纸色谱和氨基酸的纸上电泳
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四、纸上电泳实验步骤(观看录像) 纸上电泳实验步骤(观看录像) 1、点样与润湿; 、点样与润湿; 2、电泳; 、电泳; 3、显色; 、显色; 4、结果处理——标明正、负极和氨基 、结果处理 标明正、 标明正 酸。
氨基酸的纸上电泳图谱
实验注意事项: 实验注意事项: 整个实验都不应用手直接接触滤纸( 1、整个实验都不应用手直接接触滤纸(手 汗中有氨基酸); 汗中有氨基酸); 2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上 电泳点样点越小越好( 电泳点样点越小越好(可重复点4-5次); 3、点完样后, 毛细管应放回原试管中 , 不 、 点完样后,毛细管应放回原试管中, 可放错; 可放错; 4、电泳实验中 , 当全部滤纸都放入电泳槽 、电泳实验中, 后才可以通电; 后才可以通电;
二、基本原理 纸色谱是一种分配色谱。 ( 一 ) 纸色谱是一种分配色谱 。 滤纸作 为载体,纸纤维上吸附的水为固定相, 为载体 , 纸纤维上吸附的水为固定相 , 与 水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 水不相混溶的有机溶剂作为流动相。 当样品点在滤纸的一端, 当样品点在滤纸的一端 , 使流动相从 有样品的一端上行, 通过毛细管作用, 有样品的一端上行 , 通过毛细管作用 , 流 向另一端时, 向另一端时 , 依靠溶质在两相间的分配系 数不同而达到分离。 极性大的组分在固定 数不同而达到分离。 同而达到分离 相中分配得多,随流动相移动速度慢, 相中分配得多 , 随流动相移动速度慢 , 极 性小的在流动相中分配得多, 性小的在流动相中分配得多 , 随流动相移 动速度快一些。 动速度快一些。
三、纸色谱实验步骤(观看录像) 纸色谱实验步骤(观看录像) 1、点样; 、点样; 2、展开; 、展开; 3、显色与结果处理——计算出两个物质的 、显色与结果处理 计算出两个物质的 Rf值 。
纸色谱图
样品原点中心到斑点中心的距离 Rf = 样品原点中心到溶剂前沿的距离
在一定的条件下, ( 二 ) 在一定的条件下 , 带电的质点在 电场作用下, 电场作用下 , 向着与其所带电荷相反的电 极移动,这种现象称为电泳。 极移动,这种现象称为电泳。 不同氨基酸在同一pH值的溶液中 , 不同氨基酸在同一 值的溶液中, 所 值的溶液中 带的电荷不同。在同一电场中, 带的电荷不同 。 在同一电场中 , 带不同电 荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同, 荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同 , 因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳 时 , 由于各个氨基酸移动的方向和距离都 不相同,从而达到分离鉴定的目的。 不相同,从而达到分离鉴定的目的。
实验十九、 实验十九、纸色谱 实验二十、氨基酸的纸 实验二十、 上电泳
一、目的与要求: 目的与要求: 1、了解纸色谱的基本原理。 了解纸色谱的基本原理。 2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操 作。 3、了解电泳的基本原理,学会纸上电泳 了解电泳的基本原理, 的操作方法。 的操作方法。 4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基 酸。
5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出 、 电压较高,注意安全); (电压较高,注意安全); 6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂 、 不用另外喷,直接吹干即可显色; 中,不用另外喷,直接吹干即可显色; 7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太 、 并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。 Байду номын сангаас,并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。