液相常见问题归纳

常见色谱分析问题解疑

一、产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？

（1）拖尾：

1.干扰峰，优化条件分离 2 色谱柱塌陷，更换色谱柱 3 流动相pH 不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下

（2）前沿：

1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂

2 样品过载，降低进样量

3 柱温太低，升高柱温

4 色谱柱损坏，更换色谱柱

5 干扰峰，优化色谱条件分离

可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适

产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对

产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。

拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧

一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。

图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。

柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。

二、怎样避免拖尾和前沿，有何措施？

选择合适的色谱条件和色谱柱，就可以避免峰拖尾和前沿

在处理样品时选择合适的流动相最为重要，所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等相关问题，摸条件时找到较好的流动相，是避免拖尾峰出现的最好方法。

避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量，每种色谱方法有一定的线性围，超过这一围不对称峰则会出现。

要看是由于什么原因造成的：

分析物本身的性质：这类问题首先要选择合适的色谱柱，另样品的前处理非常重要，部分样品在分析过程中分解，那肯定是拖尾的。

色谱柱问题：主要由于色谱柱柱效下降等引起，维护色谱柱或者更换流动相：流动相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，应添加适当缓冲剂如三乙胺、醋酸等。

三、一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测，对此类物质防止拖尾有什么好的建议吗？

对于生物碱类，应该选用封端了的色谱柱，减少硅羟基的作用，还有就是调节流动相的PH值来避免拖尾

对于生物碱类成分的分离关键在于加入的酸的量，因为你得让成分被色谱柱吸附后，能够很好的溶解在流动相中，即解吸附下来才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！还有就是选择合适的色谱柱，最

重要喽！

分离碱性物质，易产生拖尾，一般我们都是在流动相中加点三乙胺（即碱性物质）.

生物碱类液相色谱一般都会在流动相里加入少量碱（二乙胺或氨水等），使流动相的PH偏碱性。不过用普通的C18柱来分析可能进不了几针柱效就不行了，考虑使用宽PH围的C18柱。

关于生物碱薄层问题，可以对于薄层板的话可以用10%NaOH+CMC-Na 溶液进行铺板，还可以适当调节展开剂PH值来防治生物碱拖尾。

应该加三乙胺吧，及三氟乙酸等调节PH值，使用氨基的色谱柱啊，不管怎么说首先考虑的是色谱柱的选择。

四、用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？

关于漂移问题：

①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

关于快速变化问题

①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室进行适当混合

五、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

③可能柱超载，减少进样量。

六、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

①样品量不足，解决办法为增加样品量

②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

④检测器衰减太多。调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。

⑧记录仪测压围不当。调整电压围即可。

⑨流动相流量不合适。调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

七、做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？

①泵有空气，解决的办法是清除泵空气，对溶剂进行脱气处

理；

②比例阀失效，更换比例阀即可；

③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；

④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；

⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；

⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

八、最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？

这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

九、购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若