第15章 免疫细胞标志与功能检测技术分析
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学的领域中，免疫细胞功能检测技术正逐渐成为一个重要的研究和临床应用方向。
这项技术就像是一把神奇的钥匙，能够帮助我们打开了解免疫系统工作机制的大门，从而为疾病的诊断、治疗和预防提供有力的支持。
免疫系统是我们身体的“防御部队”，而免疫细胞则是其中的“士兵”。
它们时刻警惕着外界的病原体入侵，并且在身体内部进行巡逻，及时发现和清除异常细胞。
为了评估这些“士兵”的战斗力和工作状态，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术的种类繁多，其中比较常见的包括细胞增殖检测、细胞毒性检测、细胞因子检测以及免疫细胞表面标志物检测等。
细胞增殖检测就像是在观察免疫细胞“部队”的扩充情况。
当身体受到外界刺激时，免疫细胞会迅速增殖以增强防御力量。
通过使用特定的试剂和技术，我们可以追踪细胞的分裂和生长过程，从而了解免疫细胞的增殖能力。
例如，MTT 法就是一种常用的细胞增殖检测方法。
它利用细胞内线粒体的活性来反映细胞的存活和增殖情况。
细胞毒性检测则是在考察免疫细胞消灭“敌人”的能力。
自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL 细胞）等免疫细胞能够直接攻击和杀死被感染的细胞或者肿瘤细胞。
在检测中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过观察靶细胞的死亡情况来评估免疫细胞的细胞毒性。
细胞因子检测则像是在倾听免疫细胞之间的“通信信号”。
细胞因子是免疫细胞分泌的小分子蛋白质，它们在免疫细胞之间传递信息，协调免疫反应。
通过检测血液或组织中细胞因子的水平，我们可以了解免疫系统的激活状态和免疫细胞的功能。
比如，常用的 ELISA 法就能够精确地测量细胞因子的含量。
免疫细胞表面标志物检测则像是给免疫细胞颁发“身份标识”。
不同类型的免疫细胞表面会表达特定的标志物，通过检测这些标志物的存在和数量，我们可以区分不同类型的免疫细胞，并且了解它们的活化状态。
例如，通过流式细胞术可以快速、准确地分析免疫细胞表面标志物的表达情况。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在我们的身体中，免疫细胞就像是一支训练有素的“军队”，时刻守护着我们的健康，抵御着外界病原体的入侵。
为了更好地了解这支“军队”的战斗力，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术是一类用于评估免疫细胞在免疫反应中的活性、数量、表型以及功能状态的方法。
这些技术对于诊断免疫相关疾病、监测治疗效果、评估个体的免疫状态以及研究免疫系统的机制都具有重要意义。
其中，流式细胞术是一种常见且强大的免疫细胞检测技术。
它通过让单个细胞依次通过激光束，根据细胞所发出的荧光信号来分析细胞的表面标志物、细胞内的蛋白质以及细胞的大小和粒度等特征。
比如说，我们可以利用特定的荧光标记抗体来识别 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等不同类型的免疫细胞，并进一步了解它们的活化状态。
通过流式细胞术，医生能够快速准确地判断患者的免疫细胞是否存在异常，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
酶联免疫斑点法（ELISPOT）也是一项常用的技术。
它主要用于检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
想象一下，细胞因子就像是免疫细胞之间传递信息的“信使”，通过检测这些“信使”的分泌情况，我们就能了解免疫细胞的功能状态。
比如，在检测T 细胞对特定抗原的反应时，ELISPOT 可以准确地显示出分泌特定细胞因子（如干扰素γ）的 T 细胞的数量，从而反映出 T 细胞的免疫活性。
细胞增殖实验则能够评估免疫细胞的增殖能力。
当免疫细胞受到刺激时，它们会进行分裂和增殖以增强免疫反应。
通过使用特定的标记物或者检测细胞的代谢活性，我们可以确定免疫细胞是否能够有效地增殖。
这对于研究免疫细胞的活化和免疫应答的强度非常有帮助。
细胞毒性实验则用于检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力。
比如，NK细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）能够识别并杀伤被感染或恶变的细胞。
在实验中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过检测靶细胞的存活情况来评估免疫细胞的杀伤功能。
除了上述这些技术，还有一些其他的方法也在免疫细胞功能检测中发挥着重要作用。
临床免疫学检验-课件-第15章 免疫细胞标志和功能检测技术
一、外周血单个核细胞分离
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte）。
分离原理：根据比重不同进行分离
血小板
PBMC
多核白细胞
红细胞
• 对分离介质的要求：
– 对细胞无毒； – 基本等渗；
分离介质 是关键
仪器昂贵
什么是流式细胞仪?
流式细胞仪（flow cytometer）： 是多学科交叉融合的产物，是集光学、化学、材料学 、流体力学、自动化控制、光电测量、细胞生物学、生物 化学、免疫学和计算机图像分析等技术于一体的现代化新 型分析仪器。作为一种先进的微粒（细胞）定性和定量分 析仪器。
流式细胞仪特点： ①速度快，每秒可测量数万个微粒；②精度高；③准 确性好；④多参数测量，可以同时对同一个微粒作物理、 化学和生物特性的多参数测量。
– 与血浆和分离细胞不相溶；
– 有特定的比重。
• 不同动物的PBMC比重有差异：
– 小鼠：1.085
– 大鼠：1.087
– 人：1.075～1.090
• 常用Ficoll分离液(1.077±0.001)分离人的
PMBC
Ficoll分离液
(聚蔗糖-泛影葡胺）
２份6%聚蔗糖蒸馏水溶液 １份34%泛影葡胺生理盐水溶液
※检测：各类免疫细胞及其亚群的数量和功能测定 ※方法：体外法为主 ※目的：判断机体免疫状态 ※意义：探讨疾病的发病机制、发展、预后、疗效
3
第一节 免疫细胞的分离
细胞分离基本原理
细胞密度不同 细胞生物学特性不同 细胞表面分化抗原不同
外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T、B细胞和T细胞亚群的分离
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
免疫细胞的分离及表面标志检测技术免疫细胞功能
第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术第十五章免疫细胞功能检测技术Separation and Assays for Immunocyte第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。
二、教学内容1．免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。
2．淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。
3．淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。
4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。
第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．外周血中的单个核细胞主要是指A．淋巴细胞B．嗜酸粒细胞C．单核细胞一淋巴细胞D．单核细胞E．中性粒细胞2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为A． 1.030B． 1.035C． 1.092D． 1.020E． 1.0773．用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的A．血浆层之上B．血浆层之中C．血浆层与分层液之间D．分层液之中E．试管底部4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A．粒细胞B．淋巴细胞C．单核细胞D．T细胞E．B细胞5．能与SRBC占合形成E花环的细胞主要是A．T细胞B．B细胞C．单核细胞D．粒细胞E．血小板6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是A．T 细胞总数B．Th 胞数C．Ts细胞数D．CD4＋细胞数E．CD8＋胞数7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是A．粒细胞B．B 细胞C．单核细胞D．T 细胞E．血小板8．表示淋巴细胞的活力常用A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B．活细胞浓度C．淋巴细胞浓度D．活细胞和总细胞的比值E．T细胞和B细胞的比例9．用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出A．血小板B．B细胞C．单核细胞D．T细胞E．巨噬细胞10．活细胞经台盼蓝染色后呈A．蓝色B．棕色C．红色D．不着色E．天青色11．荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是A．CDl9B．CD20C．补体受体D．SmIgE．FcR12．NK细胞特有的表面抗原是A．CD2B．CDl6C．无特异的表面抗原D．CD23E．CD5613．仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．ConAE．EBV14．能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．SPAE．EBV15．检查体液免疫功能最常用的方法是A．血清免疫球蛋白定量测定B．溶血空斑试验C．B淋巴细胞计数D．淋巴母细胞转化试验E．SmlgG测定16．溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能A．T细胞B．B细胞C．中性粒细胞D．吞噬细胞E．NK细胞17．测定T淋巴细胞功能的体内试验是A．锡克试验B．狄克试验C．结核菌素试验D．天然血型抗体滴度E．血清：IgG测定18．正常人外周血T淋巴细胞转化率为A． <40％B．40％～50％C．60％～80％D．80％E． >90％19．常用检测细胞毒效应的方法是A．3H-TdR掺人法B．125I释放法C．51Cr释放法D．形态学检测法E．CD8检测法20．包被有抗Ig抗体的亲和板，其吸附的是A．T细胞B．B细胞C．NK细胞D．NKT‘细胞E．吞噬细胞21．Ficoll—hypaque液分离淋巴细胞是一种A．不连续密度梯度离心法B．连续密度梯度离心法C．亲和层析法D．离子交换层析法E．自然沉降法22．Ficoll—hypaque淋巴细胞分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚蔗糖+泛影葡胺E．聚蔗糖+聚乙二醇23．Percoll分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚乙烯吡咯烷酮E．经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒24．检测中性粒细胞杀菌功能的方法是A．NBT还原试验B．白细胞计数C．溶血空斑试验D．淋巴母细胞转化试验E．补体介导的细胞毒试验25．MTT比色法检测IL-2活性，下列哪项是错误的A．需要IL一2依赖细胞株B．增殖细胞具有吸收MTT的能力C．颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱D．可反映B细胞的功能E．可反映T细胞的功能(二)多项选择题(x型题)1．淋巴细胞分离液要求符合的条件有A．对细胞无毒B．高渗C．不溶于血液D．无色E．有合适的比重2．与T细胞计数有关的表面抗原是A．CD2B．CD3C．CD4D．CD8E．CDl93．与B细胞计数有关的表面标志是A．SmIgB．CDl9C．CD20D．CD21E．CD24．符合淋巴母细胞转化的形态学特征有A．细胞体积变小B．核仁明显、核染质疏松C．可见有丝分裂D．胞浆极少，呈天青色E．胞内可见空泡5．用酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点有A．稳定、特异 B．可检测抗体分泌细胞C．可检测抗体的分泌量 D．可同时进行B细胞计数 E．可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌6．细胞免疫功能测定包括以下哪些A．T细胞计数B．B细胞计数C．T细胞功能测定D．Tc细胞效应测定E．细胞因子测定7．检测淋巴细胞亚群常用的方法有A．免疫荧光法B．流式细胞仪测定C．酶免疫组化法D．放射免疫法E．免疫金染色法8．细胞免疫功能体内试验方法有A．细胞毒试验B．混合淋巴细胞反应C．皮肤试验D．淋巴细胞增殖试验E．接触性过敏试验9．T细胞增殖试验常用的检测方法有 A．流式细胞仪法B．形态学方法C．51Cr释放法D．MTT检测法E．3H一FdR掺人法10．检测吞噬细胞功能的方法有A．吞噬试验B．杀菌试验C．NBT还原试验D．化学发光测定法E．趋化功能测定法11．淋巴细胞亚群的分离方法有A．E花环分离法B．尼龙棉柱分离法c．亲和板结合分离法D．免疫磁珠分离法E．超速离心分离法12．T细胞数量检测包括A.T细胞增殖试验B．间接荧光免疫法C．酶免疫组织化学法D．微量细胞毒试验E．花环技术13．检测T细胞数量的花环试验有A．酵母菌花环试验B．补体C3b花环试验C．E花环试验D．葡萄球菌花环法E．抗体致敏细胞花环法14．B细胞表面具有、A．mIgB．CD抗原C．Fc受体D．补体受体E．EB病毒受体15．B细胞数量检测的方法包括A．mIg的检测法B．CD抗原检测法C．Fc受体检测法D．补体受体检测法E．小鼠红细胞受体检测法16．B淋巴细胞功能的测定方法有A．B细胞增殖试验B．溶血空斑试验C．酶联免疫斑点法D．体内测定法E．形态学检查法17．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法A．形态学检查法B．显微镜检查法C．溶菌法D．NBT还原试验E．化学发光测定法18．巨噬细胞功能的检测方法包括A．炭粒廓清试验B．吞噬功能检测C．巨噬细胞溶酶体酶测定D．细胞毒作用测定E．巨噬细胞促凝血活性测定(三)配伍题问题1-3A．红细胞层B．粒细胞层C．单个核细胞层D．血浆与血小板层E．淋巴细胞分离液层1.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最上层是2.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最下层是3.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，第二层是问题4-6A．淋巴细胞转化试验B．溶血空斑试验C．炭粒廓清试验D．琼脂糖凝胶平板法E．化学发光测定法4．巨噬细胞吞噬功能的检测：5．中性粒细胞趋化功能的检测：6．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的检测：二、填空题1．PBMC包括（）和（）。
免疫学及免疫学检验学题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带zoneofequivalence10.最适比optimalratio11.带现象zonephenomenon第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原immunogen13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体polyclonal antibody, pcAb第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应GVHR60.血清学分型法二、填空题;第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学;2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期;3.为保持机体内环境稳定,免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫自稳、免疫监视;4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段5.免疫系统的组成包括三部分,分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子;6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径;第2章抗原抗体反应7.在抗原抗体反应中,主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作用力;8.在抗原抗体反应中,主要的特点有：特异性、可逆性、比例性、阶段性;第3章免疫原和抗血清的制备9.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备过程中,常用的方法有：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法任写出二种均可得分;10.在免疫原和抗血清的制备过程中,可溶性抗原的纯化方法：超速离心法、选择性沉淀法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等任写出二种均可得分;11.在免疫原和抗血清的制备过程中,纯化抗原的鉴定的内容主要有：蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定;12.在免疫原和抗血清的制备过程中,抗血清的鉴定内容有：抗体特异性的鉴定、抗体效价的鉴定、抗体纯度的鉴定、抗体亲合力的鉴定;第5章凝集反应13.在凝集反应中,间接凝集反应的类型主要有：正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应;14.抗球蛋白试验,又称Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法;第6章沉淀反应15.免疫电泳技术类型主要包括：对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳;第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.在外周血单个核细胞分离实验中,对分离介质的基本要求有：对细胞无毒、基本等渗、不溶于血浆或分离物质、有一定密度;17.在淋巴细胞分离过程中,其中的单核细胞去除方法有：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分层液法; 第15章免疫细胞功能检测技术18.在免疫细胞功能检测技术方面,针对T细胞功能检测方法有：T细胞增殖试验、 T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验、体内试验;第19章补体检测及应用第22章感染性疾病与感染免疫检测19.目前公认的肝炎病毒至少有5种：甲型肝炎病毒HAV、乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV、丁型肝炎病毒HDV、戊型肝炎病毒HEV;20.在乙肝病毒检测的过程中,主要检测的五项指标有：HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe;21.在先天性感染中,临床上将以上4种病原菌称为“TORCH”,为产前检查的重点项目,分别是：弓形体、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒;第23章超敏反应性疾病及其免疫检测22.根据免疫反应的速度和组织损伤的机制不同,将超敏反应分为四种类型,分别是：第 I 型速发型超敏反应、第II 型细胞毒或溶细胞型超敏反应、第III型免疫复合物型超敏反应、第IV 型延缓型或迟发型超敏反应;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测23.在抗核抗体ANA检测方法中,常见的ANA荧光图形有：周边型核膜性、均质性、斑点性、核仁型、着丝点型;第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测24.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、轻链病、良性单克隆免疫球蛋白病;25.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有：血清区带电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、血清免疫球蛋白定量、本周蛋白的检测;第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验26.在免疫缺陷性疾病中,常见的免疫缺陷病一般特征包括：反复感染、恶性肿瘤、伴发自身免疫病、遗传倾向、多系统病变;27.在免疫缺陷性疾病中,原发性免疫缺陷性疾病主要有：原发性B细胞缺陷病、原发性T细胞缺陷病、原发性联合免疫缺陷病、原发性吞噬细胞缺陷病、原发性补体系统缺陷病;28.在免疫缺陷性疾病中,继发性免疫缺陷性疾病主要有：继发性T细胞功能缺陷、继发性低丙球蛋白血症、继发性吞噬细胞功能缺陷、继发性补体缺陷;第27章肿瘤免疫与免疫学检验29.在常见肿瘤标志物中,胚胎抗原类肿瘤标志物主要有：甲胎蛋白、癌胚抗原;30.在常见肿瘤标志物中,酶类肿瘤标志物主要有：前列腺特异性抗原PSA 、神经元特异性烯醇化酶NSE、α-L-岩藻糖苷酶测定AFU;31.在常见肿瘤标志物中,激素类肿瘤标志物主要有：人绒毛膜促性腺激素 hCG、降钙素calcitonin, CT;32.在常见肿瘤标志物中,蛋白质类肿瘤标志物主要有：β2-微球蛋白β2M 、铁蛋白;第28章移植免疫及其免疫检测33.在移植免疫实验中,排斥反应类型主要包括四种,分别是：超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应、移植物抗宿主反应GVHR;34.常见的组织或器官移植有：肾脏移植、肝脏移植、心脏移植与心肺联合移植、骨髓与其他来源的干细胞移植;三、单项选择题1.免疫应答是一个复杂的连续过程,依次分为哪几个阶段AA. 识别阶段、活化阶段、效应阶段B. 效应阶段、识别阶段、活化阶段C. 活化阶段、效应阶段、识别阶段D. 活化阶段、识别阶段、效应阶段2.抗原抗体反应形成明显沉淀物的最佳条件为CA. 抗体略多于抗原B. 抗原略多于抗体C. 抗原抗体比例合适D. 抗体显着多于抗原3.用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原,是根据抗原抗体反应的AA. 特异性B. 比例性C. 可逆性D. 阶段性4.弗氏不完全佐剂的组成包括 BA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗5.沉淀反应中的钩状效应是因为BA. 抗体过量B. 抗原过量C. pH浓度过高D. pH浓度过低6.细胞活力测定常用的简便方法是BA. 伊红染色B. 台盼蓝染色C. HE染色D. 美蓝染色7.正常人外周血T淋巴细胞转化率为CA. <40%B. 40%～50%C. 60%～80%D. 80%8.在CH50试验中,溶血程度和补体含量之间的关系为 BA. 直线B. S形曲线C. 抛物线D. 正态分布曲线9.正常血清中,补体含量最高的是CA. C1B. C2C. C3D. C410.发生III型超敏反应性疾病的始动环节是 BA. 大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜B. 中等大小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜C. 小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜D. 补体激活11.用免疫荧光法检测ANA有多种核型,不正确的是DA. 周边型B. 均质型C. 斑点型或颗粒型D. 原生质型12.血清中检测到M蛋白不提示下列疾病DA. 多发性骨髓瘤B. 巨球蛋白血症C. 重链病或轻链病D. 肾病13.本-周蛋白的本质是BA. 尿中微球蛋白B. 尿中游离的免疫球蛋白轻链C. 尿中游离的白蛋白D. 尿中游离的管型物14.多发性骨髓瘤属于哪种细胞异常CA. T细胞B. B细胞C. 浆细胞D. 单核细胞15.血清中免疫球蛋白含量缺乏,一般应考虑何种病 CA. 轻链病B. 重链病C. 免疫缺陷病D. 免疫增殖病16.切除胸腺的新生动物的淋巴结中缺乏何种细胞 BA. B淋巴细胞B. T淋巴细胞C. 粒细胞D. 巨噬细胞17.沉淀反应中抗体过量的现象称为AA. 前带B. 后带C. 等价带D. 带现象18.弗氏完全佐剂的组成包括AA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗19.直接Coombs试验检测的抗体是AA. 结合在红细胞表面的IgGB. 游离的IgGC. 结合在红细胞表面的IgMD. 游离的IgM20.单项扩散试验出现双环的沉淀线是因为DA. 两种抗原B. 两种抗体C. 抗体为多克隆抗体D. 抗原为性质相同的两个组分扩散率不同21.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为CA. 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B. 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C. 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞22.淋巴细胞转化为淋巴母细胞后,其形态学特征为BA. 细胞大小由大变小B. 出现核仁1～4个C. 胞浆内空泡逐渐消失D. 细胞伪足消失23.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能BA. T细胞B. B细胞C. NK细胞D. 吞噬细胞24.Boyden小室常用于测定 BA. 白细胞吞噬功能B. 中性粒细胞趋化功能C. 白细胞杀伤功能D. 淋巴细胞抑制功能25.在溶血反应中检测试剂中,加入少量钙、镁离子的目的是CA. 使反应液保持等渗B. 抑制补体的活性C. 有助于补体激活D. 维持反应液的pH值26.乙型肝炎感染后最早出现的病毒标志物是AA. HBsAgB. HBeAgC. HBcAgD. 抗-HBs27.新生儿溶血症发生的条件是CA. 母亲Rh+、胎儿Rh+B. 母亲Rh+、胎儿Rh-C. 母亲Rh-、胎儿Rh+D. 母亲Rh-、胎儿Rh-28.造成系统性红斑狼疮病人免疫损伤的主要机制是 CA. I超敏反应B. II超敏反应C. III超敏反应D. IV超敏反应29.人类MHC位于第几对染色体上 CA. 第12对染色体短臂B. 第12对染色体长臂C. 第6对染色体短臂D. 第6对染色体长臂30.HLA交叉配型的目的是 BA. 检测供者血清有无抗受者HLA抗体B. 检测受者血清有无抗供者HLA抗体C. 检测供者淋巴细胞表面的HLA抗原D. 检测受者淋巴细胞表面的HLA抗原四、简答题第1章概论1.T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的主要功能分别是什么2.在临床免疫学与免疫检验中,现代免疫学检验技术包括哪些方法第2章抗原抗体反应3.抗原抗体反应有哪些影响因素4.什么是标记免疫技术标记免疫技术按检测现象可分为哪些类型第3章免疫原和抗血清的制备5.常用的细胞破碎方法有哪些6.连接半抗原的载体有哪些制备半抗原性免疫原的方法有哪些7.免疫佐剂有哪些种类其作用机制是什么8.动物采血有哪些方法9.抗血清的鉴定包括哪些内容第5章凝集反应10.什么叫直接凝集反应什么叫间接凝集反应它们之间有何不同11.叙述抗球蛋白试验的类型、特点以及临床应用第6章沉淀反应12.单向扩散试验的概念和应用13.平板法双向免疫扩散试验的概念和应用14.免疫固定电泳的概念及临床应用15.抗原性质分析出现哪三种结果现象结果解释第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.外周血单个核细胞分离,其分离介质的基本要求是什么17.外周血单个核细胞悬液富含淋巴细胞,但又混杂有单核细胞、红细胞和血小板,请问去除单核细胞的方法有哪些第15章免疫细胞功能检测技术18.T细胞功能检测内容有哪些19.B细胞功能检测内容有哪些20.NK细胞活性测定方法有哪些21.在检测T细胞的功能时,可选择T细胞增殖试验,请回答其基本原理第19章补体检测及应用22.在补体总活性测定中,一般采用CH50测定法,请说明其基本原理;23.在单个补体成分的测定中,一般采用免疫溶血法,请简述其概念及原理;24.请简述补体结合试验的概念、实验原理及结果解释第22章感染性疾病与感染免疫检测25.请列出目前公认的肝炎病毒种类26.乙型肝炎的诊断标志物主要检测指标有哪些27.在临床中,乙肝病毒检测常见的指标俗称：两对半有哪些28.什么叫先天性感染常见的病原菌“TORCH”只要只的是哪些病毒第23章超敏反应性疾病及其免疫检测29.试比较Ⅰ～Ⅳ型超敏反应特点30.使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应简述其发病机制; 答：青霉素临床应用时有可能引起的超敏反应类型有：I、II、III、IV型;1I 型超敏反应：指青霉素过敏性休克,其发病机制是青霉素本身并无免疫原性,其降解产物为半抗原,与体内蛋白质结合而产生免疫原性,刺激机体产生特异性IgE,使机体处于致敏状态;当机体再次使用青霉素时,可发生过敏性休克;2II 型超敏反应：指青霉素过敏性血细胞减少症,其发病机制是青霉素降解产物能与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合获得免疫原性,从而刺激机体产生抗体;这种抗体与和药物结合的红细胞、粒细胞和血小板作用,引起药物性溶血性贫血、粒细胞减少症和血小板减少性紫癜;3III型超敏反应：指使用大剂量青霉素等药物可引起类似血清病样的反应,其发病机制是因为患者体内已产生特异性抗体,而大剂量药物尚未完全排除,两者结合形成中等大小免疫复合物所致;4IV型超敏反应：指青霉素引起的接触性皮炎,其发病机制是青霉素小分子半抗原与体内蛋白质结合成完全抗原,使T细胞致敏;当机体再次接触青霉素时,可发生接触性皮炎;31.血清病与血清过敏性休克分属哪型超敏反应比较发病机制;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测32.自身免疫病都具有哪些共同特性33.什么叫自身抗体,其主要特点有哪些第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测34.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有哪些35.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有哪些第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验36.请列出免疫缺陷病的一般特征37.原发性免疫缺陷性疾病有哪些38.继发性免疫缺陷病有哪些39.什么叫获得性免疫缺陷综合征其临床特点及典型特征是什么第27章肿瘤免疫与免疫学检验40.什么叫肿瘤抗原,其产生的可能机制有哪些41.什么叫肿瘤标志物,理想的肿瘤标志物具有哪些特性第28章移植免疫及其免疫检测42.什么叫移植排斥反应,根据排斥反应发生的时间、免疫损伤机制和组织病理改变,如何进行分类43.常见的组织或器官移植有哪些44.排斥反应的免疫监测包括哪些方面。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。
免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。
本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估免疫系统的健康状况。
其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常用于检测免疫细胞的表型和活性。
通过标记细胞表面的特定抗原和荧光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液中特定抗原或抗体的浓度。
通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，如干扰素、白细胞介素等。
细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。
以下是该技术在不同领域的应用举例：1. 免疫系统疾病诊断免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等。
通过评估免疫细胞的数量、活性和功能状态，可以辅助医生制定治疗方案和判断治疗效果。
2. 肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗是一种利用机体免疫系统增强对肿瘤细胞的攻击能力的治疗方法。
免疫细胞功能检测技术可以评估患者体内免疫细胞的活力和功能状态，为肿瘤免疫治疗方案的制定和疗效监测提供依据。
3. 个体化医疗免疫细胞功能检测技术还可以用于个体化医疗，根据不同个体的免疫细胞功能状况，制定相应的健康管理方案。
免疫细胞标志和功能检测技术-四川大学
CD 抗原
鉴定与检测: 单克隆抗体（ McAb） CD抗原国际统一编号 目前已鉴定的CD分子达300多种，已
弄清130多种CD分子编码基因的核苷 酸序列及其染色体定位 很少通过单一CD抗原区分某一淋巴细 胞亚群
CD分组
T细胞相关CD B细胞相关CD 髓系细胞相关CD NK细胞相关CD 血小板相关CD 激活抗原 粘附分子 内皮细胞 细胞因子受体
CD8分子：细胞毒性T细胞标志
由α、β链借二硫键连接形成的异二聚体， 胞膜外结构属IgSF成员
α链V样区与MHCⅠ类分子非多态α3区域 结合
生物学功能：胞浆区可与p56lek激酶结合 参与信号传导
CD4和CD8分别是MHC-II类或MHC-I类分子
的受体，可加强和稳定T细胞表面TCR与抗原呈 递细胞或其它靶细胞表面非己抗原肽-MHC分子 复合物的结合，并有助于TCR-CD3信号传递。
CD2可与绵羊红细胞（SRBC）结合，故又称绵 羊红细胞受体（E受体）。 E花环试验: 测定外周血T细胞总数
外周血淋巴细胞 + SRBC
T淋巴细胞CD2-多个SRBC形成致密花环
计数外周血T细胞总数
（2）CD3：
表达于全部T细胞表面 T细胞表面标志 由γ、δ、ε、ζ和η五种链组成的跨膜多肽
第十五章
免疫细胞标志和功能检测技术
白杨娟
华西医院实验医学科临床免疫实验室
中枢免疫器官：胸腺、骨髓 免疫器官 外周免疫器官：淋巴结、脾脏等
免
疫
参与免疫应答或与
免疫细胞 免疫应答有关的各
淋巴细胞 单核巨噬细胞
系
种细胞
其他免疫细胞
统Hale Waihona Puke 免疫分子Ig、补体、细胞因子、黏附分 子、神经递质、CD抗原等
主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第十五章免疫细胞功能检测技术(附答案解析)
主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第十五章免疫细胞功能检测技术（附答案解析）一、A1型题1、能直接特异性杀伤靶细胞的细胞是（）。
A、吞噬细胞B、NK细胞C、树突状细胞D、中性粒细胞E、T细胞2、硝酸四氮唑蓝还原（NBT）试验用于（）。
A、中性粒细胞功能的检测B、吞噬细胞功能的检测C、B细胞功能的检测D、T细胞功能的检测E、NK细胞功能的检测3、选择检测中性粒细胞功能的方法（）。
A、酶释放试验B、硝酸四氮唑蓝还原试验（NBT）试验C、溶血空斑形成试验D、溶菌酶测定E、炭粒廓清试验4、NBT还原试验常用来检测（）。
A、吞噬细胞吞噬能力B、吞噬细胞细胞内杀伤能力C、嗜酸性粒细胞活力D、中性粒细胞的胞内杀菌能力E、NK细胞活力5、抵御对化脓性细菌感染的非特异性免疫细胞是（）。
A、单核细胞B、巨噬细胞C、中性粒细胞D、TCRγδ+细胞E、肥大细胞6、下列属于巨噬细胞功能检测的是（）。
A、炭粒廓清试验B、皮肤窗法C、化学发光测定法D、滤膜小室法E、细胞毒试验7、对了解特异性和非特异性免疫状态有重要作用的细胞是（）。
A、巨噬细胞B、γδ细胞C、中性粒细胞D、NK细胞E、B1细胞8、主要由巨噬细胞产生的细胞因子是（）。
A、G－CSFB、IL－1C、IL－2D、IL－4E、IL－59、炭粒廓清试验常用来检测（）。
A、巨噬细胞功能B、中性粒细胞功能C、T细胞功能D、细胞功能E、以上均不对10、巨噬细胞吞噬功能的检测原理是将吞噬细胞与哪种细胞混合后孵育（）。
A、小鼠RBCB、绵羊RBCC、兔RBCD、鸡RBCE、以上都可以11、抗病毒活性测定法主要是用于检测（）。
A、干扰素（IFN）B、趋化因子C、白细胞介素（IL）D、集落刺激因子（CSF）E、肿瘤坏死因子（TNF）12、以下试验中，属于T细胞功能检测方法的是（）。
A、吞噬功能试验B、T细胞介导的细胞毒试验C、溶血空斑试验D、炭粒廓清试验E、以上都是13、检测淋巴因子对下列哪项变态反应最有意义（）。
第15章 免疫细胞标志与功能检测技术总结
细胞内大分子物质 的合成增加 T细胞形态变化
齐齐哈尔医学院免疫
同位素法 形态法
（1）形态学检查法
+
刺激物：常用PHA
PHA 无PHA
标本：外周血单个核细胞
37℃
72h
取培养细胞涂片染色镜检 观察细胞形态学改变
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未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞 淋巴母细胞 细胞大小(直径μm) 核大小、染色质 12-20 增大、疏松 过渡型 12-16 增大、疏松 6-8 不增大、密集
第三节 抗原提呈细胞的表面标志
抗原提呈类细胞表面标志
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CD1a,CD11c,CD83
一、单核-吞噬细胞系统
组织部位 骨髓 骨髓和血液 各种组织 （巨噬细胞）
熟悉
细胞名称 干细胞—单核母细胞—前单核细胞 单核细胞 组织细胞（结缔组织）,枯否细胞（肝） 破骨细胞（骨）、小胶质细胞（神经 组织）、
五、其他免疫细胞功能检测技术
六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床 应用
齐齐哈尔医学院免疫
齐齐哈尔医学院免疫
掌握
第一节
免疫细胞的分离
一、外周血单个核细胞分离
二、淋巴细胞的分离
三、T、B细胞和T细胞亚群的分离 四、不同分离方法的评价
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一、外周血单个核细胞分离
掌握
外周血单个核细胞(perpheral blood mononuclear cells, PBMC)：包括淋巴 细胞和单核细胞。
对分离介质的要求
熟悉
1.对细胞无毒 2.基本等渗 3.不溶于血浆等分离物质 4.有要求的比重 2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34% 泛影葡胺比重为1.077±0.002
免疫细胞功能的测定
免疫细胞功能的测定
第26页
ELISPOT法
B细胞产生抗体能力测定
技术方法
1. 抗原包被: 37C°2h，或4C°过夜。固相载 体可用聚苯乙烯平皿、亚硝酸纤维膜、96 孔板。
2. 抗体生成细胞培育: 加入适量抗体生成细胞， 37C°，5％CO2，3～4h，或过夜。洗涤， 去除为与固相结合细胞。
3. 测定斑点产生细胞: 加二抗， 37C°，5％ CO2，2～3h。加辣根过氧化物酶或碱性磷 酸酶和底物显色。
免疫细胞功能的测定
免疫细胞功能的测定
第1页
免疫细胞功效测定
T细胞增殖功效测定
基础理论
本技术用于评定T细胞对各种刺激增殖能力。T 细胞增殖能力是反应T细胞功效一个主要指标。
免疫细胞功能的测定
第2页
T细胞功效测定
刺激T细胞增殖原因及意义 1. 特异性抗原: 引发寡克隆活化增殖。 克用于判断抗原免疫效果（疫苗接种）和回 想反应能力，也能反应T细胞总体功效。 2. 丝裂原: 多克隆。 3. 刺激信号转导分子: 多克隆。
免疫细胞功能的测定
第29页
B细胞产生抗体能力测定
ELISA测定各类免疫球蛋白
方法
1. 包板: 96孔板用浓度为10µg/ml特异性单抗 包被。盖上盖板，37C°，5％CO2，2h， 或4C°过夜。常规洗板，封闭。
2. 上样: 每孔内加入1:10或1:20 稀释细胞培养 上清液100µl。阳性对照为标准品，阴性对 照为培养液。每试验设2复本。室温培育2h， 或4C°过夜。
2. 培养液中添加血清: 有些血清可能激活或抑 制细胞增殖。如欲测定人体细胞增殖能力， 可采取灭活AB血清。
3. 细胞培养板类型: 依据细胞数量采取不一样 形状底部培养板。
初级检验技师临床免疫学和免疫检验(讲义)第十五章免疫细胞功能检测技术
第十五章免疫细胞功能检测技术免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。
测定这些细胞功能可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。
第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。
体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
一、T细胞功能检测T细胞具有多种免疫生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原或丝裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。
据此，建立了一系列检测T细胞功能的体内和体外试验。
（一）T细胞增殖试验1. 原理：T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞增殖，并转化为淋巴母细胞。
因此，淋巴细胞增殖反应又称淋巴母细胞转化。
2. 刺激物：植物血凝素（PHA、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD和白色念珠菌等。
3. 方法学：检测T细胞增殖反应的方法有：（1）形态学检查法：运用普通光学显微镜，简便易行。
缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。
（2）1 2 3 4H-TdR掺入法：敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，及存在放射性核素污染问题。
细胞免疫水平的常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力，常作为判断预后和观察疗效的指标之一。
（四）体内实验正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验，常可出现阳性的迟发型超敏反应。
目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染（结核、麻风等）和细胞免疫缺陷等疾病，也常用于观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是指通过对免疫细胞（如淋巴细胞、单核细胞等）进行活力和功能评估，以了解免疫系统的状态和功能水平，为临床治疗和预防提供有价值的参考和支持。
目前，常用的免疫细胞功能检测技术主要包括以下几种：1. T细胞亚群分析T细胞是人体免疫系统中重要的细胞类型之一，可被分为CD4+ T 细胞和CD8+ T细胞两类。
通过分析不同亚群T细胞数量和比例的变化，可以判断免疫系统是否受到某些疾病或感染的影响。
T细胞亚群分析的方法主要包括流式细胞术、荧光素标记实时定量PCR、酶联免疫吸附法等。
其中，流式细胞术是最常用的方法之一，其优点在于可以同时对多种细胞亚群进行快速定量分析。
2. 细胞因子测定细胞因子是一类分泌性蛋白质，可在免疫细胞之间传递信号和调节免疫反应。
通过测定细胞因子的水平和类型，可以判断免疫系统是否处于某种状态，如感染、炎症、肿瘤等。
常用的细胞因子测定方法包括酶联免疫吸附法、流式细胞术、ELISPOT技术、荧光素标记实时定量PCR等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
3. 免疫活性物质检测免疫活性物质是指免疫细胞释放的能够杀死或抑制病原微生物的物质，如抗体、溶菌酶、淋巴因子等。
通过测定免疫活性物质的水平和类型，可以评估免疫系统对不同病原微生物的防御能力和效果。
常用的免疫活性物质检测方法包括酶联免疫吸附法、荧光素标记实时定量PCR、免疫印迹等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
4. 免疫细胞功能测定免疫细胞功能测定是通过对免疫细胞的活力和功能进行评估，了解其对不同刺激物的反应能力和效果。
常用的免疫细胞功能测定方法包括：细胞增殖和细胞毒性检测、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞功能检测、NK细胞活性检测等。
其中，淋巴细胞转化试验是一种常用的方法，其原理是通过刺激免疫细胞，如蛋白质抗原、细菌和病毒等，来评估其对不同刺激物的响应能力。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是当今医学研究和临床应用中一个至关重要的领域。
随着对免疫系统理解的深入，科学家们不断探索如何更有效地评估免疫细胞的功能状态，以便更好地应对各种疾病，尤其是癌症和自身免疫病。
一、免疫细胞的基本功能1.1 免疫细胞的种类和功能免疫系统中有多种类型的细胞，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和巨噬细胞等。
每种细胞都有其独特的功能。
T细胞主要负责识别和消灭感染细胞，而B细胞则通过产生抗体来中和病原体。
NK细胞则在抗肿瘤和抗病毒反应中发挥重要作用。
1.2 功能检测的意义通过检测这些细胞的功能，我们可以了解个体的免疫状态，帮助医生制定个性化的治疗方案。
比如，对于癌症患者，评估T细胞的活性可以判断肿瘤免疫治疗的效果，从而调整治疗策略。
二、常用的免疫细胞功能检测技术2.1 细胞因子测定细胞因子是免疫细胞之间交流的重要信号。
我们可以通过酶联免疫吸附测定（ELISA）等技术，定量分析血液或细胞培养液中的细胞因子水平。
这不仅能评估免疫细胞的活性，还能反映出机体的炎症状态。
2.2 细胞增殖测定细胞增殖是评估免疫细胞功能的另一种方法。
常见的技术有流式细胞术和MTS法。
这些方法能够检测细胞在特定刺激下的增殖能力，提供细胞对抗原或刺激物的反应能力的信息。
2.3 细胞毒性检测对于抗肿瘤免疫反应的评估，细胞毒性检测尤为重要。
通过检测NK细胞或细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤能力，我们能直观地了解免疫系统在抵御肿瘤时的表现。
常用的检测方法包括Cr51释放实验和LDH释放实验。
三、技术的局限与展望3.1 技术的局限性尽管目前的检测技术已经相当成熟，但仍存在一些局限性。
例如，细胞因子的测定可能受样本处理和保存条件的影响，从而导致结果的不稳定性。
此外，单一指标的检测往往难以全面反映免疫状态。
3.2 未来的发展方向未来的研究应朝着更加综合和精准的方向发展。
结合多种检测技术，可能会提升对免疫细胞功能的全面理解。
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五、其他免疫细胞功能检测技术
六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床 应用
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掌握
第一节
免疫细胞的分离
一、外周血单个核细胞分离
二、淋巴细胞的分离
三、T、B细胞和T细胞亚群的分离 四、不同分离方法的评价
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一、外周血单个核细胞分离
掌握
外周血单个核细胞(perpheral blood mononuclear cells, PBMC)：包括淋巴 细胞和单核细胞。
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4.采用Ficoll密度梯度分离法分离得到的细胞主 要为（ D ） A 单核细胞和粒细胞 B 单核细胞 C 淋巴细胞 D 淋巴细胞和单核细胞 E 淋巴细胞和粒细胞 5.Percoll分离液的主要成分是E ( ) A．聚蔗糖 B．泛影葡胺 C．聚乙二醇 D．聚乙烯吡咯烷酮 E．经聚乙烯吡咯烷酮处 理的硅胶颗粒 6.分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为( E ) A.1.030 B.1.035 C.1.092 D.1.020 E.1.077 7.Ficoll淋巴细胞分离液的主要成分是D ( )
(一)CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 (Th) CD3+CD4+CD30- Th1 CD3+CD4+CD30+ Th2 (二)CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞(CTL) (三)调节性T细胞 CD4+CD25+Foxp3+ Tr1–IL-10 Th3–TFG-β
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熟悉
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二 、淋巴细胞分离
目的--去除单核细胞
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1.贴壁粘附法 2.吸附柱过滤法: 将PBMC加入葡聚糖 凝胶SephadexG-10中，从柱上洗脱下 来的主要是淋巴细胞。 3.Percoll分离液法：经聚乙烯吡咯烷 酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
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Percoll：经聚乙烯吡咯烷酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
比重：1.077±0.001(最佳)
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1.077±0.001的分层液可将细胞分离
红细胞：1.093 粒细胞：1.092 单个核细胞1.076 —1.090 齐齐哈尔医学院免疫
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密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞纯度95%；细胞收率80%；淋巴细胞90%--95%
A．聚蔗糖 B．泛影葡胺 C．聚乙二醇 D．聚蔗糖+泛影葡胺 齐齐哈尔医学院免疫 E．聚蔗糖+聚乙二醇
第二节
淋巴细胞标志及 亚群分类
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细胞表面分化抗原
(Cluster of differentiation CD)
CD1a------CD350
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一、T细胞表面标志及亚群
CD4+ Th细胞亚群分化的调节作用
T细胞表面主要CD抗原及其特性
CD抗原 CD2 CD3 CD4 CD8 CD25 CD28 CD40L
对分离介质的要求
熟悉
1.对细胞无毒 2.基本等渗 3.不溶于血浆等分离物质 4.有要求的比重 2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34% 泛影葡胺比重为1.077±0.002
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掌握
聚蔗糖泛影葡胺--Ficoll分离液
原2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34% 泛影葡胺生理盐水溶液。
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了解
细胞分离基本原理
1.不同细胞密度不同 2.不同细胞表面生物学特性不同 3.不同细胞表面分化抗原不同
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不同细胞密度不同
熟悉
红细胞和粒细胞密度为1.092-1.093 单个核细胞密度为1.075-1.090
选择比重为1.075-1.090 介质 分离PBMC
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第十五章
免疫细胞标志和 功能检测技术
医学技术学院免疫教研室
掌握：免疫细胞的分离; 淋巴细胞功能检测 熟悉：免疫细胞表面标志和功能检测的临床
应用;淋巴细胞表面标志及亚群分类；
了解：其他免疫细胞功能检测技术；检测的 临床应用。
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一、免疫细胞的分离
二、淋巴细胞标志及亚群分类
三、抗原提呈细胞的表面标志 四、淋巴细胞的功能检测
死细胞、血小板 单核细胞 淋巴细胞
粒细胞 红细胞
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三、T、B细胞和T细胞亚群 的分离
磁珠
熟悉
(一)磁性微球分离法
高分子 材料
(二)荧光激活细胞分离仪分离法
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磁珠大小可以选择
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磁性微球分离法细胞分选过程
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分离条件要求
收率 纯度
分离时间 分离成本
得率高。 纯度低。 分离速度快。 成本低。
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得率不高。 纯度高。 分离速度慢。
需要很强的磁场来分离， 需要一次性分离柱，不 能在普通试管
免疫磁珠细胞分选装置
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全自动细胞分选系统
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荧光激活细胞分离仪分离法
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流式细胞分析仪
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四、不同细胞分离方法的综合评价
了解
早期：根据不同免疫细胞的物理属性和 生物学属性进行分离
近期：利用细胞表面标志进行分离
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1.分离外周血单个核细胞，单次差速密度梯度离 心法常 用分层液是（ C ） A 明胶 B 右旋糖酐 C Ficoll分层液 D Percoll分层液 E 葡聚糖 2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下 依次为（ C ） A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞 B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞 C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞 D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞 E 血小板和血浆、红细胞、单个核细胞、粒细胞用玻璃纤 3.维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上 洗脱下的细胞主要是B ( ) A．粒细胞 B．淋巴细胞 C．单核细胞 D．T细 胞 E．B细胞
大小免疫磁珠分离细胞的特点比较
比较项目 对细胞的影响
对流式细胞仪的影响
大磁珠
对细胞造成机械压力，影 响其生物学活性，不利于 分离后培养。
小磁珠
对细胞温和，不影响分离 细胞的后续培养。
阻塞流式细胞仪的喷嘴， 可直接上流式细胞仪检 影响散射光。 测，不影响散射光。 技术简单，分离可在试 管中完成。 需要很强的磁场来分离 细胞。