血球计数板的使用(有图指导)
细胞计数板的使用方法
血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
细胞计数板-使用方法1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍？），以每小格的菌数可数为度。
2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
《血球计数板使用》课件
01
02
03
04
计数结果应及时记录并核对， 确保数据的准确性和完整性。
对于异常数据应进行复核或重 新取样，避免误差的积累。
在数据解读时应结合实际情况 进行分析，避免片面或主观的
判断。
对于误差的控制应采取有效的 措施，如采用合适的取样方法
、提高操作技能等。
04
血球计数板应用实例
临床应用实例
诊断疾病
《血球计数板使用》PPT课件
目录
• 血球计数板简介 • 血球计数板操作步骤 • 血球计数板使用注意事项 • 血球计数板应用实例 • 血球计数板的发展趋势与展望
01
血球计数板简介
血球计数板的结构
血球计数板由一块载玻片和两个 盖玻片组成，载玻片上刻有方格 ，每个方格分为9个中格，共计
162个小格。
04
稀释样本
将待测样本进行适当稀释，以 便于计数。
染色处理
根据实验要求，对稀释后的样 本进行染色处理。
滴加样本
使用吸管或移液器将染色后的 样本滴加到血球计数板的凹槽
中。
覆盖盖玻片
轻轻覆盖盖玻片，确保没有气 泡产生，然后进行显微镜检查
。
数据分析阶段
显微镜检查
使用显微镜观察血球计 数板，记录各种血细胞
提高医疗效率
降低医疗成本
血球计数板的智能化和自动化将大大 提高医疗效率，减轻医护人员的工作 负担。
血球计数板的优化和普及将降低医疗 成本，减轻患者经济负担，促进医疗 服务的普及和公平。
促进医疗技术创新
血球计数板的发展将推动医疗技术的 不断创新和发展，提高医疗质量和安 全性。
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药物研发
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
一、注意事项
1. 血球计数板只能用于血液检查，不能用于测量其他物质；
2. 将血球计数板放置于平面上，确保平稳，防止晃动和碰撞；
3. 在开始测定之前，要根据靶点的电极安装完整；
4. 滴血时要涂抹几种抗凝剂，防止血液沉淀。
如果血液较深，可在计数前用刨子将血液挖出。
二、步骤
1. 将血液精确滴在血球计数板上；
2. 连接血球计数板上的接头，打开电源；
3. 根据靶点调整电位器；
4. 将光学镜头的焦距调节到节点最佳状态；
5. 通过镜头观察血液样本，一次性计数红细胞、白细胞和血小板的数量；
6. 通过刀片移动的方式，进行血球的细致观察和计数；
7. 计数结束后，关闭电源，清理血球计数板上的血液，清洗各个部分，涂抹上抗菌剂。
血球计数板及其使用方法
血球计数板及其使用方法1、血球计数板的构造血球计数板是一种生物学或医学仪器，用以对人体血液中红细胞、白细胞进行显微计数，也常用于一些细菌、真菌、酵母菌等较大细胞或微生物的计数。
血球计数板的形状如图1所示，血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上由4个槽构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一方格网，每个方格网共分9个大方格（大方格用三线隔开），中央的一大方格作为计数用，称为计数室，如图2所示。
计数室的规格常有两种:一种叫XXX式（16×25型），是一个计数室分为16个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成25个小方格;另一种叫汤麦式(25×16型），是一个计数室分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
可是不管计数室是哪种构造，它们都有一个配合特点，即计数室都由400个小方格组成。
计数室的边长常为1mm,则计数室的面积为1mm2，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数室的容积为0.1mm3,每个小方格的边长为0.05mm,每个小方格的容积为边长为0.25mm，每其中方格的容积为长为0.2mm，每其中方格的容积为12、血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例）(1)用血球计数板计数培养液中的酵母菌个数。
(2)样品稀释的目的是便于酵母菌的计数，以每小方格内含有45个酵母菌为好，一般稀释10倍即可。
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室盖上专用的盖玻片。
(4)将稀释后的培养液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗人，多余的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻使酵母菌全部沉到计数室内。
(5)计数时，如果使用16×25型的计数室，要按对角线位，取左上，左下，右上，右下4个中方格（即100个小方格）的酵母菌个数3如果为25×16型的计数室，除了取其4个对角方位外，还需再数屮央的一个中方格（即80个小方格）的酵母菌个数。
血球计数板的使用方法
血球计数板的使用方法
血球计数板是一种用于测量血液中各种血球数量的实验室工具。
下面是使用血球计数板的一般步骤：
1. 准备工作：
- 清洁血球计数板：使用酒精或其他适当的清洁剂将血球计
数板彻底清洁，并确保完全干燥。
- 准备血液样本：采集血液样本，并将其置于抽血管中。
2. 充填血液样本：
- 将橡胶管连接至抽血管的一端，并将另一端放入含有适当
稀释液（例如乙醇，盐水等）的试管中。
- 轻轻压抽血管，让血液与稀释液混合，确保样本适当稀释。
3. 填充计数室：
- 将计数室的一角放入混合好的血液样本液中。
- 逐渐放松手指，使液体自然充满整个计数室。
4. 观察计数室：
- 使用显微镜，在10倍或40倍放大倍数下观察计数室的血
球图像。
- 记录计数室内的血球数量。
5. 计算血球数量：
- 将计数室中各种血球的数量进行计算和统计。
- 根据计数室内的面积和深度，计算总血球数量。
- 可以使用计数室所覆盖的血球数量与已知的面积，以得出
总血球数量的近似值。
6. 清洗和储存：
- 使用适当的清洁剂彻底清洗计数室，确保无血液残留。
- 将计数室储存在干燥，洁净的地方，以防止污染和损坏。
请注意，使用血球计数板可能需要一定的实验室训练和技巧，以确保准确性和可靠性。
在进行血液分析时，应遵循实验室的操作指南和安全规定。
血细胞计数板计数法
血细胞计数板计数法
血球计数板是一种特制玻片，厚度比普通载玻片厚。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间平台较宽，被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数使用。
计数室通常有两种规格，分别是16×25型和25×16型。
不管是哪一种构造，每一大方格都是由400个小方格组成。
16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格。
一
般取四角（1、4、13、16）四个中方格（100个小方格）计数。
细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100×400××稀释倍数。
25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数使用。
一般计数
四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。
细胞
个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80×400××稀释倍数。
注意事项：从培养瓶中取培养原液计数必须摇匀培养液后再取样，培养后期的样液稀释后再计数。
k高中生物实验中血球计数板使用方法
血球计数板介绍血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。
每块计数板由H 形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm 的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm 的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm （ul ），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。
根椐国际标准局（NBS ）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。
使用方法使用方法1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
的菌数可数为度。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用．将菌悬液摇匀，用滴管滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用并用吸水纸吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖以免加盖以免加盖盖玻片盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的由于生活细胞的折光率和水的折光率折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。
血球计数板使用说明
而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差；
由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。
仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。质量控制一般需采用以下措施。
n为测定例数，∑d2为双样之差的平方和。
3．人员质量评价一般用两差比值法或双样试验标准差评价法进行质量评价或工作人员自我考核；变异百分数法通常用于评价细胞计数的结果。
（1）两差比值法用于考核实验结果的精密度。采用同一稀释样间隔2h后进行重复计数，求出两次镜下计数值之差（取绝对值）与两次计数值标准差的比值，即两差比值（r）。
评分：score=100-20.1×r，20.1为失分系数（40/1.99）。评级：90-100为优秀，80-89为良好，70-79为中等，60-69为及格，<60时为不及格。
（2）细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒，同时应该保证细胞没有明显的团块。
（3）严格操作，从取样、重悬、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是样品稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
血球计数板使用方法
血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。
根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。
使用方法1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。
如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。
为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。
1血球计数板操作规程
耶赛明（南通）保健有限公司目的 Purpose规范计数板的标准操作，确保设备的操作有章可循。
范围 Scope适用于计数板的日常使用。
职责 Responsibility质检部的检验员负责遵守该规程，质检部负责人负责监督与管理。
内容Procedure1 概述1.1 测定微生物细胞和动物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
1.2 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等1.3 血球计数板1.3.1 是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
1.3.2 中间平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方网格（图1）。
图1：血细胞计数板构造（一） 图2：血细胞计数板构造（二）1.3.3 每个方网格分为9个大方格，正中间的大方格为计数室，计数室内的刻度有两种：一种是每个计数室内分为16个中方格（中方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格（图2）；另一种是每个计数室内分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数室内都由400个小方格组成。
1.3.4 计数室边长为1mm，则计数室的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
1.3.5 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物或细胞的数量，再换算成每毫升样液（或每克样品）中微生物或细胞的数量。
已知：1cm3体积=10mm×10mm×10mm=1000mm3=1ml；所以：1cm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。
血球计数板的使用(1-2)
直接法——血球计数板法
原理：将1mm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均 匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成 单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不 适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小， 不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距 离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌 悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
• 生长繁殖很难区分，测量方法局限
常以细胞数目增加（繁殖）衡量生长
一般所指生长是群体生长
描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需 选用不同的测定指标。 （一）微生物细胞数目的检测法 直接法（血球计数板法） 间接法（平板计数法、膜过滤法） （二）微生物生长量和生理指标测定法 直接法（干重法，测体积法） 间接法（比浊法，生理指标法）
专业名称：食品药品监督管理 课程名称：食品微生物检测技术
课前总结
• 单细胞微生物 生长 — 细胞质量增加、体积增大 繁殖 — 细胞分裂，数目增加
• 丝状微生物 生长 — 菌丝伸长、分枝 繁殖 — 孢子或菌丝断裂，数目增加
个体生长与群体生长
• 个ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生长
个体繁殖
群体生长
• 群体生长
个体生长 + 个体繁殖
特点：快速、简便；但易受干扰。
间接法——生理指标法
测含氮量 蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通
过测含氮量就可推知微生物的浓度。 一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据其
含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。 其他方法
含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、 产热、粘度等，都可用于生长量的测定。
血球计数板的使用-图文
对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
②用血球计数板对藻细胞进行计数 的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央 大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单 胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右 又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可 采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则 处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此 方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞， 统一不算此方格内的细胞。
。若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸 擦拭干净。
盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用 眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干 净。
将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上， 调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干净。
从试管中吸出培养液进行计数之前，要将 试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均 匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计数的代 表性和准确性，求得的培养液中的单胞藻 数量误差小。
血球计数板的使用
血球计数板的使用姓名原理血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。
这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0。
1mm，其体积为0。
1mm3。
计数室通常有两种规格。
一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例)：1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入.多余的菌液用吸水纸吸取。
稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
4 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格）的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格)的酵母菌数.5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞）.6 对每个样品计数三次,取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
计算公式：（1） 16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数（2) 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数7血球计数板的清洁：血球汁数板使用后,用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。
25格×16格的血球计数板使用方法介绍
25格×16格的血球计数板使用方法介绍血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。
每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。
计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。
计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为 1.0mm。
容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。
四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。
根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。
使用方法：1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5.25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。
为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。
6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
血球计数板的使用(3-4)
血球计数板的使用——清洗血球计数板
流水冲洗计数板，切勿用硬物洗刷，洗完 后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察 每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
血球计数板的适用范围
这种方法适用于个体较大细胞或颗粒，除霉菌孢子外，还比如酵母细胞，血 细胞等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为细菌细胞太小，不易沉降； 在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 这种方法能快速，准确计数，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加 入展
• 样品计数还有哪些方法可以完成？
血球计数板的使用注意事项
1. 血球计数板的清洗方法 2.计数规则计数时若遇位于中格线上的菌体遵循计上不计下，计左不计右原则，
防止重复计数。 3.对同一样品重复计数两次，取其平均值；若两次数据相差太大，则需重复计数。 4.加样时不能产生气泡，如有菌液粘在计数区内的盖玻片上表面，则应弃去盖玻
片，洗净计数板后重新加样。
中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。计数一个样品要从两个 计数室中计得的值求平均。
光强调节
显微镜10倍物镜下观察的25个中方格 显微镜40倍物镜下观察到的16个小方格
血球计数板的使用——计算
各中格中菌数
A
1
2
3
4
5
第一室
B
菌数/mL 二室平均数
第二室
1毫升菌液中的总菌数=A/5×25×10000×B=50000A·B（个） 五个中方格的总菌数为A,菌液稀释倍数为B
血球计数板的使用——加样
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细管将菌悬液由 盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入并充满计数室。
血球计数板使用说明
血球计数板使用说明血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽3各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm.取样:1、样品应该保证充分的均匀的情况下才有意义;2、样品应该尽量减少结团情况，如有结团应该吹散(或者用胰酶消化)后再计数;3、样品的体积大概250ul(大概5-7滴);4、如果体积大于100ml，取样应该保证在两个以上;5、如果是生产的技术应该取三个样，并每次都要充分混匀后取样;6、样品的体积只有进口的离心管和吸管的数据可以取信，但是离心管会有一定的波动误差，应该计算有15ml(-100ul)50ul(-300ul);稀释:1、稀释液应该是等渗的，不能带有颗粒(如果有应该先用滤纸过滤);2、稀释的时候样品的体积至少要用50ul，同时取样前应该用200ul的枪吹打10次，并马上取样;稀释后的样品也要用200ul枪吹打10次再取样计数;3、稀释后的样品四个中格的细胞数应该保证50-150个/中格;四个的总数应该大于200个;4、细胞应该计数应该尽量使用原样，如果有离心操作，应该保证样品在500ul以上，并用250g 离心5min;加样:1、计数板要用酒精清洗干净后，晾干，表面不能有污垢和纤维;2、盖玻片应该也保持洁净，并防在血球技术板的中间位置，血球计数板要放在平面上，再每边加样，每边的加样量为8.5ul;3、平稳放置30sec后放到显微镜上面，用100倍镜每次计数一个中方格; 计数:1、每个样品应该计数至少三次(否则会有很大偏离);2、每个方格的数应该在50-150间，计数的标准应该统一，如果是团就记为一个，但是可以明确分出是几个细胞的可以据实计数;3、遵守记上不记下，记左不记右;细胞压线超过50%在线内才有效; 人员:1、人员应该做同一个样品测试，同一个样品的细胞数总量应该在10个以内(或者是5%波动);同一个样品稀释后计数的数据波动应该在5%以内;2、不同人员的测试同一个样品的波动误差应该在5%以内;3、达到上诉的操作的要求的人员的操作数据才能取信;结果记录表4次数 A B C D 稀释倍数细胞数×10 1 2 3.其他人对这个问题的分析【质量控制】血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。
血细胞计数板的使用
• •2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，使 酵母菌分布均匀。
• •5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般
可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。
• •6．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可 计数三次，再取其平均值。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的
菌体。按公式计算每1ml（或10mL）菌液中所含的酵母菌个数。
• •3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀 释以便于酵母菌的计数。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养 液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所 得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。特别 是在培养后期的样液需要稀释后计数。 。
• 4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时， 即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个 酵母细胞。
血球计数板的清洁
• •7．血球计数板的清洁 • 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗
后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、 丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是 否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直 到干净为止
血细胞计数板
血细胞计数板的使用
•1 • 血细胞计数板的规格 • •人教版建议使用2mm×2mm×0.1mm方格 • •苏教版推荐使用1mm×1mm×0.1mm方格
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血球计数板的构造和使用
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.
计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.
血球计数板的使用
以计数酵母菌为例
(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.
(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央计数室上加盖专用的厚玻片.
(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).
(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中
所含的酵母菌个数.
3.计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式:
酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:
酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁
血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.。