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3.1 洗脱剂 为获得高的洗脱效率,本实验选 用0.02mol/L Tris2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱 剂.（Tris-指三羟甲基氨基甲烷 ）
• 由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐 随盐 洗脱能力增大, 浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回 收率提高。洗脱液中离子强度对洗 收率提高 脱效率的影 响可归结为离子交换平 衡的移动,这种色谱行为表明该固定 相具有典型的阴离子交换特性 ,符 合离子交换色谱的洗脱规律。但在 2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 随盐浓 能力下降。这种反常现象,可能是由 能力下降 于离子交换柱的多功能特性 离子交换柱的多功能特性引起。 离子交换柱的多功能特性
研究探讨离子交换色谱
1.0 摘要： 摘要：
• 高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究 生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反 应的平衡常数。 本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分 离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%, 比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。 此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀 粉酶提供了一个新工艺路线。
2.0实验部分 2.0实验部分
2.1标准酶液配制 2.1标准酶液配制 用微量天平准确称取5mg高纯度的 a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加 1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心 机上离心5min,小心转移上部清液于另一 离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.
3.0结果与讨论 3.0结果与讨论
以离子交换树脂作为固定相，树 脂上具有固定离子基团及可交换的离 子基团。当流动相带着组分电离生成 的离子通过固定相时，组分离子与树 脂上可交换的离子基团进行可逆变换。 根据组分离子对树脂亲合力不同而得 到分离。
离子交换色谱的运用： 离子交换色谱的运用：
• 主要用于分离离子或可离解的化合物， 包括氨基酸 多肽 核酸 核苷 氨基酸，多肽 核酸，核苷 氨基酸 多肽，核酸 核苷等各种 生物大分子。 生物大分子
离子交换色谱
谢 谢
08中鉴 08中鉴1班 中鉴1
分离纯化生物大分子
Po+ZDo=Pb+ZDb
Po:流动相中溶质的浓度； Po:流动相中溶质的浓度； 流动相中溶质的浓度 Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度 Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; 填料表面上被吸附的溶质浓度; Do:流动相中洗脱剂的浓度； Do:流动相中洗脱剂的浓度； 流动相中洗脱剂的浓度 Db:填料表面上洗脱剂的浓度； Db:填料表面上洗脱剂的浓度； 填料表面上洗脱剂的浓度 Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 被置换的洗脱剂的数目； 被置换的洗脱剂的数目；
3.3 PH对活性回收率的影响 PH对活性回收率的影响
Hale Waihona Puke Baidu 总结
凡在溶液中能够电 离的物质通常都可以用离子 交换色谱法进行分离。它不仅适 交换色谱法进行分离。 用于无机离子混合物的分离， 用于无机离子混合物的分离，亦可用 于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子， 于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。
• 实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作 用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这 种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当 洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表 面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明 显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附 的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。 所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L.
离子交换色谱
——运用与分析 ——运用与分析
主讲：许先融 编辑：谢晓敏 资料搜集：刘佳娜 李春凤 甘权贤 资料整理：李扬帆 刘雁
08中药分析与鉴定（1）班 08中药分析与鉴定（1
基本原理： 基本原理：
• 离子交换色谱
（ion exchange chromatography，IEC） chromatography，IEC）
• 由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐 随盐 洗脱能力增大, 浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回 收率提高。洗脱液中离子强度对洗 收率提高 脱效率的影 响可归结为离子交换平 衡的移动,这种色谱行为表明该固定 相具有典型的阴离子交换特性 ,符 合离子交换色谱的洗脱规律。但在 2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 随盐浓 能力下降。这种反常现象,可能是由 能力下降 于离子交换柱的多功能特性 离子交换柱的多功能特性引起。 离子交换柱的多功能特性
研究探讨离子交换色谱
1.0 摘要： 摘要：
• 高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究 生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反 应的平衡常数。 本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分 离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%, 比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。 此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀 粉酶提供了一个新工艺路线。
2.0实验部分 2.0实验部分
2.1标准酶液配制 2.1标准酶液配制 用微量天平准确称取5mg高纯度的 a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加 1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心 机上离心5min,小心转移上部清液于另一 离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.
3.0结果与讨论 3.0结果与讨论
以离子交换树脂作为固定相，树 脂上具有固定离子基团及可交换的离 子基团。当流动相带着组分电离生成 的离子通过固定相时，组分离子与树 脂上可交换的离子基团进行可逆变换。 根据组分离子对树脂亲合力不同而得 到分离。
离子交换色谱的运用： 离子交换色谱的运用：
• 主要用于分离离子或可离解的化合物， 包括氨基酸 多肽 核酸 核苷 氨基酸，多肽 核酸，核苷 氨基酸 多肽，核酸 核苷等各种 生物大分子。 生物大分子
离子交换色谱
谢 谢
08中鉴 08中鉴1班 中鉴1
分离纯化生物大分子
Po+ZDo=Pb+ZDb
Po:流动相中溶质的浓度； Po:流动相中溶质的浓度； 流动相中溶质的浓度 Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度 Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; 填料表面上被吸附的溶质浓度; Do:流动相中洗脱剂的浓度； Do:流动相中洗脱剂的浓度； 流动相中洗脱剂的浓度 Db:填料表面上洗脱剂的浓度； Db:填料表面上洗脱剂的浓度； 填料表面上洗脱剂的浓度 Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上 被置换的洗脱剂的数目； 被置换的洗脱剂的数目；
3.3 PH对活性回收率的影响 PH对活性回收率的影响
Hale Waihona Puke Baidu 总结
凡在溶液中能够电 离的物质通常都可以用离子 交换色谱法进行分离。它不仅适 交换色谱法进行分离。 用于无机离子混合物的分离， 用于无机离子混合物的分离，亦可用 于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子， 于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。
• 实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作 用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这 种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当 洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表 面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明 显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附 的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。 所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L.
离子交换色谱
——运用与分析 ——运用与分析
主讲：许先融 编辑：谢晓敏 资料搜集：刘佳娜 李春凤 甘权贤 资料整理：李扬帆 刘雁
08中药分析与鉴定（1）班 08中药分析与鉴定（1
基本原理： 基本原理：
• 离子交换色谱
（ion exchange chromatography，IEC） chromatography，IEC）