儿科导管相关性感染中表皮葡萄球菌的生物膜形成检测-论文
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医学 院医学检 验系 ( 王 明明 )
实用 医学杂志 2 0 1 5年第 3 1卷第 1 3期
全部 菌 株共 1 3 7株 , 其 中 深 静 脉 导 管 6 8例 , 占 4 9 . 6 4 %:静 脉 管 4 6例 , 占 3 3 . 5 8 % ;各 类 插 管 1 6 . 7 9 %. 占1 6 . 7 %。一 8 0℃冷 冻 保 存 。 1 3 7例 患 儿
2 2 O 4
实用 医学杂 志 2 0 1 5年第 3 1卷第 l 3期
另 外 .本 研 究 随机 挑 选 的用 于核 酸 和 抗 原 检
分析 [ J ] .中华 检验 医学 杂志 , 2 0 0 8, 3 1 ( 1 ) : 8 2 — 8 5 .
测的 l 2份 阳 性 标 本 中 , 弱 阳性 标 本 偏 少 , 若 能 有 更 多弱 阳性 标 本 来 验 证 检 测 结果 的稳 定 性 ,将 会 使 实 验 的结 果 更具 有 说 服 力 。
药性极强 , 且难 以彻底清除 , 是 临床上难治性感染 的重 要 原 因之 一 [ 卜 。表 葡 菌 极 易在 植 人 性 导 管表 面形成生物膜 。从而有效抵抗机体 防御反应 和抗 生 素 治 疗 ,是 导 致 导 管 相 关 性 感 染 迁 延 不 愈 甚 至 出现 脓 毒血 症 等严 重后 果 的重 要 原 因[ 4 - 5 ] 。本 文通 过 对 儿 科 患 者 植 入 性 导 管 中检 出 的表 葡 菌 进 行 生 物 膜 检 测 ,分 析 评 估 儿 科 导 管 相 关 性 感 染 中表 葡 菌 的生 物膜 形 成 能 力 。
摘要 目的 : 评估儿科 患者植入性 导管 中检 出的表 皮葡萄球 菌的生物膜形成 能力 。 方法 : 选择本 院患儿 各 类导管分 离的表皮 葡萄球 菌 1 3 7株 , 用刚果红平板和 半定量黏 附 实验 筛选 出生物膜 菌株 ,P C R检测 与表 皮葡萄球 菌生物膜形成相 关的基 因 i c a A的表达 。结果 : 1 3 7株 临床分 离的袁 葡菌 ,刚果红 实验 阳性 2 9株 、
为 医源 性 感 染 和 临 床 耐 药 的 主要 病 原 菌 之 一 。细
菌生 物膜 ( b a c t e r i a l b i o i f l m. B B F ) 是 附 着 于 惰 性 或
活 性 实 体 表 面 的 细 菌 以及 由细菌 分 泌 的含 水 聚 合 性 基 质 组 成 的结 构性 细 菌 群落 ,这 类 细 菌 群 体 耐
刚果 红 试 实验 阳性 、半 定 量 黏 附实 验 阴性 : 3株 刚
[ 3 ] 陈燕清 , 唐小平 , 关玉 娟 , 等. 4 8 4例登 革热 临床 实验诊 断 的
( 收稿 : 2 0 1 5 - 0 2 — 1 5 编辑 : 王耀 东 )
儿科导管相关性感染 中表皮葡萄球菌 的 生 物膜 形 成检 测
吴 跃 平 王 明 明 王 红 梅 肖伟 伟 蔡 德 丰 马 东礼
1 2 8 .
范恩 勇 ,孙海 英 . 标本 的保 存 温度 和 时 间对 血清 抗 一 HI V E L I S A检测结果 的影 响
2 2 - 23 .
[ J ] . 中国输 血杂 志 , 2 0 0 4, 1 7 ( 1 ) :
李晓宁, 罗雷, 肖新才 , 等. 广 州市 登革热 散发 和暴 发布雷 图 指数 临界 值 分 析
取试剂盒 , T A K AR A公司 ; P C R反 应 试 剂 盒 , T AK AR A公 司 。
1 . 3 方 法
2 结 果
2 . 1 刚果 红 实 验 共 检 测 1 3 7株 表 葡 菌 , 其中 2 9 株 为 生 物膜 阳性 菌株 , 1 0 8株 为 生 物膜 阴性 菌株 。 2 . 2 半 定 量 黏 附 实验 1 3 7株 表 葡 菌 中检 出生 物 膜 阳性 菌株 2 6株 。 2 . 3 P C R检测 i c a A基 因 对 前 两 项 实 验 中任 一 项 阳性 的 3 5株 表 葡 菌 进 行 i c a A基 因 检 测 ( 其 中 2 0株 刚 果 红 实 验 和 半 定 量 黏 附实 验 均 阳 性 : 9株
ATCAAACAAGCA3 . 3 ACGAACAAAC’ I I AAGGGA
G 5 ’ .由大 连 宝 生 物工 程 有 限公 司合 成 。 P C R 扩 增 :扩 增 条 件 为 9 4℃预 变 性 4 mi n , 9 4℃变 性 1 mi n , 5 0℃退 火 1 mi n , 7 2℃延 伸 1 mi n , 共 3 5个 循 环, 7 2 ℃延 伸 8 mi n 。扩增 后取 反 应 产物 5 , 1 . 5 %琼 脂 糖 凝 胶 电泳 1 1 0 V 3 0 m i n , 检测并成像 , 扩 增产 物为 4 5 0 b p D N A片 段 。 1 . 4 质 控 菌 株 以表 皮 葡 萄 球 菌 A T C C 3 5 9 8 4为 生 物 膜 形 成 阳性 菌 株 。 A T C C1 2 2 2 8为 生 物 膜 形 成 阴性 菌 株 。
r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e P C R ( R T - P C R) t o s c r e e n f o r De n g u e
v i r u s f o l l o we d b y r a p i d s i n g l e - - t u b e mu hi p l e x RT・ ・ PC R f or
4 参 考 文 献
La i YL, Ch un g YK , Ta n HC, e t a 1 .Co s t — e f f e c t i v e r e a l — t i me
李小妹, 佘 尚扬 . 血 清标 本冷 藏 保存 时 间对 梅 毒 T R U S T试
验结 果 的影 响 [ J ] .现 代检 验 医学 杂 志 , 2 0 1 2 , 2 7 ( 5 ) : 1 2 6 —
9 3 5- 9 41 .
[ 2 ] 杭 小同 . 李建 东 , 张全 福 , 等. 登 革病毒 R T — P C R核 酸检 测竞 争 性假病毒颗 粒型 内参 照品 的建 立
病 毒学杂 志 , 2 0 1 0 , 2 4 ( 1 ) : 5 6 — 5 8 .
『 J _ . 中华实验 和临床
2 7 ( 1 3 ) : 2 4 5 4 - 2 4 5 6 .
有研究表 明, 登革 病毒抗 原检测试剂盒 ( 酶联 免疫法 ) 有 很 好 的敏 感 性 和 特 异 性 [ 。 且 抗 原 检 测 的成 本 远 低 于 核 酸 检 测 ,对 检测 设 备 条 件 要 求 更 低 。因 此 , 抗原 检 测 方法 更 有 优 势在 基 层 医疗 机 构 开展 , 用 于 登 革热 的诊 断 。
半 定 量 黏 附 实验 阳 性 2 6 株 : 刚 果 红 实验 和 半 定 量 黏 附 实验 任 一 项 或 两 项 同时 阳 性 的 3 5株 表 葡 菌 中 i c a A
基 因阳性 2 4株 。结论 : 我 院儿科导 管相关性感 染 中分 离的表 葡 茵具有一定 的生物膜形 成能力 , 须 引起 临床
蔡 桂君 , 林 丽娟 , 方艳 平 , 等. 自制人 巨 细胞病 毒核 酸室 内质 控物 的 重复 性 观察 [ J ] . 临床 检验 杂 志 , 2 0 1 3 , 3 1 ( 9 ) : 7 1 3 —
7 1 4.
黎建安 ,刘紫 菱 ,林珠 ,等 . 保存温 度和保 存时 间对 血清 H C V . R N A定量检 测 结果 的影 响 [ J ] . 实 用 医学杂 志 , 2 0 1 1 ,
中, 男8 7 例, 女5 0 例, 平均年龄 ( 2 . 3±1 . 2 ) 岁。
1 . 2 仪器 与试 剂
1 . 2 . 1 仪器
V I T E K C o m p a c t 2全 自动 细 菌 鉴 定
及 药 敏 分 析 仪 ,法 国 生 物 梅 里 埃 公 司 ; MK 3酶 标 仪 ,上海 热 电公 司 ; V e r i t i 9 6 一 W型P C R仪 ,美 国 A B I公 司 ; 电 泳 仪 , 美 国 B I O — R A D公 司 ; G E L D o c T MX R+ 凝胶成像系统 , 美国B I O — R A D公 司 。 1 . 2 . 2 试 剂 刚 果 红 干 粉 , S i g ma 公 司 :脑 心浸 液 培 养基 , 杭州滨 和 ; 蔗糖及琼脂粉 , 天津大茂 ; 血 平 板, 郑 州 安 图生 物 ; 胰 蛋 白 大 豆 肉汤 ( T S B) , 英 国 O X O I D公 司; 龙胆紫染液 , 珠海贝索 ; 细菌 D N A提
d o i : 1 0 . 3 9 6 9 / j . i s s n . 1 0 0 6 - 5 7 2 5 . 2 0 1 5 . 1 3 . 0 4 4
基金项 目: 深圳 市科技计 划立项项 目( 编号 : 2 0 1 3 0 3 0 6 1 ) 作者单 位 : 5 1 8 0 2 6 广东省深圳 市儿童 医院检验科 ( 吴跃 平 ,
8 2 1 -8 2 4. Xu H , Di B, P a n YX, e t a 1 .S e r o t y p e 1 一 s p e c i ic f mo n o c l o n a l a n t i b o d y-b a s e d a n t i g e n c a p t u r e i mmu n o a s s a y f o r d e t e c t i o n o f c i r c u l a t i n g n o n s t mc t ur a l p r o t e i n NS1: I mp l i c a t i o n s f o r e a r l y
ห้องสมุดไป่ตู้重视 。
关键 词
表皮 葡萄球 菌; 生物 膜 ; 儿科 ; 导 管相关性 感染 ; i c a A
随着各 种侵入 性诊疗 措施 在临床 的应用 , 表
皮葡萄球菌 ( S t a p h y l o c o c c u s e p i d e r mi d i s , S E) 已 成
d i a g n o s i s a n d s e r o t y p i n g o f d e n g u e v i u r s i n f e c t i o n s[ J ] . J C l i n
Mi c r o b i o l ,2 0 0 6 , 4 4 ( 8 ) : 2 8 7 2 — 2 8 7 8 .
1 材 料 与 方 法
1 . 1 菌株 收集 本 院 2 0 1 2年 1 1月 至 2 0 1 4年 1 0 月期 间从 各 类 导 管 分 离 并 鉴 定 为 表 皮 葡 萄球 菌 的
王 红梅 , 肖伟 伟 , 蔡德丰, 马东 礼 ) ; 5 2 3 8 0 8 广 东省 东莞 市 , 广 东
[ J ] . 中华 流 行 病学 杂 志 , 2 0 1 4 , 3 5( 7) :
s e r o t y p i n g o f t h e v i r u s [ J ] .J C l i n Mi c r o b i o l , 2 0 0 7 , 4 5( 3 ) :
实用 医学杂志 2 0 1 5年第 3 1卷第 1 3期
全部 菌 株共 1 3 7株 , 其 中 深 静 脉 导 管 6 8例 , 占 4 9 . 6 4 %:静 脉 管 4 6例 , 占 3 3 . 5 8 % ;各 类 插 管 1 6 . 7 9 %. 占1 6 . 7 %。一 8 0℃冷 冻 保 存 。 1 3 7例 患 儿
2 2 O 4
实用 医学杂 志 2 0 1 5年第 3 1卷第 l 3期
另 外 .本 研 究 随机 挑 选 的用 于核 酸 和 抗 原 检
分析 [ J ] .中华 检验 医学 杂志 , 2 0 0 8, 3 1 ( 1 ) : 8 2 — 8 5 .
测的 l 2份 阳 性 标 本 中 , 弱 阳性 标 本 偏 少 , 若 能 有 更 多弱 阳性 标 本 来 验 证 检 测 结果 的稳 定 性 ,将 会 使 实 验 的结 果 更具 有 说 服 力 。
药性极强 , 且难 以彻底清除 , 是 临床上难治性感染 的重 要 原 因之 一 [ 卜 。表 葡 菌 极 易在 植 人 性 导 管表 面形成生物膜 。从而有效抵抗机体 防御反应 和抗 生 素 治 疗 ,是 导 致 导 管 相 关 性 感 染 迁 延 不 愈 甚 至 出现 脓 毒血 症 等严 重后 果 的重 要 原 因[ 4 - 5 ] 。本 文通 过 对 儿 科 患 者 植 入 性 导 管 中检 出 的表 葡 菌 进 行 生 物 膜 检 测 ,分 析 评 估 儿 科 导 管 相 关 性 感 染 中表 葡 菌 的生 物膜 形 成 能 力 。
摘要 目的 : 评估儿科 患者植入性 导管 中检 出的表 皮葡萄球 菌的生物膜形成 能力 。 方法 : 选择本 院患儿 各 类导管分 离的表皮 葡萄球 菌 1 3 7株 , 用刚果红平板和 半定量黏 附 实验 筛选 出生物膜 菌株 ,P C R检测 与表 皮葡萄球 菌生物膜形成相 关的基 因 i c a A的表达 。结果 : 1 3 7株 临床分 离的袁 葡菌 ,刚果红 实验 阳性 2 9株 、
为 医源 性 感 染 和 临 床 耐 药 的 主要 病 原 菌 之 一 。细
菌生 物膜 ( b a c t e r i a l b i o i f l m. B B F ) 是 附 着 于 惰 性 或
活 性 实 体 表 面 的 细 菌 以及 由细菌 分 泌 的含 水 聚 合 性 基 质 组 成 的结 构性 细 菌 群落 ,这 类 细 菌 群 体 耐
刚果 红 试 实验 阳性 、半 定 量 黏 附实 验 阴性 : 3株 刚
[ 3 ] 陈燕清 , 唐小平 , 关玉 娟 , 等. 4 8 4例登 革热 临床 实验诊 断 的
( 收稿 : 2 0 1 5 - 0 2 — 1 5 编辑 : 王耀 东 )
儿科导管相关性感染 中表皮葡萄球菌 的 生 物膜 形 成检 测
吴 跃 平 王 明 明 王 红 梅 肖伟 伟 蔡 德 丰 马 东礼
1 2 8 .
范恩 勇 ,孙海 英 . 标本 的保 存 温度 和 时 间对 血清 抗 一 HI V E L I S A检测结果 的影 响
2 2 - 23 .
[ J ] . 中国输 血杂 志 , 2 0 0 4, 1 7 ( 1 ) :
李晓宁, 罗雷, 肖新才 , 等. 广 州市 登革热 散发 和暴 发布雷 图 指数 临界 值 分 析
取试剂盒 , T A K AR A公司 ; P C R反 应 试 剂 盒 , T AK AR A公 司 。
1 . 3 方 法
2 结 果
2 . 1 刚果 红 实 验 共 检 测 1 3 7株 表 葡 菌 , 其中 2 9 株 为 生 物膜 阳性 菌株 , 1 0 8株 为 生 物膜 阴性 菌株 。 2 . 2 半 定 量 黏 附 实验 1 3 7株 表 葡 菌 中检 出生 物 膜 阳性 菌株 2 6株 。 2 . 3 P C R检测 i c a A基 因 对 前 两 项 实 验 中任 一 项 阳性 的 3 5株 表 葡 菌 进 行 i c a A基 因 检 测 ( 其 中 2 0株 刚 果 红 实 验 和 半 定 量 黏 附实 验 均 阳 性 : 9株
ATCAAACAAGCA3 . 3 ACGAACAAAC’ I I AAGGGA
G 5 ’ .由大 连 宝 生 物工 程 有 限公 司合 成 。 P C R 扩 增 :扩 增 条 件 为 9 4℃预 变 性 4 mi n , 9 4℃变 性 1 mi n , 5 0℃退 火 1 mi n , 7 2℃延 伸 1 mi n , 共 3 5个 循 环, 7 2 ℃延 伸 8 mi n 。扩增 后取 反 应 产物 5 , 1 . 5 %琼 脂 糖 凝 胶 电泳 1 1 0 V 3 0 m i n , 检测并成像 , 扩 增产 物为 4 5 0 b p D N A片 段 。 1 . 4 质 控 菌 株 以表 皮 葡 萄 球 菌 A T C C 3 5 9 8 4为 生 物 膜 形 成 阳性 菌 株 。 A T C C1 2 2 2 8为 生 物 膜 形 成 阴性 菌 株 。
r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e P C R ( R T - P C R) t o s c r e e n f o r De n g u e
v i r u s f o l l o we d b y r a p i d s i n g l e - - t u b e mu hi p l e x RT・ ・ PC R f or
4 参 考 文 献
La i YL, Ch un g YK , Ta n HC, e t a 1 .Co s t — e f f e c t i v e r e a l — t i me
李小妹, 佘 尚扬 . 血 清标 本冷 藏 保存 时 间对 梅 毒 T R U S T试
验结 果 的影 响 [ J ] .现 代检 验 医学 杂 志 , 2 0 1 2 , 2 7 ( 5 ) : 1 2 6 —
9 3 5- 9 41 .
[ 2 ] 杭 小同 . 李建 东 , 张全 福 , 等. 登 革病毒 R T — P C R核 酸检 测竞 争 性假病毒颗 粒型 内参 照品 的建 立
病 毒学杂 志 , 2 0 1 0 , 2 4 ( 1 ) : 5 6 — 5 8 .
『 J _ . 中华实验 和临床
2 7 ( 1 3 ) : 2 4 5 4 - 2 4 5 6 .
有研究表 明, 登革 病毒抗 原检测试剂盒 ( 酶联 免疫法 ) 有 很 好 的敏 感 性 和 特 异 性 [ 。 且 抗 原 检 测 的成 本 远 低 于 核 酸 检 测 ,对 检测 设 备 条 件 要 求 更 低 。因 此 , 抗原 检 测 方法 更 有 优 势在 基 层 医疗 机 构 开展 , 用 于 登 革热 的诊 断 。
半 定 量 黏 附 实验 阳 性 2 6 株 : 刚 果 红 实验 和 半 定 量 黏 附 实验 任 一 项 或 两 项 同时 阳 性 的 3 5株 表 葡 菌 中 i c a A
基 因阳性 2 4株 。结论 : 我 院儿科导 管相关性感 染 中分 离的表 葡 茵具有一定 的生物膜形 成能力 , 须 引起 临床
蔡 桂君 , 林 丽娟 , 方艳 平 , 等. 自制人 巨 细胞病 毒核 酸室 内质 控物 的 重复 性 观察 [ J ] . 临床 检验 杂 志 , 2 0 1 3 , 3 1 ( 9 ) : 7 1 3 —
7 1 4.
黎建安 ,刘紫 菱 ,林珠 ,等 . 保存温 度和保 存时 间对 血清 H C V . R N A定量检 测 结果 的影 响 [ J ] . 实 用 医学杂 志 , 2 0 1 1 ,
中, 男8 7 例, 女5 0 例, 平均年龄 ( 2 . 3±1 . 2 ) 岁。
1 . 2 仪器 与试 剂
1 . 2 . 1 仪器
V I T E K C o m p a c t 2全 自动 细 菌 鉴 定
及 药 敏 分 析 仪 ,法 国 生 物 梅 里 埃 公 司 ; MK 3酶 标 仪 ,上海 热 电公 司 ; V e r i t i 9 6 一 W型P C R仪 ,美 国 A B I公 司 ; 电 泳 仪 , 美 国 B I O — R A D公 司 ; G E L D o c T MX R+ 凝胶成像系统 , 美国B I O — R A D公 司 。 1 . 2 . 2 试 剂 刚 果 红 干 粉 , S i g ma 公 司 :脑 心浸 液 培 养基 , 杭州滨 和 ; 蔗糖及琼脂粉 , 天津大茂 ; 血 平 板, 郑 州 安 图生 物 ; 胰 蛋 白 大 豆 肉汤 ( T S B) , 英 国 O X O I D公 司; 龙胆紫染液 , 珠海贝索 ; 细菌 D N A提
d o i : 1 0 . 3 9 6 9 / j . i s s n . 1 0 0 6 - 5 7 2 5 . 2 0 1 5 . 1 3 . 0 4 4
基金项 目: 深圳 市科技计 划立项项 目( 编号 : 2 0 1 3 0 3 0 6 1 ) 作者单 位 : 5 1 8 0 2 6 广东省深圳 市儿童 医院检验科 ( 吴跃 平 ,
8 2 1 -8 2 4. Xu H , Di B, P a n YX, e t a 1 .S e r o t y p e 1 一 s p e c i ic f mo n o c l o n a l a n t i b o d y-b a s e d a n t i g e n c a p t u r e i mmu n o a s s a y f o r d e t e c t i o n o f c i r c u l a t i n g n o n s t mc t ur a l p r o t e i n NS1: I mp l i c a t i o n s f o r e a r l y
ห้องสมุดไป่ตู้重视 。
关键 词
表皮 葡萄球 菌; 生物 膜 ; 儿科 ; 导 管相关性 感染 ; i c a A
随着各 种侵入 性诊疗 措施 在临床 的应用 , 表
皮葡萄球菌 ( S t a p h y l o c o c c u s e p i d e r mi d i s , S E) 已 成
d i a g n o s i s a n d s e r o t y p i n g o f d e n g u e v i u r s i n f e c t i o n s[ J ] . J C l i n
Mi c r o b i o l ,2 0 0 6 , 4 4 ( 8 ) : 2 8 7 2 — 2 8 7 8 .
1 材 料 与 方 法
1 . 1 菌株 收集 本 院 2 0 1 2年 1 1月 至 2 0 1 4年 1 0 月期 间从 各 类 导 管 分 离 并 鉴 定 为 表 皮 葡 萄球 菌 的
王 红梅 , 肖伟 伟 , 蔡德丰, 马东 礼 ) ; 5 2 3 8 0 8 广 东省 东莞 市 , 广 东
[ J ] . 中华 流 行 病学 杂 志 , 2 0 1 4 , 3 5( 7) :
s e r o t y p i n g o f t h e v i r u s [ J ] .J C l i n Mi c r o b i o l , 2 0 0 7 , 4 5( 3 ) :