纸色谱和氨基酸的纸上电泳

实验十九、 实验十九、纸色谱 实验二十、氨基酸的纸 实验二十、 上电泳
一、目的与要求： 目的与要求： 1、了解纸色谱的基本原理。 了解纸色谱的基本原理。 2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操 作。 3、了解电泳的基本原理，学会纸上电泳 了解电泳的基本原理， 的操作方法。 的操作方法。 4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基 酸。
二、基本原理 纸色谱是一种分配色谱。 （ 一 ） 纸色谱是一种分配色谱 。 滤纸作 为载体，纸纤维上吸附的水为固定相， 为载体 ， 纸纤维上吸附的水为固定相 ， 与 水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 当样品点在滤纸的一端， 当样品点在滤纸的一端 ， 使流动相从 有样品的一端上行， 通过毛细管作用， 有样品的一端上行 ， 通过毛细管作用 ， 流 向另一端时， 向另一端时 ， 依靠溶质在两相间的分配系 数不同而达到分离。 极性大的组分在固定 数不同而达到分离。 同而达到分离 相中分配得多，随流动相移动速度慢， 相中分配得多 ， 随流动相移动速度慢 ， 极 性小的在流动相中分配得多， 性小的在流动相中分配得多 ， 随流动相移 动速度快一些。 动速度快一些。
三、纸色谱实验步骤（观看录像） 纸色谱实验步骤（观看录像） 1、点样； 、点样； 2、展开； 、展开； 3、显色与结果处理——计算出两个物质的 、显色与结果处理 计算出两个物质的 Rf值 。
纸色谱图
样品原点中心到斑点中心的距离 Rf = 样品原点中心到溶剂前沿的距离
在一定的条件下， （ 二 ） 在一定的条件下 ， 带电的质点在 电场作用下， 电场作用下 ， 向着与其所带电荷相反的电 极移动，这种现象称为电泳。 极移动，这种现象称为电泳。 不同氨基酸在同一pH值的溶液中 ， 不同氨基酸在同一 值的溶液中， 所 值的溶液中 带的电荷不同。在同一电场中， 带的电荷不同 。 在同一电场中 ， 带不同电 荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同， 荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同 ， 因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳 时 ， 由于各个氨基酸移动的方向和距离都 不相同，从而达到分离鉴定的目的。 不相像） 纸上电泳实验步骤（观看录像） 1、点样与润湿； 、点样与润湿； 2、电泳； 、电泳； 3、显色； 、显色； 4、结果处理——标明正、负极和氨基 、结果处理 标明正、 标明正 酸。
氨基酸的纸上电泳图谱
实验注意事项： 实验注意事项： 整个实验都不应用手直接接触滤纸（ 1、整个实验都不应用手直接接触滤纸（手 汗中有氨基酸）； 汗中有氨基酸）； 2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上 电泳点样点越小越好（ 电泳点样点越小越好（可重复点4-5次）； 3、点完样后， 毛细管应放回原试管中 ， 不 、 点完样后，毛细管应放回原试管中， 可放错； 可放错； 4、电泳实验中 ， 当全部滤纸都放入电泳槽 、电泳实验中， 后才可以通电； 后才可以通电；
5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出 、 电压较高，注意安全）； （电压较高，注意安全）； 6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂 、 不用另外喷，直接吹干即可显色； 中，不用另外喷，直接吹干即可显色； 7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太 、 并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。 多，并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。