人外周血白细胞分离液试剂盒
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
白细胞分离技术汇总
外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液）1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。
（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）2> 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。
3> 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp 管中。
4> 3000r/min离心20 min，弃上清。
即得白细胞可以试试红细胞裂解液提供我的配方：氯化铵82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成1升所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清3.细节：a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操作，切不可混匀d.所有操作都应在无菌环境进行e.把离心管放入离心机是也应小心，不要太大幅度的摇幌离心管，当然离心后拿出来也要小心就这么多了吧，这个操作是不是很难的，比较基本祝您好运了！.参考方法：人外周血, 肝素抗凝(100U öm l) , 等量无血清培养液（或者PBS等缓冲液）稀释。
按1∶2 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 ×g 离心30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。
于无血清培养液, 400×g 离心10 m in, 洗涤2次。
用培养液重新悬浮细胞并计数我也是最近要做所以查了一下，仅供分享，呵呵！一外周血白细胞的分离1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液（（33.9%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：2.4体积比混合））液面上，1500r/min离心20 min。
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理一、前言外周血单个核细胞是指没有细胞核的血细胞，如红细胞、血小板等。
分离外周血单个核细胞是许多实验室和临床诊断中常用的一项操作。
而ficoll分离液则是分离外周血单个核细胞时常用的一种试剂。
本文将详细介绍ficoll分离液的原理及其在分离外周血单个核细胞中的应用。
二、ficoll分离液1. 概述ficoll分离液是由Ficoll（Ficoll-400）和盐水（PBS或Hanks平衡盐溶液）组成的一种密度梯度试剂。
它主要用于体外培养、淋巴细胞和其他白细胞的分离。
2. 原理ficoll分离液利用了不同密度的细胞在密度梯度中沉降速度不同的原理。
在密度梯度中，密度大的物质沉降速度快，而密度小的物质沉降速度慢。
当样品加入到ficoll分离液中时，样品中含有不同密度的各种成分，如红细胞、白细胞、淋巴细胞等。
这些成分会在密度梯度中沉降，最终形成一个由不同密度的层次组成的梯度。
在ficoll分离液中，Ficoll-400的密度大于外周血单个核细胞，但小于红细胞和粒细胞。
当样品经过离心后，外周血单个核细胞会沉降到ficoll分离液中的某一层次中，并被分离出来。
而其他成分则会沉降到不同的层次中。
3. 优点ficoll分离液具有以下优点：（1）样品处理方便：只需要将样品加入到ficoll分离液中进行离心即可。
（2）操作简单：只需要进行一次离心即可将外周血单个核细胞从其他成分中分离出来。
（3）高效：能够快速、高效地将外周血单个核细胞分离出来。
三、操作原理1. 实验材料（1）ficoll分离液；（2）外周血样本；（3）PBS或Hanks平衡盐溶液；（4）15ml或50ml的锥形试管；（5）离心机。
2. 操作步骤（1）将外周血样本加入到15ml或50ml的锥形试管中；（2）加入等体积的PBS或Hanks平衡盐溶液，轻轻混合；（3）将ficoll分离液缓慢加入到试管中，使其与样品充分混合；（4）将试管放入离心机中，以800~1000g的速度离心30分钟；（5）离心后，可以看到样品被分成了不同层次。
白细胞分离技术汇总
外周血白细胞的分离：细胞分离液有市售,有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液1> 取3ml正常人的外周血枸橼酸钠抗凝与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上,1500r/min离心20 min;或先将抗凝血离心,然后吸取中间白细胞层,再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上,离心同上2> 吸取中间云雾状白细胞,加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min;3> 弃上清,加1ml PBS洗涤沉淀后,将细胞悬液转移至管中;4> 3000r/min离心20 min,弃上清;即得白细胞可以试试红细胞裂解液提供我的配方：氯化铵克；重碳酸钾克；克；用三蒸水配成1升所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层,准确说来是4层,最下面是红细胞,上面的一层不应该是稍微混浊的白色,应该也比较透明,这一层上面就是我们需要的薄细胞层,最上面是血清3.细节：a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来,淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液,然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上,一定要缓慢小心操作,切不可混匀d.所有操作都应在无菌环境进行e.把离心管放入离心机是也应小心,不要太大幅度的摇幌离心管,当然离心后拿出来也要小心就这么多了吧,这个操作是不是很难的,比较基本祝您好运了.参考方法：人外周血, 肝素抗凝100U öm l , 等量无血清培养液或者PBS等缓冲液稀释;按1∶2 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 ×g 离心30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞;于无血清培养液, 400×g 离心10 m in, 洗涤2次;用培养液重新悬浮细胞并计数我也是最近要做所以查了一下,仅供分享,呵呵一外周血白细胞的分离1> 取3ml正常人的外周血枸橼酸钠抗凝与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：体积比混合液面上,1500r/min离心20 min;或先将抗凝血离心,然后吸取中间白细胞层,再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上,离心同上2> 吸取中间云雾状白细胞,加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min;3> 弃上清,加1ml PBS洗涤沉淀后,将细胞悬液转移至管中;4> 3000r/min离心20 min,弃上清;即得白细胞二自然沉降法本法是利用血細胞自然沉降率的分離法,採集血液後應及時抗凝,通常選用肝素抗凝法;肝素能阻止凝血酶原轉化為凝血酶,從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固;操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min後,血液分成明顯三層,上層為淡黃色血漿,底層為紅細胞,緊貼紅細胞層上面的灰白層為白細胞,輕輕吸取即得富含白細胞的細胞群,離心洗滌後加入少量蒸餾水或含氯化銨的Gey溶液,經短時間的低滲處理,使紅細胞裂解,經過反復洗滌可得純度較高的白細胞懸液;。
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）的采集、分离和保存是在医学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
PBMCs是一类具有免疫功能的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和浆细胞，能够在机体的免疫应答中发挥重要作用。
为了保证试验结果的准确性和可靠性，对PBMCs的采集、分离和保存必须按照相应的标准进行操作。
一、采集1. 选择合适的采集方法：一般常用的采集方法包括静脉抽血和手指取血等，静脉抽血常用于采集较多血液量的情况，手指取血则适用于采集少量血液的情况。
2. 确保采集操作标准化：在采集PBMCs的过程中，应该遵守严格的消毒和无菌操作规程，以防止细菌和病毒的污染。
3. 采集完整的血液样本：为了确保PBMCs的纯度和稳定性，应该尽量避免气泡和血细胞破损导致的RNA降解等情况。
二、分离1. 使用适当的分离方法：一般常用的PBMCs分离方法包括密度梯度离心和磁珠分选等，密度梯度离心适用于分离较大量的PBMCs，磁珠分选则适用于分离特定类型的细胞。
2. 选择合适的分离液：密度梯度离心中一般使用的分离液包括Ficoll和Percoll等，磁珠分选中则需要选择特定的磁珠标记物。
3. 保证分离效率和纯度：在PBMCs的分离过程中，应该确保细胞的分离效率和纯度，避免细胞的损失和杂质的混入。
三、保存1. 选择合适的保存条件：PBMCs的保存条件包括温度、储存液和容器等要素，应该选择适合PBMCs存活的条件进行保存。
2. 快速冻存PBMCs：为了避免细胞的降解和失活，应该在采集和分离PBMCs后尽快将其冻存。
3. 定期监测保存效果：在存储PBMCs的过程中，应该定期监测PBMCs的存活率和纯度，以确保PBMCs的质量和稳定性。
对于人外周血单个核细胞的采集、分离和保存，在操作的过程中应该严格按照相应的标准进行，以确保PBMCs的质量和稳定性，为后续的研究和临床应用提供可靠的基础。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。
2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。
3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。
4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。
5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。
6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。
7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。
8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。
9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。
10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。
二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。
2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。
3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。
4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。
三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。
3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。
4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。
5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。
6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。
7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。
8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。
四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。
3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。
4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。
总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。
正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。
外周血单个核细胞的分离
外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。
通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。
本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。
方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。
3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。
4.以 400g 的速度离心 40 分钟。
在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。
5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。
6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。
磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。
3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。
4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。
5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。
密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。
这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明货号：P9040规格：2×200mL/kit保存：18℃-25℃保存，有效期两年。
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：试剂A200mL试剂C200mL清洗液（赠品）200mL红细胞裂解液（赠品）100mL说明书1份操作步骤：情况A:血液样本小于5mL时，实验方法如下：1.取一支15mL离心管，先加入3mL试剂A后加入2mL试剂C，制成梯度界面。
2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面之上，400-500g，离心20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。
）3.离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层为单个核细胞，下层细胞为中性粒细胞。
4.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量的红细胞裂解液，将红细胞裂解，即得目的细胞。
5.将获得的细胞层移至另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL清洗液，混匀细胞。
6.250g，离心10min。
7.弃上清。
8.用5mL清洗液重悬所得细胞。
9.250g，离心10min。
10.重复7、8、9，弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B:血液样本大于等于5mL时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A、试剂C（试剂A与试剂C体积比为3:2，试剂总量与稀释后的样本量相等），制成梯度界面。
2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（最大离心力可至1000g），离心20-30min。
（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需要客户自己摸索，以达到最佳分离效果。
加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。
该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。
一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。
离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。
细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。
辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。
脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。
二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。
同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。
2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。
置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。
3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。
倒掉上清液，留下沉淀。
重复该步骤2-3次。
洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。
离心1000r/min 20分钟。
此步骤可以使淋巴细胞充分分离。
4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。
然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。
人外周血Treg、Th17细胞检测方案
人外周血Treg/Th17检测标准流程1.材料1.1组织外周血。
1.2实验仪器名称厂家型号超净工作台-微量移液器-水套式CO2细胞培养箱-Forma II 水平低速离心机-Centrifuge 5810 R流式细胞仪-LSRFortessa1.3主要实验试剂及耗材名称品牌货号规格淋巴细胞分离液达科为DKW33-R0100 100mL Cell Activation Cocktail（with Brefeldin A）Biolegend 423303 100 ul RPMI 1640 培养基，含L-谷氨酰胺basalmedia L210KJ 500mL 胎牛血清FBS Serana S-FBS-EU-0100mL 磷酸盐缓冲液（PBS），pH7.2 basalmedia B310KJ 500ml FITC anti-human CD3 Biolegend 300305 25testsPE anti-human CD25 Biolegend 302605 25testsAPC anti-human CD4 Biolegend 317415 25testsBV421 anti-human Foxp3 Biolegend 320123 25testsPE-Cy7 anti-human IL-17A Biolegend 512315 25tests Zombie Aqua Fixable Viability kit Biolegend 423101 100tests Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set Kit MultiSciences IC001 100tests 3mL巴氏吸管Biosharp BS-XG-03 100支/盒15mL螺口尖底无菌离心管LABSEE LN-M151 100只/包50mL螺口尖底无菌离心管LABSEE LN-M501 50只/包24孔细胞培养板Nest 702011 1块/包2.方法2.1外周血准备EDTA-K2抗凝外周血2~4mL。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明货号:P8670规格：200ml/kit保存：18℃-25℃避光保存，有效期两年。
启封后置4℃保存，有效期一周。
一、分离方法说明及图例A．取1ml新鲜抗凝血，与全血及组织稀释液1:1混匀后小心加于1份本分离液之液面上；B.以500g（约1800转/分）离心25分钟(半径15cm水平转子)。
此时离心管中由上至下细胞分四层。
第一层；为血浆层。
第二层；为环状乳白色的白细胞层。
第三层；为略带混浊的分离液层（富集一定量的白细胞）。
第四层；为红细胞层。
弃去第一层血浆层，收集第二层细胞、第三层分离液层和第四层红细胞层，放入含细胞洗涤液10ml的试管中，充分混匀后，以500g 约（1800转/分）离心30分钟。
沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液裂解红细胞，再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需白细胞。
注：提取率约为80%。
二、红细胞裂解液使用说明红细胞裂解液用于从血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
不适用于禽类等有细胞核红细胞的裂解。
本裂解液经过无菌处理，分离的细胞可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
使用说明：A.对于组织细胞样品：a.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
b.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。
c.400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
e.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
人类外周血实验报告
一、实验背景外周血是人体循环系统中的一部分，包含了各种类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板等。
其中，白细胞（白细胞）是免疫系统的重要组成部分，对于人体的健康和防御疾病具有至关重要的作用。
因此，对外周血的研究对于医学、生物学等领域具有重要意义。
本实验旨在探讨外周血中白细胞的分离、培养和检测方法，以期为相关研究提供参考。
二、实验目的1. 熟悉外周血白细胞的分离、培养和检测方法；2. 掌握外周血白细胞的形态学观察；3. 了解外周血白细胞在疾病诊断和预防中的作用。
三、实验材料1. 试剂：肝素钠、红细胞裂解液、RPMI 1640培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、秋水仙素、甲醇、冰乙酸等；2. 仪器：离心机、显微镜、培养箱、超净工作台、注射器、培养瓶、刻度吸管、离心管、吸管、量筒、载玻片等；3. 样本：健康人外周血。
四、实验方法1. 外周血白细胞的分离（1）采集外周血：用肝素钠抗凝，采集适量静脉血；（2）红细胞裂解：将采集的血液加入红细胞裂解液，室温下放置5-10分钟；（3）离心：以1500r/min离心5分钟，弃去上清液；（4）重悬：将沉淀细胞用RPMI 1640培养基重悬，调整细胞浓度为1×10^6/ml。
2. 外周血白细胞的培养（1）细胞接种：将分离得到的外周血白细胞接种于培养瓶中，每瓶接种1×10^6个细胞；（2）细胞培养：将培养瓶放入培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养72小时；（3）细胞传代：待细胞生长至80%以上时，进行细胞传代。
3. 外周血白细胞的检测（1）形态学观察：用显微镜观察白细胞形态，包括细胞大小、形状、核质比等；（2）细胞计数：用血细胞分析仪进行白细胞计数；（3）细胞因子检测：采用ELISA法检测白细胞分泌的细胞因子，如IL-2、TNF-α等。
五、实验结果1. 外周血白细胞分离：成功分离出外周血白细胞，细胞形态完整，无明显污染；2. 外周血白细胞培养：细胞生长良好，传代顺利；3. 外周血白细胞检测：形态学观察显示白细胞形态正常，细胞计数符合预期，细胞因子检测结果显示IL-2、TNF-α等细胞因子分泌水平正常。
人淋巴细胞分离液
人淋巴细胞分离液说明书修订日期：2018.12.10 Cat number：KGA830Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、试剂盒说明人淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，本品为带有乳光或微乳光的注射水溶液，主要组成成份是羟乙基淀粉（6%）与泛影酸钠9%，适用于从血液或组织匀浆中中分离所需细胞。
单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和白细胞等细胞密度较大，为1.090 g/ml 左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090 g/ml，血小板为1.030～1.035 g/ml。
经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
二、试剂盒组份组份Cat: KGA830 保存条件人淋巴细胞分离液200ml 2-8℃，12months三、试剂盒以外自备仪器和试剂注射用生理盐水、离心机四、使用注意事项1. 启封后应置4℃保存，有效期6个月。
2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，混匀后使用。
3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃，否则会影响分离质量。
五、操作方法本分离液要求血液为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
1. 取新鲜抗凝血1ml，与注射用生理盐水1：1混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以400-800×g离心（半径15cm水平转子）20-30分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层（第一层为血浆层（含血小板），第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞），红细胞层表面有悬起的部分白细胞层，收集此界面上的细胞）2. 用吸管小心收集第二层淋巴细胞，放入含4-5毫升注射用生理盐水的试管中，充分混匀后，以500×g离心20分钟，弃上清，沉淀经反复洗2次即得所需细胞。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP)
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP) （血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)）1实验原理本法采用血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)，从全血中分离白膜层，去除其中的红细胞及蛋白质，裂解白细胞释放DNA，再通过去除DNA中的杂质使其纯化，得到高纯度的DNA原液，最后使用微量紫外可见分光光度计对DNA 的浓度及纯度进行定量检测。
2实验仪器2.1 1.5ml EP管2.2微量移液器，10μL、50μL、200μL、1000μL2.3涡旋振荡器2.4数显恒温搅拌循环水箱2.5吸附柱CB32.6收集管2.7离心机2.8涡旋振荡器2.9微量紫外可见分光光度计（Thermo NanoDrop1000）3实验试剂3.1正常人混合血液，应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3.2红细胞裂解液（裂解红细胞）3.3缓冲液GA（轻微裂解作用，为蛋白激酶K提供反应环境），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.4蛋白激酶K（裂解蛋白质）3.5缓冲液GB（裂解白细胞，释放DNA），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.6无水乙醇（沉淀DNA，去除杂质）3.7缓冲液GD（去除蛋白质），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.8缓冲液PW（去除盐），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.9洗脱缓冲液TE（保存DNA）4实验步骤4.1样品的采集与保存：用装有EDTA的塑料管采集2mL静脉血，2000rpm离心5min，可见分层，分别为血浆层、白膜层、红细胞，将血浆吸出弃去，再通过点吸的方式将白膜层全部吸出，置于干净的1.5mL EP管备用。
如无法及时提取DNA，则应置于-80℃进行保存。
4.2样品预处理：4.2.1裂解红细胞：通过低速涡旋15s混匀样品，取150μL样品置于干净的1.5mL EP管，加入750μL红细胞裂解液，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀5min，然后10000rpm离心2min，吸去上清，留下白细胞沉淀。
人外周血淋巴细胞分离管说明书
人外周血淋巴细胞分离管说明书【产品名称】产品名称：人外周血淋巴细胞分离管英文名称：Lymphocyte Separation Tube for Human Peripheral Blood【包装规格】货号产品描述规格7922112筛板分离管，单支规格为15ml20支/盒7922021筛板分离管，单支规格为50ml25支/盒【预期用途】用于从人外周抗凝全血中分离淋巴细胞。
【检测原理】本品采用密度梯度沉降法，根据细胞密度差异，借助分离液和离心，进行细胞分离纯化。
细胞梯度密度分离液产生一定程度的密度梯度，将抗凝全血倒入分离管。
离心后，红细胞、粒细胞沉于管底；PBMC（单个核细胞，包括淋巴细胞和单核细胞等）漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。
吸取分离液液面的细胞，就可从外周血中分离到淋巴细胞。
【检验方法】1.检查。
如图（A）所示。
取出分离管，观察筛板材料之上是否有游离的分离液，筛板下方是否有气泡。
如果有，请用离心机20℃，800g，离心1min。
2.倒入血液。
血液样品必须为抗凝全血，无需稀释。
如图（B）所示。
3.离心。
20℃，800g，15min。
设置较慢的加速与减速（如果共有十档且第十档为最高档，加速与减速应该调整到第三档）。
4.将部分血浆吸出后，直接将筛板上方剩余的少量血浆、PBMC细胞层和少量分离液直接倒入干净的离心管中。
如图（C）所示，PBMC层在血浆下面，分离液上面。
5.RPMI1640洗涤1-2次（20℃，250g，10min）。
用0.9%(W/V)生理盐水或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。
人外周血淋巴细胞分离管分离血液的过程【主要组成成分】本品为筛板管，主要组成成分是聚蔗糖、泛影酸及PP或PE材质筛板。
【储存条件及有效期】未开封2~30℃避光保存，有效期为2年。
【适用仪器】水平转子离心机。
【样本要求】本品要求样本为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程SOP
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程SOP1. 目的本操作规程旨在提供人外周血白细胞DNA提取的标准化操作流程，以确保提取的DNA质量和纯度满足研究和分析的需求。
2. 适用范围本操作规程适用于实验室中进行人外周血白细胞DNA提取的操作。
3. 材料和试剂3.1 废弃针头、注射器、离心管等；3.2 PBS缓冲液；3.3 红细胞裂解缓冲液；3.4 DNA提取试剂盒（根据实验室情况自行选择或可商用）；3.5 无菌去离子水；3.6 乙醇（95%和75%）；3.7 氯仿。
4. 设备4.1 基础实验室设备，例如离心机、恒温摇床、移液器等；4.2 电子天平；4.3 水浴加热器；4.4 倒置显微镜。
5. 操作步骤5.1 准备工作5.1.1 将离心管标记为样品编号，记录于实验记录表中；5.1.2 准备所需材料和试剂。
5.2 样本处理5.2.1 用注射器将2 ml新鲜外周血加入1 ml的PBS缓冲液中；5.2.2 缓慢加入红细胞裂解缓冲液，使比例为1:9，充分混匀；5.2.3 静置5分钟，离心3000 rpm，室温5分钟；5.2.4 倒出上清液，不移动沉淀。
5.3 DNA提取5.3.1 加入适量去离子水彻底悬浮沉淀，充分混匀；5.3.2 加入适量DNA提取试剂，按厂家说明书操作；5.3.3 用水浴加热器进行DNA裂解，按厂家说明书操作；5.3.4 离心，去除上清液；5.3.5 加入乙醇进行洗涤，按厂家说明书操作；5.3.6 离心，去除上清液；5.3.7 加入75%乙醇进行二次洗涤，按厂家说明书操作；5.3.8 用水浴加热器或空气干燥仪将离心管干燥。
6. 质量控制6.1 使用电子天平将提取的DNA称重，记录于实验记录表中；6.2 使用比色计或其他适当的方法检测DNA浓度和纯度，记录于实验记录表中；6.3 使用凝胶电泳方法检测DNA的完整性。
7. 结果记录将实验记录、样本编号、DNA提取量、浓度和纯度等结果记录在实验记录表中，确保准确性和可追溯性。
人外周血血小板分离液试剂盒使用说明
人外周血血小板分离液试剂盒使用说明货号:P6390产品组成：名称规格外周血血小板分离液200ml样本稀释液200ml清洗液(细胞洗涤液)200ml保存：18℃-25℃避光保存，有效期两年。
产品简介：人外周血血小板分离液试剂盒为Ficoll、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。
抗凝外周血可在分离液中分层。
离心时，在Ficoll、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降，处于分离液下层。
而血小板由于密度小位于最上层。
人外周血血小板分离液试剂盒适用于从动物抗凝血中分离血小板。
本品仅供科研使用。
注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
为获得最佳的实验结果，最好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。
血液放置超过6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.吸取过多的血小板血浆层下层溶液会导致交界处单个核细胞混杂。
4.分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。
方法一：1.在15ml离心管中，首先取抗凝血加于分离液之液面上（抗凝血与分离液最佳比例1：2），250-300g，离心15min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
2.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血小板血浆层。
第二层为环状乳白色细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
3.用吸管小心吸取第一层血小板血浆层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入同体积样本稀释液，混匀血小板（如需获得的富集血小板血浆则不需加入稀释液，直接取血浆层即得）。
4.500g，离心20min，离心后弃上清。
5.向含有血小板沉淀的离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118）混匀，离心450g，15min，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬目的细胞。
人外周血白细胞分离液试剂盒
人外周血白细胞分离液试剂盒规格：200mL/kit保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。
无菌开封后，保存于室温。
试剂盒组成：各种动物外周血白细胞分离液200mL 细胞洗涤液200mL 红细胞裂解液100mL操作步骤：1.取新鲜抗凝全血（EDTA 、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液。
2.在离心管中加入适量分离液（血液体积小于5mL 时，加入5mL 分离液；大于等于5mL ，加入等体积分离液。
但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。
如果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。
）3.室温，水平转子500~1000g ，离心20~30min （血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g ）。
4.离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层；血浆与分离液之间是淋巴细胞层；分离液中为粒细胞层（个体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可能分离不明显）；最下层为红细胞层。
5.小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL 洁净的离心管中，10mL PBS 或细胞洗涤液洗涤细胞。
250g ，离心10min （如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液）6.弃上清，5mL 的PBS 或细胞清洗液重悬细胞，250g ，离心10min 。
7.重复步骤68.弃上清，细胞重悬备用。
注意事项：A.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
B.分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。
4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2h 以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
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人外周血白细胞分离液试剂盒
规格：200mL/kit
保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。
无菌开封后，保存于室温。
试剂盒组成：
各种动物外周血白细胞分离液
200mL 细胞洗涤液
200mL 红细胞裂解液100mL
操作步骤：
1.取新鲜抗凝全血（EDTA 、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液。
2.在离心管中加入适量分离液（血液体积小于5mL 时，加入5mL 分离液；大于等于5mL ，加入等体积分离液。
但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
（可以使用巴氏德吸管
吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差
异，将形成明显的分层界面。
如果样品较多，加样的时间较长，在
离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。
）
3.室温，水平转子500~1000g ，离心20~30min （血液的体积越大所
需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转
速最大不超过1200g ）。
4.离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层；血浆与分离
液之间是淋巴细胞层；分离液中为粒细胞层（个体差异或者是分离
条件不同，粒细胞层可能分离不明显）；最下层为红细胞层。
5.小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL 洁净的离心管
中，10mL PBS 或细胞洗涤液洗涤细胞。
250g ，离心10min （如有红
细胞混杂则加入适量红细胞裂解液）
6.弃上清，5mL 的PBS 或细胞清洗液重悬细胞，250g ，离心10min 。
7.重复步骤6
8.弃上清，细胞重悬备用。
注意事项：
A.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。
B.分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。
4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2h 以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
D.血液样本不需稀释，直接进行分离即可。
E.稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca 、Mg 离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，分离示意图
血浆层红细胞层淋巴细胞粒细胞分离液层
大大降低细胞得率及纯度。
F.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
G.血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。
H.如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。
I.不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。