西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选

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３０５，ｈｎ）０４７Ｃｉａ
ＡｂｔａｔＣａｂｒｌｈｐｅ，ｗｈｃｗａｄｓｇｅｕｉｇｏｕｅｓｆｒｓｎｓｎｈｓｚｄｙｈｍｉａｓｒｃ：ｒａｙａｔｎｉｈｓｅｉｎｄｓｎｃｍｐｔｒｏｔｅａｄｙｔｅｉｅｂｃｅｃｌｗａｓｎｈｓｚｄｍｅｈｄｓｙｔｅｉｅｔｏ，ｗａｏｎｃｅｔａｒｅｒｔｉＨ．ｅｌ／ｃｒｍｍｕｉｅｓｎｈｓｃｎｅｔｄｗｉｃｒｉｒｐｏｅｎＫＬｈＴｈｎＢａｂＣｍｉｅｗｅｅｉｎｚｄｕｉｇｔｅｃｎｅｔｄｐｏｕｔｓｈｉｏｎｃｅｒｄｃａｔｅｍｍｕｏｅ．Ａｆｅｒｕｄｏｍｍｕｉａｉｎｈｉｈｓｉｒａｄｈｓｅｉｃｎｇｎｔｒ５ｏｎｓｆｉｎｚｔ，ｔｅｈｇｅｔｔｔｎｔｅｐｃｆｏｅｉ
生物工程
食品研究与开发
ＦｏｓａｃｄＤｅｅｏｍｅｔｏｄＲｅｅｒｈＡｎｖｌＤｎ
ห้องสมุดไป่ตู้
２１０２年７月第３３卷第７期
西维因抗体库的构建及特异性克隆的筛选
王硕，刘昕煜，吴懿娜，杜欣军，朱超，张洁
（品营养与安全教育部重点实验室，食天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津３０５）０４７
ｔｍｐａｅｆｒＰｍｐｉｃｔｎｏａａｌｅｉｎｆｎｉｏｉｓＴｅｖｒｂｅｒｇｏｓｏｇｔｈｉ（ＬａｄｅｌｔｏＣＲａｌａｉｆｒｂｅｒｇｏｓｏｔｄｅ．ｈａａｌｅｉｎｆｉｈａｎｖ）ｎｉｆｏｖｉａｂｉｌｃ
ＷＡＧＳｕ，Ｉｉ－ｕＷＵＹ— ａＤｉ－ａ，ＨＵＣａ，ＨＮｅＮｈｏＬＵＸｎｙ，ｉｎ，ＵＸｎｊｎＺｈｏＺＡＧＪｉ（ｅａｏａｒｏｏｕｒｉｎａｔＭｎｓｙｆｄｃｔｎＴａｊｎｖｒｔｏｉｃｎｅｈｏｇ，ｉｊＫｙｂｒｔｙｆｏｄｔｔｎｄｆｙｉｉｒｕａｏ，ｉｉＵｉｓｙｆｃｅｅｄｃｎｌｙＴａｉＬｏＦＮｉｏａＳｅ，ｔｏＥｉｎｎｅｉＳｎａＴｏｎｎ
摘要：计算机辅助下，计并合成西维因半抗原，载体蛋白ＫＨ连接后免疫Ｂｔ／鼠，过５次免疫后，在设与ＬａＣ小ｂ经最
高效价和特异性抑制率分别达到２４０５００和２％；取免疫后小鼠脾脏总ＲＡ，６提Ｎ纯化ｍＮＲＡ后反转录获得ｃＮ利ＤＡ．用设计的兼并引物获得长度约为４０ｂ０ｐ的轻链可变区和重链可变区基因片段，重叠延伸后获得长度约为７０Ｄ的８ｂ
ｉｈｂｔｏａｅｏｅｉｎｉｉｎｒｔｆｔｍｍｕｅｓｒｍｅｃｅ５０ｎ６％ｒｓｅｔｅｙＴｏａｉｈｎｅｕｒａｈｄ２４００ａｄ２ｅｐｃｉｌ．ｔｌｖＲＮＡｓｅｔａｔｄｆｏｔｅｗａｘｒｃｅｒｍｈ
ｉｍｍｕｉｅｉｅｓｌｅｎｎｚｄｍｃｐｅｎａｄｍＲＮＡｓｐｒｆｄＴｅｃｗａｕｉｅ．ｉｈＤＮＡｓｏｔｉｅｙｒｖｒｅｔａｓｒｐｉｎａｄｕｅｓｗａｂａｎｄｂｅｅｓｒｎｃｔｏｎｓｄａｉ
单链抗体基因。经过Ｅｏ和ＨｉｃＲＩｎｍ酶切后，ｄ连入１７噬菌体臂，构建西维因特异性的抗体库，体库原始滴度为抗
１４１ｆ。西维因一Ｖ．￣０ｐｕ以７ＯＡ为配体对抗体库进行淘选，经过４轮淘选后，用直接ＥＩＡ对获得噬茵体克隆进行特利ＬＳ异性检测，维因对克隆Ａ — 西４７和Ａ — ６的抑制率分别达到５．％和６．４１４１６４％。过序列测定，克隆的轻链可变区经２个
分别由１８和ｌ２个氨基酸构成，链可变区分别由１７和ｌ２个氨基酸构成。０１重１１
关键词：维因；茵体展示；组抗体西噬重
ＣｏｓｒｃｉｎｏｎｔｕｔｏｆＰｈａｅＳＦｖＬｉａｙＡｇｉｓｒｒｌａｌｃｉｎｏｐｅｉｃＰｈａｅＣｌｎｓｇｃｂｒｒａｎｔＣａｂａｙｎｄＳｅｅｔｏｆＳｃｆｉｇｏｅ
ｈａｙｃａ（Ｈｗｒａｏｔ０ｐｉｌｇ．ｅｅｉｇ－ｈｉａｔｏｙｇｎ（Ｆ）ｂｕ７０ｂａｅｖｉＶ）ｅｅｂｕ４０ｂｎｔＴｎｈｎｌｃａｎｎｂｄｅｓｖａｏｔ８ｐｓｈｎｎｅｈｈｔｓｅｉｅｃｗ