猪瘟细胞苗和脾淋苗的免疫效果对照试验

猪瘟细胞苗和脾淋苗的免疫效果对照试验

冷和平1,3，钟超武1，曾俊霞2，郭霄峰3 *

（1.珠海市那洲猪场，广东珠海519085；2.珠海市安富来生物科技有限公司，广东珠海519080）；3 华南农业大学兽医学院，广东广州510642）

迄今，由我国周泰冲、袁庆志等于1956年成功研制的中国系（C系）猪瘟兔化弱毒疫苗，是国际公认最理想的猪瘟疫苗。这种疫苗除了在我国被普遍应用外，还广泛推广到欧亚很多国家，不但对控制我国猪瘟流行发挥着关键作用，而且对全球猪瘟的预防和控制起到了举足轻重的作用。很多国家依靠这种疫苗，甚至消灭了猪瘟[1]。

1989年，农业部成都药械厂又在中国C系猪瘟兔化弱毒疫苗的基础上，通过对制苗工艺的创新，成功地研制出猪瘟兔化弱毒犊牛辜丸细胞苗（以下简称猪瘟细胞苗）。这种制苗工艺的创新，大大地降低了制苗成本，且免疫效果并不比传统的猪瘟兔化弱毒疫苗差。其对猪兔效力的平行关系测定显示：对家兔毒价达5万倍的疫苗，1万倍和2万倍稀释免疫猪，攻击强毒全保护，免疫15天后即能产生坚强的免疫力，免疫期至少1年以上[2]。

然而，近年来，很多猪场在对猪瘟疫苗的选择方面，却纷纷弃用细胞苗，改用脾淋苗。以致很多地方政府免费供应给养猪场使用的猪瘟疫苗，都只有脾淋苗，而没有细胞苗。

为比较猪瘟细胞苗和脾淋苗的临床应用效果，2009年2-5月，笔者与相关技术人员一道，在珠海NZ猪场设计并完成了如下对照试验，其步骤及结果如下：

1材料与试剂

疫苗：细胞苗和脾淋苗都来自同一生物制药厂（广东XT生物药厂）。细胞苗（每头份含1500RID）批号：08115；脾淋苗（兔源，每头份含450RID或以上）批号：0846。诊断试剂：美国IDEXX猪瘟抗体ELISA检测试剂，批号：43220-T171。

2 方法和步骤

（1）分组和免疫：在珠海NZ猪场猪群中，选取一批42d，健康、大小均匀的三元杂小猪40头，随机分成A, B两组，每组20头，分别按A1~A20和B1~B20顺序打耳号编号。A组小猪免疫猪瘟细胞苗，B组小猪免疫猪瘟脾淋苗。两组试验猪在相同的饲养管理条件下饲养，并同时于42d和70d每头小猪肌肉注射相应疫苗5头份作猪瘟免疫。

（2）采血和送检：两组试验猪相继于42d（首次免疫猪瘟疫苗前）、70d（第2次免疫猪瘟疫苗前）和105d逐头前腔静脉采血3~4ml，分离血清，冷冻待检。

3 试验结果

两组试验猪各日龄猪瘟抗体ELISA的检测结果，已如表4-10所示。从该表数据可以看出：A组小猪首次免疫28天后，猪瘟抗体OD均值为0.3499，合格率为31.57%；二次免疫35天后，猪瘟抗体OD均值0.5662，合格率78.94%。B组小猪首次免疫28天后，猪瘟抗体OD均值0.3142，合格率20.00%；二次免疫35天后，猪瘟抗体OD均值0.3326，合格率30.00%。从两组试验猪经2次猪瘟疫苗免疫后的最终结果看，前者明显优于后者，说明该生物药厂细胞苗的免疫效果，明显比脾淋苗好。小猪经2次猪瘟脾淋苗免疫后，抗体合格率只有30.00%，达不到合格（合格率75%）要求。使用该生物药厂的猪瘟脾淋苗免疫，猪群无法获得对猪瘟强毒的抵抗力。

表1 猪瘟细胞苗和脾淋苗的免疫抗体ELISA检测结果

*(1) ELISA检测，0.30以下阴性，0.30-0.40可疑阳性，0.40以上阳性；（2）检测机构：珠海市安富来畜牧兽医技术服务公司实验室

4 分析与讨论

从生产工艺方面看，细胞苗的质量，应比脾淋苗更稳定。因为细胞苗的苗毒，是

在实验室条件下通过细胞培养所得，其培养液、培养温度、时间及其他环境条件都是可控的，只要实验室人员具备基本的责任心，完全可以做到苗毒剂量的相对稳定。而脾淋苗的苗毒，则是通过把苗毒毒株接种到活体兔，使苗毒在免体内复制，再定期收割兔体的脾脏和淋巴结所得。由于每个兔体对苗毒的敏感程度不一，从不同兔体收割的苗毒，其剂量可能存在很大差异。理论上：虽然脾淋苗的苗毒剂量可以通过把苗毒原液稀释到一定比例（如1:50000）接种兔，观察接种兔是否出现发热反应来检测，但接种兔是否出现发热反应，不但与兔体对苗毒的敏感性有关，还与其他各种外界因素有关。明显地，如果接种兔在观察期间刚好感染了其他病原，其发热反应就有可能并不是因接种苗毒引起。此外，因脾淋苗的苗毒生产成本昂贵，疫苗生产厂家是否能严格做到把每批接种试验不出现发热反应的苗毒原液都废弃，也是一个值得怀疑的问题。

表2 NZ猪场使用广东XT生物药厂猪瘟细胞苗连续3年抗体监测结果

检测日期检测单位检测方法合格比合格率备注

06-8-6 珠海市出入境检验检疫局动检处ELISA 10/10 100%

06-12-20 同上同上7/10 70%

07-2-14 同上同上9/10 90%

07-4-23 同上同上8/10 80% 2头可疑阳性

07-6-15 佛山科技学院猪病诊断室间接凝聚试验56/56 100% 1:16以上阳性

07-7-19 珠海市出入境检验检疫局动检处ELISA 10/10 100%

07-9-5 佛山科技学院猪病诊断室间接凝聚试验48/48 100% 1:16以上阳性

07-9-20 珠海市动植物防疫监督检验中心间接凝聚试验20/20 100% 1:32以上阳性

07-12-18 珠海市出入境检验检疫局动检处ELISA 7/10 70%

08-1-24 同上ELISA 5/10 50%

08-4-21 同上ELISA 9/10 90%

08-6-28 珠海市动植物防疫监督检验中心间接凝聚试验30/30 100% 1:32以上阳性

08-7-25 珠海市出入境检验检疫局动检处ELISA 10/10 100%

08-12-28 同上ELISA 8/10 80% 2头可疑阳性

09-1-16 同上ELISA 17/20 85%

09-2-24 珠海市安富来畜牧兽医服务公司ELISA 23/25 92%

实际上，我国猪瘟细胞苗的免疫效果，早已经过严格的攻毒试验。只要不是假冒伪劣产品，完全可以放心使用。NZ猪场近几年一直使用广东XT生物药厂（即本试验用猪瘟脾淋苗生产厂家）的猪瘟细胞苗，种猪每年3, 9月各普免1次，母猪产前4周跟胎免疫1次，肉猪35d和70d各免疫1次，大小猪每次免疫剂量都是5头份。其临出栏大猪（约150d）血清送不同检测机构检测的结果，已如表2所示。从该表可以看出：该场近3年的监测结果，6次间接凝聚试验的合格率都是100%；9次ELISA检测，8次合格率都在70%以上，只有1次合格率为50%。猪瘟疫苗的抗体能达到这一水平，完全可以保证猪场不会出现猪瘟的问题。

既然廉价的猪瘟细胞苗已经能够有效预防猪瘟，猪瘟免疫就完全没有必要选择成本昂贵，免疫效果又不及细胞苗的脾淋苗。

参考文献