血球计数板计数实验

环工综合实验血球计数板计数实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

2.血球计数板计算微生物数量的优缺点是什么？血球计数板与平板稀释法对细菌个数进行测定，结果往往差别很大。分析原因。

答：⑴将细菌（或其他微生物）以染料（例如结晶紫）染色后，直接以显微镜观察的方式计数，再推算回细菌数，所得即为总菌数，即死菌、活菌一并计算。

优点：简单、快速、重复性高。

不足：不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄；一些小的细胞在显微镜下很难看到；样品中菌液浓度不能低于106个/mL；不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定

⑵血球计数板计量时所得到的结果为死菌与活菌的总数，而平板稀释法培养得到的为活菌数目，因此结果差异较大。

四、实验步骤

1.稀释：取接种酵母菌的斜面一支，加入5ml无菌水，摇晃试管一分钟，使形成菌液；将菌液倒入洁净的150ml锥形瓶中，加结晶紫三滴，摇晃2分钟，再加入无菌水至50ml。

2.镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。

2.加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。

4.显微镜计数：静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。

5.清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。（注意：血球计数板计数室只能水冲，不得擦拭！）

五、实验数据及观察结果

血球计数板镜检结果：