因突变率比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。
检测BRAF基因突变1例，突变率为2．78％，临床病理分析低分化癌突变率相对较高，差异有统计学意义（P〈0．05）。
KRAS／NRAS基因突变患者未检测到BRAF基因突变。
结论CRC组织RAS基因突变以KRAS外显子2上的12、13密码子突变率最高；KRAS／NRAS基因与BRAF基因具有排他性；不同时期、部位基因突变位点也会不同；KRAS／NRAS及BRAF基因检测是结、直肠癌患者分子靶向治疗及预后的重要依据和必要检测手段。
【总页数】4页(P67-70)【关键词】结直肠癌;KRAS/NRAS基因;BRAF基因;突变率【作者】赵丽辉;吴杏儿;孟凤娇【作者单位】广东省中山市人民医院分子诊断中心,528403;广东省中山市人民医院病理科,528403【正文语种】中文【中图分类】R739.5【相关文献】1.结直肠癌KRAS、NRAS和BRAF基因突变与临床病理特征的回顾性分析 [J], 侯悦;李少波;师晓琴;傅国辉;伍均2.结直肠癌KRAS和NRAS及BRAF基因突变状态分析 [J], 沙如拉;李文新3.423例结直肠癌KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA基因突变与临床病理的关系分析[J], 朱凤伟; 吕亚莉; 钟梅; 董周寰; 王琼; 谭心睿; 石怀银4.423例结直肠癌KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA基因突变与临床病理的关系分析[J], 朱凤伟; 吕亚莉; 钟梅; 董周寰; 王琼; 谭心睿; 石怀银5.结直肠癌患者KRAS,NRAS和BRAF基因突变检测分析 [J], 祝继原;吴鹤;张震;宋月佳;王梦迪;张世超;鹿芃恬;戚基萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
结直肠癌KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因联合突变分析及临床意义
论著·临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS 结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤。
最新数据统计显示，结直肠癌发病率居全球第3位，病死率居第4位[1]。
目前化疗是结直肠癌最主要的治疗手段之一，然而近年报道结直肠癌化疗的有效率仅30%[2]。
目前对于结直肠癌的治疗已进入了靶向治疗时代，靶向治疗药物作用主要靶点之一是表皮生长因子受体(EGFR)，EGFR 与血管生成、肿瘤细胞增殖、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关，其下游信号转导通路主要有Ras/Raf/MEK/ERK-MAPK 和PI3K/Akt/mTOR 通路，抗EGFR 抗体能阻断其下游信号通路传导，从而发挥抗肿瘤的作用。
常用靶向药物为EGFR 的单克隆抗体西妥昔单抗和帕尼单抗。
近年的研究表明，只有野生型KRAS 基因患者才对抗EGFR 单克隆抗体治疗有效，而突变型的患者无效[3-5]。
这表明EGFR 下游信号通路中的其他基因突变可能导致结直肠癌患者无法受益[6]。
因此，检测与分析结直肠癌患者的KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA 等多基突变，能更准确地预测患者用抗EGFR 单抗药物的疗效。
本研究采用实时荧光定量PCR 法(qRT-PCR)对58例贵州省内结直肠癌病灶组织中的KRAS、BRAF、NRAS、PIK3CA 4个基因位点进行检测，分析基因突变情况，探讨其临床意义，指导结直肠癌的临床个体化治疗，为贵州省个体化靶向治疗结直肠癌提供依据。
资料与方法2015年10月-2017年6月收集结直肠癌石蜡包埋标本58例，男27例，女31例；年龄20～72岁，平均(45.52±1.25)岁。
记录已确诊结直肠癌患者的年龄、性别、吸烟、饮酒、高血压等一般疾病信息。
试剂与仪器设备：FFPE 样品DNA 分离试剂盒，人类KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF 基因突变联合检测试剂盒，Nanodrop1000微量核酸测定仪，ABI 7500荧光定量PCR 仪等。
结直肠癌RAS、BRAF、HER-2基因的状态与临床病理特征的关系
结直肠癌RAS、BRAF、HER-2基因的状态与临床病理特征的关系翁宏达;杨秀峰;白化天【期刊名称】《当代医药论丛》【年(卷),期】2022(20)5【摘要】结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚未完全明确。
有学者认为,此病的发生与多条细胞信号传导通路有关。
研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号传导通路的异常激活在CRC发生发展的过程中起到重要作用。
目前临床上对MAPK信号传导通路上KRAS、NRAS、BRAF及HER-2基因状态与CRC临床病理特征之间关系的认识并不充分。
本研究通过分析CRC患者KRAS、NRAS、BRAF及HER-2基因常见位点的突变情况,探讨上述基因的突变与CRC患者临床病理特征(包括肿瘤位置、家族史、性别、年龄、体重、吸烟史、饮酒史、肿瘤大小、分型、是否有远处转移和临床分期等)之间的关系,以期为CRC患者的个体化治疗提供理论依据。
【总页数】3页(P87-89)【作者】翁宏达;杨秀峰;白化天【作者单位】内蒙古医科大学研究生院;内蒙古医科大学鄂尔多斯临床医学院、鄂尔多斯市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R735.3【相关文献】1.结直肠癌Ras、BRAF和PIK3CA基因突变分析及与临床病理特征的关系2.K-ras基因状态与结直肠癌临床病理特征的关系3.结直肠癌组织K-ras、BRAF及PIK3CA基因突变的检测及其与临床病理特征的关系4.结直肠癌组织中KRAS、NRAS及BRAF基因突变状态与临床病理特征的关系5.结直肠癌RAS、BRAF基因状态与临床病理特征的关系因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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广东医学 2014 年 11 月 第 35 卷第 21 期
Guangdong Medical Journal
Nov． 2014 ，Vol． 35 ，No． 21 表1 K － ras 基因状态与临床病理参数的关系 例数 120 90 K － ras 基因突变 39 （ 32． 5 ） 33 （ 36． 7 ）
［ 8］ ＲAMGＲEN B， CＲONQVIST M， ＲOMNEＲ B， et al． Vertebrobasilar dissection with subarachnoid hemmorrhage： a retrospective study of 29 patients［ J］ ． Neuroradiology， 2005 ， 47 （ 2 ） ： 97 － 104． ［ 9］ ＲABINOV J D， HELLINGEＲ F Ｒ， MOＲＲIS P P， et al． Endovas． cular management of vertebrobasilar dissecting aneurysms ［J］ AJNＲ Am J Neuroradiol， 2003 ， 24 （ 8 ） ： 1421 － 1428． ［ 10］ KUＲATA A，OHMOMO T，MIYASAKA Y，et al． Coil embolization for treatment of ruptured dissecting vertebral aneurysms［J］ ． AJNＲ Am J Neuroradiol， 2001 ， 22 （ 1 ） ： 11 － 18． ［ 11］ ALBUQUEＲQUE F C， FIOＲELLA D J， HAN P P， et al． Endovascular management of intracranial vertebral artery dissecting aneurysms［ J］ ． Neurosurg Focus， 2005 ， 18 （ 2 ） ： E3． ［ 12］ IIHAＲA K， SAKAI N， MUＲAO K， et al． Dissecting aneurysms of ． J Neurosurg， the vertebral artery： a management strategy ［J］ 2002 ， 97 （ 2 ） ： 259 － 267． （ 收稿日期： 2013 － 11 － 29 编辑： 陈嘉伟）
* 江西省卫生厅科技计划项目 （ 编号： 20123033 ） △通信作者： E － mail： xiongzhenfang0408@ 126． com
［2 ］
DOI:10.13820/ki.gdyx.2014.21.032
种生物学事件 ， 如细胞生长 、 分化和凋亡等 。 传统观点 认为散发性结直肠癌的发生多遵循“腺瘤 － 癌 ” 途径 ， “畸 提出还存在另一条锯齿状成瘤途径 ， 即 － － － ” 形隐 窝 灶 增 生 性 息 肉 锯 齿 状 腺 瘤 癌 途 径， BＲAF 基因突变在这条途径中发挥重要作用 。 在西方 近年研究 K － ras 和 BＲAF 基因均有较高的突变率 ， 人群中 ， 突变 13 、 61 密码子和 BＲAF 第 15 热点主要位于 K － ras 12 、 外显子 600 密码子 。 本研究选取这些突变位点 ， 旨在 了解中国结直肠癌患者 K － ras 和 BＲAF 基因状态 ， 并 联系患者临床病理特征探讨其相互间的关系 ， 以指导 临床制定个体化治疗方案 。
目前， 我国结直肠癌的发病率和病死率分别位于 ［1 ］ 恶性肿瘤的第 3 位和第 4 位 。K － ras 基因已成为结 直肠癌靶向治疗的第一个重要分子标志物 ， 西妥昔单 K － ras 抗联合化疗已经成为 基因野生型患者一 、 二线 治疗的重要选择 。 BＲAF 是 Ｒas － Ｒaf － MEK － EＲK BＲAF 通过蛋白激酶 信号转导通路重要的转导因子 ， 通路中的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶来发挥作用 ， 该酶将 细胞表面的受体和 ＲAS 蛋白通过 MEK 和 EＲK 与核内 的转录因子相连接 ， 启动多种因子参与调控细胞内多
DNA 直接测序法检测 210 例结直肠癌组织中 BＲAF 基因 15 外显子 6Βιβλιοθήκη 0 密码子和 应用 PCＲ 扩增、
K － ras 基因 12 、 13 、 61 密码子突变， 分析其与临床病理特征的相关性 。 结果
34. 3% 。12 密码子突变 59 例， 突变率为 28. 1% ， 其中 GGT → GAT （ G12A） 突变 17 例， 突变率为 8. 1% ； GGT → GCT （ G12A） 突变 2 例， 突变率为 0. 91% ； GGT→GTT（ G12V） 突变 16 例， 突变率为 7. 62% ； GGT → TGT （ G12C ） 突变 8 例， 突变 率为 3. 8% ； GGT→AGT（ G12S） 突变 16 例， 突变率为 7. 62% 。13 密码子 GGC→GAC （ G13A） 突变 13 例， K － ras 基因突变率分别为 54. 1% （ 20 /37 ） 和 50. 6% （ 39 /77 ） ， 突变率为 6. 2% 。在肝转移和淋巴结转移阳性组中 ， 明显高于无肝转移和无淋巴结转移组 30. 1% （ 52 /173 ） 和 24. 8% （ 33 /133 ） ， 差异有统计学意义 （ P ＜ 0. 05 ） 。 Ⅰ + 50. 9% （ 29 /57 ） 、 47. 9% （ 23 /48 ） ， Ⅱ期 、 Ⅲ期、 Ⅳ期患者 K － ras 基因突变率分为 19. 1% （ 20 /105 ） 、 随着患者 TNM K － ras 基因突变率显著升高， 分期增高， Ⅲ期患者当中 K － ras 基因突变率最高， 显著高于Ⅰ期患者， 两组间差异有 4 例均为 K － ras 基因野生型。结论 突变率仅为 1. 9% 。 统计学意义（ P ＜ 0. 05 ） 。BＲAF 基因突变 4 例， 肠癌中很少见， 联合检测 BＲAF 和 K － ras 基因对指导患者治疗有重要意义 。 【关键词】 结直肠癌； BＲAF 基因； K － ras 基因； 突变 K － ras 基 K － ras 基因突变与淋巴结转移 、 因突变是结直肠癌的常见事件 ， 肝转移以及肿瘤进展相关 ； BＲAF 基因突变在结直
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广东医学 2014 年 11 月 第 35 卷第 21 期
Guangdong Medical Journal
Nov． 2014 ，Vol． 35 ，No． 21
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2
2． 799 24 126 60 5 （ 20． 8 ） 43 （ 34． 1 ） 24 （ 40． 0 ） 5． 905 157 19 34 57 （ 36． 3 ） 9 （ 47． 4 ） 6 （ 17． 6 ） 4． 939 83 95 32 22 （ 26． 5 ） 40 （ 42． 1 ） 10 （ 31． 3 ） 1． 273 81 66 63 27 （ 33． 3 ） 26 （ 39． 4 ） 19 （ 30． 2 ） 5． 462 114 96 40 （ 35． 1 ） 32 （ 33． 3 ） 14． 449 77 133 39 （ 50． 6 ） 33 （ 24． 8 ） 7． 79 37 173 20 （ 54． 1 ） 52 （ 30． 1 ） 0． 945 31 179 13 （ 41． 9 ） 59 （ 33． 0 ） 22． 928 105 57 48 20 （ 19． 1 ） 29 （ 50． 9 ） 23 （ 47． 9 ）
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例（ % ） P值 ＞ 0． 05
1 1． 1
资料与方法 一般资料 收集我院病理科 2009 年 1 月至 2012
性别 男 女 年龄
临床病理参数