1生物学实验常用技术

生物学实验常用技术

一、分子方面

1基因工程

1）PCR

（Polymerase Chain Reaction

2）RT-PCR;Q-PCR

3）琼脂糖凝胶电泳;胶回收

4）酶切/链接

5）转化

6）固体/液体LB培养基配制（高压蒸汽灭菌锅使用方法）7）质粒大/小抽原理及步骤

（手提、溶液I、II、山作用）8）基因组DNA抽提

9）RNA提取；

（TRIZOL法原理、注意事项及步骤）2、蛋白质工程

1）蛋白收集

（蛋白裂解液+PMSF;

2）SDS-PAGE（电泳胶的配制）

2）考马斯亮蓝染色，银染

3）Wester n blot

4）蛋白定量常用的方法及原理,以及熟练操作Bradford法蛋

二、细胞方面

1）细胞培养、传代

2）细胞冻存与复苏

（2）DMSO培养基:血清= 1:3:6均可

DMSO为细胞专用型；现用现配，效果最好；冻存时细胞在-80C中不要超过一周，最好在24-48h内放入液氮罐中保存。

3）细胞培养基配制（过滤除菌）、胰酶配制（过滤除菌）,PBS配制（灭菌）;（不同培养基的区别；谷氨酰胺（提供氮源）,2周补充一次）4）转染

5）MTT原理及操作（检测细胞存活率或死亡率）

6）碱性磷酸酶实验（ALP,检测细胞分化）

（5、6需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用）

7）Hoechst 染色

8）结晶紫染色（不推荐）

9）苏木精/伊红染色

（9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮）

10荧光显微镜的使用

11）激光共聚焦显微镜样品制备（细胞固定，染色，洗脱）（7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据）

12）流式细胞仪样品制备（包括:转染效率与细胞凋亡染色标记）以及仪器操作（需学会FlowJo软件分析流式结果）

三、动物实验

1）小鼠的定制:

ICR小鼠（正常）,9元/只

BalB/C小鼠（正常）,30元/只

SD大鼠（正常）,30元/只

裸鼠（免疫缺陷小鼠）,80元/只

NOD SCID小鼠（免疫三缺陷）,250元/只

其中前四种就是常用的，最后一种以后可能会用到。

浙江中医药大学：小鼠品系齐全，可提供以上小鼠静脉注射，提供体内原位成瘤手术；杭州师范大学:NOD SCID品系小鼠没有，不提供裸鼠静脉注射,不提供体内原位成瘤手术。

2）小鼠成瘤（熟练皮下成瘤操作）；

3）肿瘤测量（游标卡尺测量;IVIS测量（推荐，前体要构建Luc细胞系））

4）慢病毒转染构建稳转Luc癌细胞系

5）小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及ICR小鼠的尾静脉注射

6）小鼠尾部与眼球取血

7）小动物活体成像仪的原理及使用方法

8）小鼠解剖及组织固定

9）组织电镜样品的制备及TEM的使用

10）免疫组织切片样品的制备

（蜡块制备25元;HE染色15元/片;TUNEL:200元/片;免疫组化:45

元/片（抗体自备））

11）免疫组织切片的观察（荧光显微镜与正置光学显微镜使用切换）