银杏叶中黄酮的提取(原理及方法)

生物化学研究性实验——银杏叶中黄酮的提取及含量测定

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银杏叶中黄酮提取及含量测定

一、实验目的

提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。

二、实验原理

银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。

三、实验仪器和试剂

材料：银杏叶粉末50g

试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3

（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。

仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。

四、实验步骤

1.1提取银杏叶中总黄酮

（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉

（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。

（3）将圆底烧瓶中提取液倒入烧杯，加入一倍蒸馏水，再加入相同量的乙醚，混合均匀，倒入分液漏斗中，静置20min，分层后，收集下层液体。

（4）减压蒸馏，回收乙醇，得到淡黄色黏液，干燥得到银杏叶中总黄酮提取物。

1.2银杏叶中总黄酮含量测定

（1）芦丁标准溶液的配置：称取0．0100g芦丁标准品，放入烧杯中，加入80%的乙醇溶液使其溶解，置于100ml的容量瓶中，制成0.1g/L的芦丁标准溶液。定容，摇匀备用。

（2）绘制芦丁标准曲线：分别移取0，0.4 ，0.8，1.2，1.6，

2.0 ml芦丁对照品溶液，于6个10ml 容量瓶中，标记1~6，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的80%乙醇溶液，加入5%NaNO2溶液0.5ml，摇匀，放置6min，加入0.5ml10%AL(NO3)3，摇匀，放置6min，加入4%NaOH溶液4.0ml，加入80%乙醇定容，摇匀，放置20min。在波长510nm处分别测定其吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

（3）取2ml分层后的下层液体置于50ml容量瓶中，用80%乙醇定容，摇匀,按同一方法显色后，在波长510nm处测其吸光度，由标准曲线回归方程计算出银杏叶中黄酮的浓度，根据稀释倍数计算出银杏叶中黄酮的总含量。

五、数据记录及分析：实验数据结果如下：

编号 1 2 3 4 5 6

浓度

0 0.04 0.08 0.12 0.16 0.2

C/g/L

吸光度A 0 0.06 0.014 0.025 0.047

0.083

样品吸光度A=0.037，代入标准曲线方程，得样品中黄酮的含量浓度C=0.120g/L，再乘其稀释的倍数，则可得其相对应的浓度，因为稀释了50倍，经计算，银杏叶总提取液中含量：50*25*0.120g/L=0.15g，又因为称取银杏叶粉末10.0g，所以测得银杏叶中黄酮含量为0.15g/10.0g=1.5% 。

六、结果与讨论

1、不同时期的银杏叶中黄酮含量是否一致？

查找文献了解到银杏叶中黄酮含量最高的时期为叶子发黄的10月份，而青叶中含量则较少。

2、谈谈对本次实验的收获与感想

团队合作很重要，从开始查找文献到实验工程中，处处都表明了团队合作的重要性，小组组员合作完成了本次实验。研究性实验的开展很有必要，这锻炼了我们自主学习的能力，提高了我们的实验技能，在此感谢我们的指导老师和实验员，我们获益匪浅。

参考文献

[1]邓桂春,王鑫,赵丽艳,等.分光光度法测定银杏叶中黄酮的含量,辽宁大学化学科学与工程学院,,辽宁沈阳110036;

[2] 董宏博，崔桂花，赵文秀银，杏叶中总黄酮的提取工艺和含量测定的研究

吉林医药学院，吉林吉林132013；

[3] 庞允1,杨建秀2,刘子兰1,银杏叶中黄酮的提取工艺比较,1.西安交通大学医院,陕西西安710049;2. 陕西铜川市矿务局中心医院,陕西铜川727000

[4] 朱平华,银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究,淮海工学院化工系, 江苏连云港222005