血虚证实验动物造模及其证候的检验与评估

血虚证实验动物造模及其证候的检验与评估

高维琴

2006711047

摘要：查阅近10年来有关中医血虚实验研究方面的医学资料，对现行各种血虚实验方法和观察指标进行了文献回顾与总结，并对其目前存在问题及未来发展作一讨论。从而为今后实验动物证的研究提出新的思路。

关键词：血虚证；动物模型；检测指标

血虚证[1]是中医的基础病证，主要表现为营血亏损。要阐明血虚证的本质和病理生理，以及中药治疗血虚证的机理，动物实验研究是不可缺少的途径。而要进行实验研究，首先必须有一个标准化的血虚证动物模型，这是中医药现代化研究的重要环节。许多科研工作者在这方面做了探索和努力，然而至今尚无统一的造模规范程序和公认指标。近年来，随着对血虚证研究的不断深入，对血虚证动物模型的研究也有新的进展。尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质，但作为替代实验对象，已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用。现对目前所已有多种血虚证动物模型制作方法，其特点及检测指标作一总述。

1中医对血虚证的认识

中医理论认为，血虚多因失血过多，血液生化之源不足，或因瘀血阻滞，新血不生等原因引起。临床表现为面色苍白或萎黄、皮肤毛发枯黄、唇舌及指甲无华、头晕、心悸失眠、手脚发麻、脉细弱无力等。

祖国医学所指血虚内涵丰富，从病因、临床特点与现代医学的贫血有密切的关系[2]。现代医学中贫血包括低增生性（再生障碍性贫血、骨髓病性贫血）、红细胞大量破坏或丢失（溶血性贫血和失血性贫血）、成熟异常（缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、中海贫血和铁幼粒贫血等）。且经研究发现[3,49]，血虚证的症状在贫血患者中有较高的出现率。因此可以借鉴现代医学对贫血的研究方法来帮助建立中医血虚证的动物模型、检测指标。

2血虚证动物模型

血虚证动物模型一般用大鼠、小鼠、家兔等制备。

2.1失血性血虚证动物模型

2.1.1一般制备方法

小鼠，体重20～22g，尾部放血0.5ml／只，失血后24h左右即可；大鼠，体重180～200g，尾部放血1.5～2ml／只，隔日1次，连续5次；家兔放血占全血量30%，狗按40ml/kg放血，可反复几次，即可造成失血性贫血血虚动物模型[4]。

本类模型多为急性失血性血虚证，其制作思路不甚符合中医的生理病机，不能够充分反应中医的血虚证特点，不是中医血虚证的较好造模选择。目前，多采用放血的同时结合其他方法制备慢性失血性血虚证动物模型。

2.1.2放血加适当限食方法

欧敏等[5]每次由兔耳中央动脉、静脉及耳缘静脉放血，放血量为全身血容量的10％，隔日1次，共7次。自造模之日起，家兔改为半量喂养。

桂蜀华[6]等采用每日小鼠尾部放血25滴，同时配合喂养低营养精面粉。通过对血红蛋白的动态监测，证实第3周小鼠血红蛋白显著降低，停止放血后，继续

喂精面粉7d，血红蛋白维持在原有水平不再回升。

2.1.3综合放血法

梁毅等[7]采用慢性放血配合饥饿、疲劳法，制作出复合血虚证小鼠模型。具

体方法：放血。由眼眶后静脉丛放血6～8滴（约0.5m1），隔日1次。直至模型成功。控制饮食。自造模之日起改变其正常饮食量，控制在每日50g／kg体

重，自由饮水。劳倦。小鼠每天在温水池中强迫游泳2次，每次游泳时间不定，以即将下沉为限，持续15～20d。一般在造模第15天起显现血虚证症状体征。

失血法方法简单，指标明确，不需特殊设备，可有效降低外周血中全血细胞数量，但放血量难以精确控制，模型间差别较大。着眼于直接造成外周血中的细胞数量减少，对机体造血系统功能的影响不大。

2.2化学损伤性血虚证动物模型

2.2.1溶血性血虚证

乙酰苯肼（APH）是一种强氧化剂，对红细胞（RBC）有缓慢的进行性氧化损伤作用，突出表现在干扰RBC内葡萄糖-6磷酸脱氢酶（G-6-PD），使RBC 易于崩解而出现溶血性贫血。

制备方法：选用Wistar大鼠，皮下注射2％APH生理盐水溶液，剂量为10ml ／kg体重。实验分一次性给药和实验第1、4、7天3次给药两种，后者第2、3次给药剂量减半。补血中药可防治和逆转由APH所致血虚证[8]。

小鼠皮下注射2%乙酰苯肼0.3ml/只，共2次；或在1、4、7天皮下注射乙酰苯肼0.2g/kg、0.1g/kg、0.1g/kg，第9天造成模型；或于第3天皮下注射乙酰苯肼0.2g/kg，第7天造成模型。大鼠于第1、4天皮下注射乙酰苯肼0.16g/kg、0.08g/kg，8天造成模型，或两次剂量均为0.2g/kg，10天造成模型[4]。

溶血性血虚操作较失血性血虚更为方便，但由于红细胞变形及碎片的干扰，镜检计数较困难，以红细胞压积法代替镜检计数较为准确。着眼于直接造成外周血中的细胞数量减少，对机体造血系统功能的影响不大。

2.2.2骨髓抑制性血虚证

环磷酰胺（CTX）是常用的抗肿瘤药物和免疫抑制剂，是细胞毒制剂，其作用机制是抑制骨髓功能，使造血细胞生成减少。

小鼠以CTX100mg／kg体重腹腔注射1次，4天后外周血白细胞数明显下降。大鼠以CTX灌胃，首次60mg／kg体重，1周后改用20mg/kg体重，3～4天1次，共2次；用30mg／kg体重，3～4天1次，共2次；大鼠以CTX静脉注射，第一周10mg ／kg体重，给药2次，第二周15mg／kg体重，给药1次，均可形成白细胞减少模型[9]。

此种造模方法简单易行，用量及时间可灵活掌握。但其对红细胞作用不如对白细胞明显，且持续时间较短，如果受试药物显效较慢，模型动物血象即自然恢复，甚至出现反跳现象[10]。

丝裂霉素应用法:丝裂霉素是抗生素类广谱抗肿瘤，可抑制DNA复制，不良反应为骨髓抑制，以白细胞和血小板下降明显。马里兰应用法:又名百消安，属磺酸酯类，在体内解离后起烷化作用，小剂量即可明显抑制粒细胞生成，剂量提高可抑制全血象。顺铂致大鼠贫血模型:顺铂是常用的金属铂的络合物，为广谱抗肿瘤药，它能与DNA结合形成交叉键，防止其复制，高剂量时亦能阻止RNA 和蛋白质的合成，可骨髓抑制[4]。

2.2.3复合血虚证模型

目前，化学损伤模型还采用APH与CTX联合使用的复合血虚证模型。采用