《离子交换色谱》PPT课件
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的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。 所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L.
•3.3 PH对活性回收率的影 响
•总结
• 凡在溶液中能够电 •离的物质通常都可以用离子 •交换色谱法进行分离。它不仅适 •用于无机离子混合物的分离，亦可用 •于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。
•研究探讨离子交换色谱
•1Байду номын сангаас0 摘要：
高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究 生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反 应的平衡常数。
本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分 离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%, 比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。 此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀
• 3.1 洗脱剂
•
为获得高的洗脱效率,本实验
选用0.02mol/L Tris-
2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱
剂.（Tris-指三羟甲基氨基甲烷 ）
由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐 浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回
收率提高。洗脱液中离子强度对洗 脱效率的影 响可归结为离子交换平
离子交换色谱
——运用与分析
• 主讲：许先融
编辑：谢晓敏
• 资料搜集：刘佳娜 李春凤 甘权贤
• 资料整理：李扬帆 刘雁
•08中药分析与鉴定（1）班
•基本原理：
离子交换色谱
（ion exchange chromatography，IEC）
以离子交换树脂作为固定相，树 脂上具有固定离子基团及可交换的离 子基团。当流动相带着组分电离生成 的离子通过固定相时，组分离子与树 脂上可交换的离子基团进行可逆变换 。根据组分离子对树脂亲合力不同而 得到分离。
•离子交换色谱的运用：
主要用于分离离子或可离解的化合物， 包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各种 生物大分子。
•分离纯化生物大分子
•Po+ZDo=Pb+ZDb
•Po:流动相中溶质的浓度； •Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; •Do:流动相中洗脱剂的浓度； •Db:填料表面上洗脱剂的浓度； •Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面
衡的移动,这种色谱行为表明该固定 相具有典型的阴离子交换特性 ,符
合离子交换色谱的洗脱规律。但在 2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 能力下降。这种反常现象,可能是由 于离子交换柱的多功能特性引起。
实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作 用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这 种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当 洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表 面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明 显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附
•离子交换色谱
• 谢
谢
•08中鉴1班
•感谢 下载
粉酶提供了一个新工艺路线。
•2.0实验部分
•
• 2.1标准酶液配制
•
•
用微量天平准确称取5mg高纯度的
a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加
1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心
机上离心5min,小心转移上部清液于另一
离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.
•3.0结果与讨论
•3.3 PH对活性回收率的影 响
•总结
• 凡在溶液中能够电 •离的物质通常都可以用离子 •交换色谱法进行分离。它不仅适 •用于无机离子混合物的分离，亦可用 •于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范 围较广。不过它容易受柱长，流速，PH，离子强度等的影响。
•研究探讨离子交换色谱
•1Байду номын сангаас0 摘要：
高纯度的 8 一淀粉酶可作为酶试剂 ,研究 生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反 应的平衡常数。
本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分 离了a- 淀粉酶粗品,其活性 回收率高达96%, 比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。 此法的研究成功 为大规模制备高纯度 a- 淀
• 3.1 洗脱剂
•
为获得高的洗脱效率,本实验
选用0.02mol/L Tris-
2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱
剂.（Tris-指三羟甲基氨基甲烷 ）
由图2可知 ,在 2.0mol/L以下,随盐 浓度的增加 ,洗脱能力增大,活性回
收率提高。洗脱液中离子强度对洗 脱效率的影 响可归结为离子交换平
离子交换色谱
——运用与分析
• 主讲：许先融
编辑：谢晓敏
• 资料搜集：刘佳娜 李春凤 甘权贤
• 资料整理：李扬帆 刘雁
•08中药分析与鉴定（1）班
•基本原理：
离子交换色谱
（ion exchange chromatography，IEC）
以离子交换树脂作为固定相，树 脂上具有固定离子基团及可交换的离 子基团。当流动相带着组分电离生成 的离子通过固定相时，组分离子与树 脂上可交换的离子基团进行可逆变换 。根据组分离子对树脂亲合力不同而 得到分离。
•离子交换色谱的运用：
主要用于分离离子或可离解的化合物， 包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各种 生物大分子。
•分离纯化生物大分子
•Po+ZDo=Pb+ZDb
•Po:流动相中溶质的浓度； •Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度; •Do:流动相中洗脱剂的浓度； •Db:填料表面上洗脱剂的浓度； •Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面
衡的移动,这种色谱行为表明该固定 相具有典型的阴离子交换特性 ,符
合离子交换色谱的洗脱规律。但在 2.0mol/L以上 ,随盐浓 度增 加洗脱 能力下降。这种反常现象,可能是由 于离子交换柱的多功能特性引起。
实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作 用 ,而且还表现一定的疏水作用的。并且这 种疏水作用 ,随溶液离子强度发生变化 。当 洗脱剂 浓度大于 2.0mol/L时,由于溶液的表 面张力过大 ,离子交换剂的疏水作用变得明 显,对蛋白质疏水缔合作用增强 ,故被吸附
•离子交换色谱
• 谢
谢
•08中鉴1班
•感谢 下载
粉酶提供了一个新工艺路线。
•2.0实验部分
•
• 2.1标准酶液配制
•
•
用微量天平准确称取5mg高纯度的
a-淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加
1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速离心
机上离心5min,小心转移上部清液于另一
离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.
•3.0结果与讨论