微生物平板划线试验

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在液体培养基中加入一定量凝固 剂,使其成为固体状态,琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
平板划线实验实习
一、相关基础理论--细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养,使其生长繁殖, 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物,在分离培养细菌时,除 采用适宜的培养基,并考虑到其他的培养条件之外, 掌握各种分离培养和接种的基本技术,也是重要环 节。
1、培养基
圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽, 不透明菌落,直径1~2mm
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
(3)取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管,用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞, 将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中,取 一接种环的菌液,然后退出菌种管,将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌,塞好试管塞,放至原来 的位置。
2、液体培养基接种方法
步骤:(1)用记号笔在待接种培养基上写明标记。 (2)如斜面培养基的接种方法一样,握持菌种管及 接种的肉汤管。 (3)接种环灭菌冷却后,伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内,在接近液面管壁处轻轻研磨, 蘸取少量肉汤调和,使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后,摇动液体,使细菌在液体中均匀分布。 (4)接种完毕,将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养,18~24小时后观察生长 情况。
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中,不 同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某 种细菌,就必须将各种细菌进行分离,以得到只含 有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后,常 需要接种到有关的培养基中,以测试其各种生物学 性状,不同的细菌需要不同的培养基进行培养。
1、培养基
培养基按其物理性状,分为固体培养基、液体培养 基和半固体培养基。 培养基按用途,分基础培养基、加富培养基、选择 培养基、鉴别培养基。
2、常见培养基
基础培养基
肉浸液培养基:一般细菌都能在此培养基内生长 营养琼脂培养基:一般细菌培养使用 蛋白胨水培养基:靛基质实验
2、常见培养基
加富培养基
血琼脂培养基:可作为肺炎球菌、链球菌、葡萄球 菌、嗜血杆菌等的分离培养,还可用 于某些菌落的溶血作用 巧克力琼脂培养基:淋球菌及脑膜炎双球菌在此培养 基上生长较佳
2、液体培养基接种方法
图2-2 液体培养基接种法
3、穿刺接种法
常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁 培养基等的接种,前者用于测定细菌的动力,后二 者则用于观察细菌的生化反应。
3、穿刺接种法
步骤:(1)用记号笔在待接种培养基上写明标记。 (2)如斜面培养基接种法,握持菌种管及待接种 的半固体琼脂培养基。 (3)右手持接种针,灭菌冷却后,以针挑取菌 苔,垂直刺入半固体琼脂培养基的中心,刺 达近管底部,但不必及于管底,然后循原路 退出。 (4)接种完毕,接种针重新灭菌后放至试管架 上,塞好试管塞,37℃培养18~24小时后取 出观察细菌的生长情况。
3、穿刺接种法
图2-3 穿刺接种法
4、平板划线接种法
常用于分离单个菌落,也可用于观察细菌的生长状 况和观察某些生化反应。沙门氏菌的各属在亚硫酸 铋琼脂平板上呈黑色,具有金属光泽;志贺氏菌属 在HE琼脂平板、SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板上 呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
4、平板划线接种法——接种方法
5、观察结果
(1)菌落的形态特征:大小、形状(露滴状、圆形、菜 花样、不规则等)、突起或扁平、凹陷、边缘(光滑、 波形、锯齿状、卷发状等)、颜色(红色、灰白色、 黑色、绿色、无色、黄色等)、表面(光滑、粗糙 等)、透明度(不透明、半透明、透明等)和粘度等。
5、观察结果
(2)菌落溶血特征:菌落溶血有下列3种情况。①α溶 血:又称草绿色溶血,菌落周围培养基出现1~2mm 的草绿色环,为高铁血红蛋白所致;②β溶血:又称 完全溶血,菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环, 是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致;③γ溶 血:即不溶血,菌落周围的培养基没有变化,红细胞 没有溶解或缺损。
二、细菌的接种方法
将混合的细菌分离的方法有多种,平板划线法即是 其中之一,该方法主要是借划线而将混杂的细菌在 琼脂平板表面分散开,是单个细菌能固定在某一点, 生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。 当细菌分离成纯种后,一般还可用斜面、液体和半 固体培养基来检验细菌的培养特征,因此接种方法 可相应的分为四种。
4、平板划线接种法
(4)分离划线接种细菌(四区接种法) ①左手持琼脂平板培养基(将皿盖反放在桌上酒 精灯附近),尽量使之直立以免空气中的细菌落入 其中,并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端 来回划线,涂成一细菌薄膜(约占平板的1/10), 视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40 度角,以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度,烧灼接种环,以杀灭环上 的残留细菌,将接种环触及培养基表面以使其冷却。 灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线(约占平板 1/5),此视为二区。
(8)接种完毕,灭菌两试管的管口,塞好试管塞,并 放至原来的位置上。重新烧灼接种环,灭菌后放回 试管架上。接种好的试管放37℃温箱培养,18~ 24小时候观察生长情况。
1、斜面培养基接种法
图2-1 斜面培养基接种法
2、液体培养基接种方法
可用于观察细菌不同的生长状况,有的呈均匀混浊, 有的呈沉淀生长,还有的在液体表面形成菌膜;另 外还可以供测定细菌生化特性用。凡是肉汤、葡萄 糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用 此法接种。
5、观察结果
(3)色素:有些细菌产生水溶性色素,使菌落和周围 的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等 颜色,产生的色素有水溶性或脂溶性。 (4)气味:某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特 殊气味,如铜绿假单胞菌(生姜气味)、变形杆菌 (巧克力烧焦的臭味)、厌氧梭菌(腐败的恶臭味)、 白色假丝酵母菌(酵母味)和放线菌(泥土味)等。
1、斜面培养基接种法
(6)以右手手掌及小指,小指及无名指分别拔取并 夹持两管试管塞,将两管管管口灭菌。 (7)将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内,从 斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进 待接种的培养基管,进行斜面培养基接种,从 斜面底部轻轻向顶端弯曲划线,不要触破培养 基表面。
1、斜面培养基接种法
4、平板划线接种法
③旋转琼脂平板90度,灼烧接种环灭菌并使之冷 却。将灭菌接种环接二区连续平行划线(约占平板 1/4),此为三区。 ④旋转琼脂平板90度,接种环不必再灭菌,接三 区连续平行划线,划满平板其余部分,此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接,以达到细菌逐渐稀 释的目的。
4、平板划线接种法
2、常见培养基
选择培养基
亚硒酸盐增菌液:作为沙门氏菌属及某些志贺氏菌属 增菌用 伊红-美蓝琼脂:分离沙门氏及志贺氏菌属细菌 Baird-Parker培养基:用于金黄色葡萄球菌的培养分 离
2、常见培养基
鉴别培养基
三糖铁琼脂:供鉴定肠道细菌用 双糖含铁琼脂:供鉴定肠道细菌用 葡萄糖枸橼酸盐琼脂:共作鉴别大肠杆菌与产气杆菌 之用
(1)标记 在培养皿底面,用记号笔注明接种的菌名、接种
者姓名、日期等。
4、平板划线接种法
(2)灭菌接种环 点燃酒精灯,右手以持笔式握持接种环,并放置火 焰中烧灼灭菌,先将接种环的接种丝部分置于火焰 中,待金属丝烧红并蔓延至金属端,再直接烧灼金 属环直至烧红,然后由金属环至金属杆方向快速通 过火焰,随后再反方向通过火焰,如此2~3次。然 后将接种环移开火焰,待其冷却。
牛膏蛋白胨培养基是最常用 的基础培养基 基础培养基 加富培养基 选择培养基
用来将某种或某类微生物从混杂的 微生物群体中分离出来的培养基 在基础培养基中加入某些特殊营养 物质制成的一类营养丰富的培养基
按 用 途 不 同 划 分
鉴别培养基
用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物,与培养 基中的特殊化学物质发生特定的化 学反应,产生明显的特征变化
1、实验内容 2、实验目的 3、实验用品 4、实验步骤 5、观察结果
1、实验内容
(1)四区划线法接种金黄色葡萄球菌至血琼脂培
养基平皿一个
(2)四区划线法接种普通大肠杆菌至伊红美蓝培
养基平皿一个
2、实验目的
(1)熟悉四区划线法接种细菌
(2)培养严格的无菌操作意识
3、实验用品
(1)菌液:金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌 菌液各一管。 (2)实验器械:酒精灯一个、血平板一个、 伊红美蓝平板一个、接种环一支。
表3 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种法
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法
穿刺接种法
菌种
葡萄球菌和大肠 大肠杆菌培养物 变形杆菌培养物 大肠杆菌培养物 杆菌的混合菌液 枯草杆菌培养物 痢疾杆菌培养物 普通琼脂平板 琼脂斜面 培养基 普通肉汤 培养基 半固体琼脂 培养基
培养基平板划线接种法
4、平板划线接种法
(5)划线完毕,将琼脂平板放进皿盖,将培养皿倒放, 送进37℃温箱培养。 (6)培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表 面生长的各种菌落,注意其大小、形状、边缘、表 面结构、透明度、颜色等性状。
三、金黄色葡萄球菌和普通大肠杆菌
平板划线接种实验
4、实验步骤
参照前面介绍的四区划线法的操作步骤操作, 一定要在无菌条件下,养成无菌意识。
(1)标记
(2)灭菌接种环
(3)取菌种 (4)分离划线接种细菌 (5)划线完毕,送进37℃温箱培养 (6)培养18~24h ,观察结果
5、观察结果
结果观察在18~24小时以后
菌落:标本或液体培养物划线接种到固体培养基表 面后,单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的 细菌集团,称为菌落。
常用于细菌的大量繁殖,保存菌种,或观察其某些 生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、 柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可 用此法接种。
1、斜面培养基接种法
步骤:(1)用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 (2)点燃酒精灯。 (3)左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管,使菌种管位于左侧, 斜面部均应向上。 (4)以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞,以 便在接种是易于拔取。 (5)右手持接种环,在火焰上烧灼灭菌。
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