液质联用仪原理与操作注意事项安捷伦6410

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和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱， 因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分
析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检
测
质谱检测器 MS
器
的
选
择
二极管阵列 检测器DAD
示差检测器 RID
荧光检测器 FLD
蒸发光散色 检测器ELSD
三、液质操作系统的注意事项
2.清洗电喷雾雾化室 将仪器设置为standby,待离子源温度冷却后，用50%异
丙醇-水溶液浸湿无尘布，擦拭弧形电极和喷雾挡盖以 及周围。（切禁直接对着毛细管末端冲洗，压力会增 大，造成涡轮泵负载急剧增加，容易损坏涡轮泵）
液质联用各系统的操作注意事项 质谱系统的维护
一、质谱的系统结构示意图
质谱系统各部件介绍
离子化 传输 12..离毛子细毛C源管V细aopl管ti：la：l电agre产压y离压毛生F子细ra管g导m出入e口nt电通or 道，，并将将离产子C生源e碰onll撞e的i产sr能gio离y生n 子的在离电子场电的压子倍作EM增进V用电入下质进谱入，毛同细管 时隔离外部的常压与质谱内部的高真空
LDD
高效液相色谱质谱联用（HPLC/MS）是指高效液 相色谱与质谱串联的技术，是将应用范围极广的 高效液相分离方法与灵敏、专属、能够提供分子 量和结构信息的质谱法结合起来的一种现代分析
技术。
HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源（LC与MS连接装置）、 质量分析器、真空系统、计算机数据处理系统组成。
动 相
过膜处理
1
2 缓冲盐的使用
•LC/MS中不能使用磷酸盐、 硼酸盐、硫酸盐、三氟乙 酸、三乙胺，易残留，会 形成强离子对，产生离子
抑制，降低灵敏度
•溶剂的截止波长：乙腈 /190nm,甲醇/210nm, 水/190nm.一般分析时样 品检测波长应至少大于所 用溶剂的截止波长20nm 以上，否则背景较高。
片离子
6.检测器：包括高能打拿级和电子倍增器，增强信号，高增益
ESI离子源的原理
ESI将溶液中的离子转变为气相离子三大步骤：
211...反在直喷吹角雾干喷毛燥细雾管系离尖统子端，产源生加设带速计电喷雾，滴雾大的大溶减剂少挥了发未，离减子少化溶的剂中簇性和液流滴动进
特 点
相2入.通的质过附谱溶加剂中蒸离，发子降和，雾低滴在噪分s音裂ta使，n带d保b电证y雾状滴毛态变细小时管，，这和仍一离过维子程持反光一复路进定更行的，干干直净至燥，生气成抗温很污小 度的3染.由带和很电流小雾量带滴电，雾避滴免产生空气气相吸离子入质谱真空系统，极大的减少了污染
四、质谱系统的日常wenku.baidu.com护及故障排除
1.冲洗雾化气组件
样品运行结束后，可以使用90%乙腈/10%水,把质谱 设置on,冲洗三分钟，可以有效除去雾化器以及质谱 切换阀内痕量的样品残留。
当雾化器较脏时，可取下雾化器，使用合适的，可 以充分溶解可能的样品残留的溶剂超声（雾化器尖 端不可接触到容器壁）
四、质谱系统的日常维护及故障排除
库伦爆炸
原理：带有被测物质离子的流动相在雾化针尖端发生雾化， 液滴表面富集带同种电荷的离子，内部带相反电荷聚集， 形成带电液滴细的喷雾，在电场的作用下，飞向毛细管。 加热的氮气干燥气体反向流动，带走液滴中的中性溶剂分 子，从而收缩液滴，直至排斥的静电力超过液滴表面张力， 引起库伦爆炸，过程不断重复，待分析物离子最终变成气 态进入毛细管。
正
负
适用于碱性样品，可用乙酸或
离
正离子
甲酸对样品甲乙酸化。样品中
子 模
模式
含有仲氨或叔氨时可优先考虑 使用正离子模式（如磺胺类、
式
喹诺酮类物质）
选
择
的
适合于酸性样品，可用氨水对
一
样品进行碱化，样品中含有较
般
负离子
多的强负电性基团，如含氯、
原
模式
含溴和多个羟基时可尝试使用
则
负离子模式（如氯霉素）
：
四、质谱系统的日常维护及故障排除 维护周期
不能使用的溶
剂添加剂
3
4 溶剂截止波长
三、液质操作系统的注意事项
反
1
色谱柱根据键合相的不同可分为氨基柱、C8、 C18、C30柱等等
相
色
谱 柱
色谱柱使用完要冲洗，特别是使用缓冲盐分
2
析样品时，原则上用于冲洗的流动相中水的 比例应该等于或高于分析时所用流动相中水
的比例。
严禁用纯水冲洗柱子，易造成固定相的流失
二、定量方法的开发
逻辑顺序：
MS2 Scan
1.全扫描scan,确认 得到化合物离子质量 数
MS2 SIM
2.选择离子模式，优 化毛细管出口电压 (fragmentor),保证 母离子的传输效率
Product Ion Scan
3.子离子扫描，使用 优化好的 fragmentor,选择定 量离子，优化碰撞能 量，优化子离子的响 应
MRM
4多重反应监测MRM 定量，使用已优化好 的fragmentor,优化 每个子离子的碰撞能
1.MS2 Scan 确定待测物的分子离子
2.MS2 SIM
优化待测物的fragmentor
3. Product Ion Scan
确定定性定量离子
4. MRM
优化子离子碰撞能
三、液质操作系统的注意事项
过程：混合样品通过液相色谱系统进样，由色谱柱分离，从色谱 仪流出的被分离组分依次通过接口进入MS仪的离子源处被离子 化，然后离子被聚焦于质量分析器中，根据质荷比而分离，分离 后的离子信号转变为电信号，传送至数据处理系统，对样品进行 定性定量分析。
主要内容
质谱系统的结构介绍（ESI、库伦爆炸） 定量方法的开发
•流动相以及样品必须过膜 （有机滤膜、水系膜）
•反相常用流动相为甲醇、 乙腈、水以及缓冲盐溶液。
流
•流动相应超声脱气 10~20min,否则压力易 波动（装有在线脱气机， 影响会小一些）
•流动相每两天至少更换
•注意：LC中常采用无机缓冲
盐，LC/MS中则应该使用挥 发性的缓冲盐，如甲酸铵、 乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、 乙酸、氨水等调节pH
3.离子光学组件：包括skimmer 1，八级杆以及Len 1和Len 2,进一
步除去溶剂和中性分子，高效的离子传输组件，聚焦随机运动
的离子进入四级杆。
4.四级杆MS1和MS2：质量过滤器，优化离子传输和质谱分辨 率，可以选择让某些质荷比的离子一次通过或者所有离子全 通过。
5.碰撞池：高压碰撞池，优化裂解，六级杆设计有助于捕获碎