大孔树脂处理方法步骤

1、大孔树脂处理方法步骤：

将大孔树脂用无水乙醇浸泡24h后湿法装柱；用乙醇2BV/h通过树脂层，冲至流出液加水不呈白色浑浊为止，并用去离子水以同样流速冲洗至无醇味（大概5

倍柱体积）；然后用2BV/h 0.5% HCl(2-3倍柱体积)以2.5ml/min流速通过树脂层，并浸泡2—4h后用水以同样流速洗至流出液pH值呈中性；最后用2BV 2%NaOH 溶液以2.5ml/min流速通过树脂层，并浸泡2—4h后，用水以同样流速洗至流出液pH 呈中性。

而长时间不用保存，待活化后，再用95%乙醇浸泡，即可。

2、装柱

树脂分别浸没在蒸馏水中，避免气泡产生对总黄酮分离纯化的影响。树脂加到预定的柱体积后，再用蒸馏水反复过柱，使柱内的树脂充分压紧。装好的树脂柱静置过夜，使柱内的树脂继续压紧直至充分稳定下来后才能使用。上样时将柱上部蒸馏水放至与树脂面基本齐平后，沿管壁从柱上部缓慢加入待分离纯化的样品溶液。应注意不要冲松表层树脂而使之浮起。自柱下放出少许液体，至样品液面与树脂表面基本齐平。

3、大孔树脂对麻黄总黄酮吸附的研究（静态吸附实验）

精密称取已处理好的5种大孔树脂D101、AB-8、D-4020、HP-20、SP-70适量（相当于树脂5.0g）,置于250ml锥形瓶中，精确加入已知浓度的发酵液溶液100ml，用振荡器振荡24h,充分吸附后，滤过，分别取各树脂的滤液1ml进行吸光度的分析，测定滤液剩余黄酮的含量，按

吸附率：E%

E% =C0 —C e / C0 ×100% C0 —吸附前溶液的浓度mg/ml C e —吸附后溶液浓度

吸附量

Q=（C0 —C e）×V/W Q—吸附量mg/g W 干树脂重 V溶液体积

计算各树脂在室温下的吸附量，吸附率。

按上述试验方法，取充分吸附后的树脂过滤抽干，分别精密加入95%的乙醇各

30ml,室温下浸泡振摇24h,滤过，测定滤液中黄酮浓度，根据下式：解吸

率%=C2V2/（C0-C1）×V1×100%计算解吸率。式中C0：吸附前溶液浓度（mg/ml）,C1:吸附后溶液浓度（mg/ml）,V1上样溶液的体积（ml）,C2:解吸液浓度（mg/ml）,V2解吸液体积（ml）,W树脂干重。

4、上样量得确定

取300ml发酵液，上大孔吸附树脂柱，以3ml/min的流速进行上样，每50ml分段收集流出液，蒸干，检测，以液相中出现色谱峰为指标，确定最佳上样量。

5、除杂溶剂的确定

取发酵液溶液？ml,上大孔吸附树脂柱，分别用蒸馏水、10%、20%、30%、

的乙醇各100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，检测，以液相中出现色谱峰为指标，确定最佳除杂溶剂。

5、除杂溶剂量的确定：

取发酵液溶液？ml,上大孔吸附树脂柱，加入除杂溶剂300ml,每5 BV 分段收集流出液，蒸干，检测，以液相中出现色谱峰为指标，确定最佳除杂溶剂量。

6、洗脱剂的确定

取发酵液溶液？ml,上大孔吸附树脂柱，除杂，采用不同浓度的乙醇（20%、40%、60%、80%、100%）进行梯度洗脱，洗脱液用量分别为100ml,控制流速为1.5ml/min,分段收集。

7、洗脱剂用量的确定

根据上述结果确定的吸附容量和洗脱溶媒，吸附发酵溶液？ml上柱，除杂，然后？%的乙醇洗脱，分3段收集（100ml、50ml、50ml）,测定含量。