人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP)
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）外周⾎培养及染⾊体的识别 (2)⽩⾎病⾻髓及外周⾎染⾊体 (7)外周⾎细胞脆性位点检测技术 (9)⼈⽺⽔细胞培养收获操作程序 (11)绒⽑细胞培养和染⾊体分析 (13)⾼分辨染⾊体操作⽅法和识别 (15)GII式显带法 (21)N式显带法 (21)R(反式)显带法 (23)姐妹染⾊单体互换（SCE）技术 (23)荧光原位杂交操作程序 (25)附:细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程（SOP） (27)天平称量操作规程 (27)药匙处理操作规程 (27)PBS配制规程 (28)胰酶配制规程 (28)培养基配制规程 (29)1N HCL配制规程 (29)1N N A OH配制规程 (29)外周⾎培养及染⾊体的识别1. 原理：外周⾎中的淋巴细胞⼏乎都是处在G0期或G1期，⼀般情况下是不分裂的。
当在培养基中加⼊植物⾎凝素（Phytohaemagglutinin PHA）时，这种⼩淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进⾏有丝分裂。
经过短期培养后，⽤秋⽔仙素处理就可获得⼤量中期分裂相的细胞，制⽚后可以清楚地对染⾊体进⾏观察与分析。
2. 外周⾎培养与收获操作步骤：2.1 采⾎：⽤20:1肝素（0.4%）温润⽆菌注射器抽取外周⾎5ml（注意：消毒时需脱碘）。
2.2. 种⾎：将注射器搓捏，使⾎样混匀，在⽆菌条件下，⽤7号针头垂直种⾎0.3ml±抗凝⾎（成年男⼦28滴，成年⼥⼦30滴左右，⼉童32滴）⾄外周⾎培养基内。
2.3. 培养：将培养瓶放⼊37℃恒温箱中培养68-72⼩时，注意第⼆观察培养液有⽆凝⾎、溶⾎或长菌的现象，可每天培养液摇⼀摇，以便细胞可获得充分的营养，但⼀般情况下可不摇。
2.4. 制⽚过程：2.4.1. 加秋⽔仙素：在培养完成前2-3⼩时，加⼊浓度为20ug/ml的秋⽔仙素2-3滴（7号针头竖滴）后，继续培养2-3⼩时。
血液基因组DNA提取标准操作规程
1目的：规范血液基因组DNA提取的操作。
2适用范围：血液基因组DNA提取。
3职责：技术员4内容/程序：4.1仪器及耗材4.1.1 1.5ml、2ml灭菌离心管4.1.21ml、200ul灭菌枪头4.1.3Karroten TM Mini Column柱4.1.4手动移液器4.1.5金属浴4.1.6高速离心机4.2试剂4.2.1Buffer KB平衡液、Buffer KBL14.2.2Buffer KW4.2.370% 乙醇4.2.4KE4.3提取前准备4.3.1详细阅读该SOP熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分及温浴条件4.3.2KBL1在低温时可能产生混浊或沉淀，在37-65℃温浴片刻即可4.3.3Buffer KW第一次使用前请按瓶上标签加入50ml70%乙醇，每次使用后，请立即拧紧盖子4.4操作步骤4.4.1取一Karroten TM Mini Column柱装在一个2ml收集管上（已备）。
加入300ulBuffer KB平衡液至柱子内，室温13000rpm离心1min，使平衡液完全流过柱子。
弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内；注意：柱子不平衡，将导致DNA产率的减少。
4.4.2按200ul全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入1000ulKBL1的比例加入KBL1，混匀，静臵3min。
如果样品是血清等无细胞体液。
应按比例增加体积。
注意：1）.静止时间超过3min不影响DNA抽提2）.取样最佳体积因物种不同有所差异。
人血以100-300ul为最佳，小鼠以50-100ul为最佳。
且当全血体积小于200ul时，KBL1体积不能小于1000ul 4.4.3将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温13000rpm离心30s，使裂解液完全流过柱子。
保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管；注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过700ul。
4.4.4加入700ul Buffer KW，室温13000rpm离心30s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。
2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。
3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。
4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。
5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。
6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。
7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。
8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。
9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。
10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。
二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。
2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。
3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。
4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。
三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。
3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。
4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。
5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。
6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。
7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。
8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。
四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。
3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。
4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。
总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。
正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。
DNA提取-SOP
全血DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取应在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪四．样本要求1．1 mL EDTA抗凝外周血，采集后轻轻混匀。
样本应尽快送检，保存运输温度为2-8 ℃。
建议2-8℃保存不超过24小时；-20 ℃保存不超过1个月；-70 ℃保存不超过2个月。
避免反复冻融（仅限1次）；如长期保存，建议提取样本DNA后-80 ℃保存。
2.样本中存在的干扰物质在一定范围内不影响检测，当干扰物质超出以下范围时不能保证检测结果的准确性：胆红素480 μmol/L，甘油三酯30 mmol/L，血红蛋白≤600 g/L，抗凝剂浓度0.1875-3 mg/mL。
五．核酸提取操作步骤：1.采集EDTA抗凝全血2.取200 μL EDTA抗凝血至1.5 mL新的无菌EP管中。
3.加入600 μL双蒸水，漩涡振荡混匀，室温放置10 min，期间漩涡振荡混匀2-3次，12000 rpm离心5 min，弃上清。
4.加入200 μL DNA提取液（使用前充分混匀，使颗粒悬浮），100 ℃水浴8 min。
5.12000 rpm离心5 min，取上清用于检测。
血片DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL 无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪；打孔器四．样本要求1.每个样本至少3个血斑，且每个血斑直径大于8 mm。
2.血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致。
亲子鉴定DNA提取标准操作规程
DNA提取标准操作规程1. 目的：规范不同检材的DNA提取操作程序，确保DNA质量，保证STR分型结果准确性。
2. 原理：Chelex-100 是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。
在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA 分离。
磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。
反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。
3. 操作者：具有法医物证检验资格的广西区妇幼司法鉴定所技术人员。
4. 标本：5％EDTA抗凝全血、8-10ml胎儿羊水、5％EDTA抗凝脐血、FTA纸血斑、口腔拭子、5-10根带毛囊的毛发、绒毛细胞。
5 试剂：5.1 试剂的厂家及规格：5.1.1 DNA抽提试剂 Chelex-100 伯乐公司（Bio-Rad Laboratories, Inc. CA U.S.A）。
5.1.2 DNA抽提试剂 Promega PP18或PP21 DNA System抽提试剂盒。
5.1.3 DNA抽提试剂口腔棉签制备基因组DNA试剂盒（G&T，U.S.A）5.1.4 无水乙醇分析纯5.1.5 异丙醇分析纯5.1.6 无菌的超纯水由实验室技术人员制备。
5.2 试剂的配制：5.2.1 5％Chelex-100的配制：称取5克粉状Chelex-100于试剂瓶中，加入灭过菌的超纯水至100ml。
5.2.2 灭菌超纯水的制备：用干净的试剂瓶装超纯水1升左右，经121℃灭菌30分。
6 仪器及设备：6.1 生物安全柜。
6.2 高速离心机。
6.3 超速冷冻离心机。
标准操作规程(SOP)——外周血单个核细胞分离
一、目的外周血单个核细胞主要由单核细胞和淋巴细胞组成，是机体重要的免疫细胞，外周血单个核细胞的分离是免疫学研究的最基础实验方法之一。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行外周血单个核细胞的分离操作。
三、定义指从全血中分离外周血单个核细胞（PBMC, Peripheral Blood Monouclear Cells ）相关实验技术的操作。
四、程序（一）生物安全要求疑似人禽流感病例、急性期人禽流感病例在BSL-3实验室进行。
普通流感病例在BSL-2实验室进行。
正常健康对照血样可在BSL-2实验室进行。
（二）材料1．R0：无菌RPMI 1640培养液：500mL RPMI 16405mL 青链霉素（10000U/mL ）2．R2：含2％胎牛血清无菌RPMI 1640培养液：500mL RPMI 16405mL 青链霉素（10000U/mL ）10mL 胎牛血清3．R10：含10％胎牛血清无菌RPMI 1640培养液：标准操作规程（SOP ）——细胞分离500mL RPMI 16405mL 青链霉素（10000U/mL）50mL 胎牛血清4．R20：含20％胎牛血清无菌RPMI 1640培养液：500mL RPMI 16405mL L-谷氨酰氨5mL 青链霉素（10000U/mL）100mL 胎牛血清5．PBS（pH7.4）NaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15gKH2PO4 0.2gdH2O 定容至1000mL6．50mL或15mL无菌离心管，加入无菌淋巴细胞分离液后作为分血管。
（根据采血量，10mL血以下可用15mL离心管）7．淋巴细胞分离液：室温避光保存8．胎牛血清（FBS）9．二甲基亚砜（DMSO）：无菌，室温避光保存10．5mL，10mL，25mL移液管，3mL巴斯德吸管11．2 mL细胞冻存管12．无菌Tip头13．低速离心机（三）实验步骤本操作为传统方法，采用新式分血管，可相应简化操作。
外周血DNA提取技术
1.标本预处理：将1ml EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500g离心15min,倾去含裂解红细胞上清。
重复一次。
用0.7ml DNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。
2. 消化：上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K 0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。
50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。
保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。
3. 酚抽提纯化DNA：上述反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。
5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。
重复酚抽提一次。
加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。
重复一次。
4. 加入1/5体积的3mol/L NaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。
用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5 ml离心管中，加70%乙醇0.2ml，5000g离心5min洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。
重复一次。
室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。
加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24小时。
5. DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE液作空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。
按下面公式计算浓度： DNA浓度(ug/ul)= A260*50*稀释倍数/1000DNA纯度的判定： A260/A280 比值应介于1.7-2.0之间。
chelex-100法我们实验室是法医学部级重点实验室，平时检案用的都是chelex-100法提取DNA,具体操作如下：1。
DNA抽提的操作步骤
DNA抽提的操作步骤DNA抽提的操作步骤试剂准备：蛋白酶K、白细胞裂解液、苯酚、氯仿、无水乙醇、70%乙醇1.从冰箱取出冰冻的白细胞，将编号和姓名写在登记本上。
待白细胞融化后，向管内加入5ml白细胞裂解液和50ul蛋白酶K（20mg/ml）。
将管内液体摇匀，或者借助移液枪反复吹打混匀。
然后将管子放入60℃水浴锅内，过夜（可以根据孵育的时间长短适当调整温度）。
在水浴的过程中，每隔2-3小时将试管震荡摇匀一次。
2.把水浴锅内的试管取出，将其中的液体转移到15ml试管内（15ml的试管事先做好标记），并依次向试管内加入等体积（即5ml）的酚-氯仿，然后将盖子拧紧。
轻轻上下颠倒混匀（20次左右），然后离心3000rpm，15min。
离心时将离心机的温度调至室温，温度过低会导致有机溶剂凝固。
离心结束后，可以看到试管内的液体分为三层，上层为水相，中间为变性的蛋白质，下层为有机溶剂（酚氯仿）。
3.然后用钝口Tip吸出上层水相转移到干净的试管中（注意：将1ml的Tip尖端减去2-3mm即可得到钝口的Tip，在吸取上层水相的过程中要尽量避免混入蛋白相，动作要缓慢）多分几次转移），然后再加入等体积的酚氯仿，拧紧盖子，颠倒混匀，离心3000rpm，10min。
4.再次用钝口Tip把上层水相转移到干净的试管中，然后向试管内加入2倍体×2），拧紧盖子，缓慢颠倒，积的无水乙醇（无水乙醇的体积=V 所吸出的上清的体积即可看到絮状的DNA沉淀析出。
（如果抽提的数量较少，可以将管子放到Cold Room，等数量多了再一起进行下面的操作）5.用黄色Tip把白色絮状的DNA沉淀挑出来，放到70%乙醇（预先准备0.5ml的小管子，加入400ul70%的无水乙醇，洗涤用）中洗涤，重复两次。
6.最后用黄色Tip将DNA沉淀挑出，将DNA连同枪头一同打到1.5mlEP管中。
敞开盖子，室温放置直到乙醇完全挥发，向EP管内加入400ulTE，用Tip头反复吹打，使DNA完全溶于TE，得到DNA溶液。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP)
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP) （血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)）1实验原理本法采用血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)，从全血中分离白膜层，去除其中的红细胞及蛋白质，裂解白细胞释放DNA，再通过去除DNA中的杂质使其纯化，得到高纯度的DNA原液，最后使用微量紫外可见分光光度计对DNA 的浓度及纯度进行定量检测。
2实验仪器2.1 1.5ml EP管2.2微量移液器，10μL、50μL、200μL、1000μL2.3涡旋振荡器2.4数显恒温搅拌循环水箱2.5吸附柱CB32.6收集管2.7离心机2.8涡旋振荡器2.9微量紫外可见分光光度计（Thermo NanoDrop1000）3实验试剂3.1正常人混合血液，应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3.2红细胞裂解液（裂解红细胞）3.3缓冲液GA（轻微裂解作用，为蛋白激酶K提供反应环境），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.4蛋白激酶K（裂解蛋白质）3.5缓冲液GB（裂解白细胞，释放DNA），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.6无水乙醇（沉淀DNA，去除杂质）3.7缓冲液GD（去除蛋白质），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.8缓冲液PW（去除盐），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.9洗脱缓冲液TE（保存DNA）4实验步骤4.1样品的采集与保存：用装有EDTA的塑料管采集2mL静脉血，2000rpm离心5min，可见分层，分别为血浆层、白膜层、红细胞，将血浆吸出弃去，再通过点吸的方式将白膜层全部吸出，置于干净的1.5mL EP管备用。
如无法及时提取DNA，则应置于-80℃进行保存。
4.2样品预处理：4.2.1裂解红细胞：通过低速涡旋15s混匀样品，取150μL样品置于干净的1.5mL EP管，加入750μL红细胞裂解液，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀5min，然后10000rpm离心2min，吸去上清，留下白细胞沉淀。
外周血DNA抽提(酚-氯仿法)
外周血DNA抽提（酚－氯仿法）实验前准备：1、融化冻存的血2、调水浴锅至56℃。
操作步骤：新鲜血液1、全血离心1300g,15min(或静置)2、吸上层白细胞到1.5ml离心管中3、加灭菌过的纯水至1.5ml刻度，离心,4℃，4000g，15min4、去上层血清，加无菌水1ml溶血5、离心4℃，3500g，10min去上清，反复洗血3次。
6、加TES 720ul，RNaseA 5微升，37℃或室温静置20min（消化RNA）。
7、PK（10mg/ml）15ul,56℃消化3-4小时或过夜，直至没有肉眼可见的悬浮物。
……后续操作从冻存血液操作步骤第5步开始。
冻存血液1．冻存血室温溶解，取1ml转移至1.5ml离心管。
2. 离心：室温，3500g，15分钟，弃上清，约残留30至50微升。
注意：冻存血融化后会溶血，离心后白细胞沉至管底，呈粘稠的团状，棕红色，与上清的颜色接近，不易分辨，吸除上清的时候动作要缓慢，注意不要吸走白细胞沉淀。
3. 加TES 635微升，RNaseA 5微升，37摄氏度或室温静置20min（消化RNA）。
4. 加PK（10mg/ml）100微升，温和地翻转8次混匀，56度温育过夜（直至没有肉眼可见的悬浮物），不时翻转混匀。
5. 加入等体积（740微升）酚,翻转10分钟混匀。
6. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相640微升。
7. 加入等体积（640微升）酚, 翻转10分钟混匀。
8. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相520微升。
9. 加入等体积（520微升）酚-氯仿-异戊醇, 翻转10分钟混匀。
10. 离心：17000g, 15分钟,吸取上层水相400微升。
11. 加入3M 乙酸钠（pH5.2）40微升（1/10体积），加入880微升（两倍体积）-20℃预冷的无水乙醇 ,翻转20次混匀，会出现白色絮状DNA沉淀。
12. 15000g, 4 ℃ 10分钟,小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液。
(1)外周全血或组织液DNA提取标准操作规程
外周全血或组织液DNA提取标准操作规程文件编号：版次：编制：审核：批准：实施日期：文件更改记录版次号修改页码修改后页数更改内容提要日期1.目的制定DNA提取标准操作规程，使尽可能多的提取到外周全血或组织液的DNA。
2.适用范围实验过程中需要提取DNA的全血或组织液样本。
3.责任分子技术员应严格按照此规程操作。
4. 操作规程41 准备工作4.1.1 紫外杀菌：打开超净工作台内的紫外灯，杀菌30 min，关闭紫外灯，打开风机，通风10 min。
4.1.2实验前准备：通风结束后，根据《实验室安全防护规程》中的相关规定，换好洁净服、洁净帽、防护镜等进入实验室；将水浴或金属浴打开至56℃；4.1.3准备物品：准备1.5 ml的低吸附EP管，96孔双面板，1000μl、200μl、1盒10 μl枪头，磁力架，DNeasy Blood & Tissue Kit试剂盒。
4.1.4 试剂准备：准备无水乙醇；从-20°C冰箱中取出适量预先分装好的Proteinase K于室温溶解；若AL buffer有沉淀，加热至56℃溶解；若试剂不足按以下进行配制：AW1 Buffer配制：Buffer AW1 中加入130 ml无水乙醇，充分混匀，即可使用。
AW2 Buffer配制：Buffer AW2中加入160ml无水乙醇，充分混匀，即可使用。
Proteinase K处理：Proteinase K预先在超净台中分装成小管备用。
分装后的于-20°C保存，避免反复冻融。
4.1.5 准备样品：样品平衡至室温，15-25℃。
4.2 DNA提取流程4.2.1将水浴或金属浴打开至56℃。
4.2.2取出与样品数同样数量的1.5ml EP管，编好1、2、3….标号。
4.2.3加入蛋白酶K：加入20μL QIAGEN Protease（或proteinase K）至管底。
4.2.4加入全血样品：加入200μL全血样本到上述离心管中。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程SOP
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程SOP1. 目的本操作规程旨在提供人外周血白细胞DNA提取的标准化操作流程，以确保提取的DNA质量和纯度满足研究和分析的需求。
2. 适用范围本操作规程适用于实验室中进行人外周血白细胞DNA提取的操作。
3. 材料和试剂3.1 废弃针头、注射器、离心管等；3.2 PBS缓冲液；3.3 红细胞裂解缓冲液；3.4 DNA提取试剂盒（根据实验室情况自行选择或可商用）；3.5 无菌去离子水；3.6 乙醇（95%和75%）；3.7 氯仿。
4. 设备4.1 基础实验室设备，例如离心机、恒温摇床、移液器等；4.2 电子天平；4.3 水浴加热器；4.4 倒置显微镜。
5. 操作步骤5.1 准备工作5.1.1 将离心管标记为样品编号，记录于实验记录表中；5.1.2 准备所需材料和试剂。
5.2 样本处理5.2.1 用注射器将2 ml新鲜外周血加入1 ml的PBS缓冲液中；5.2.2 缓慢加入红细胞裂解缓冲液，使比例为1:9，充分混匀；5.2.3 静置5分钟，离心3000 rpm，室温5分钟；5.2.4 倒出上清液，不移动沉淀。
5.3 DNA提取5.3.1 加入适量去离子水彻底悬浮沉淀，充分混匀；5.3.2 加入适量DNA提取试剂，按厂家说明书操作；5.3.3 用水浴加热器进行DNA裂解，按厂家说明书操作；5.3.4 离心，去除上清液；5.3.5 加入乙醇进行洗涤，按厂家说明书操作；5.3.6 离心，去除上清液；5.3.7 加入75%乙醇进行二次洗涤，按厂家说明书操作；5.3.8 用水浴加热器或空气干燥仪将离心管干燥。
6. 质量控制6.1 使用电子天平将提取的DNA称重，记录于实验记录表中；6.2 使用比色计或其他适当的方法检测DNA浓度和纯度，记录于实验记录表中；6.3 使用凝胶电泳方法检测DNA的完整性。
7. 结果记录将实验记录、样本编号、DNA提取量、浓度和纯度等结果记录在实验记录表中，确保准确性和可追溯性。
外周血采集白细胞标准
外周血采集白细胞标准外周血采集白细胞标准是指在医学诊断过程中，通过针对患者的外周血样本采集一定数量并检测其中的白细胞数量，从而帮助医生评估患者的健康状况。
白细胞是一种重要的免疫细胞，它们能够识别和消灭入侵的病原体，维持机体的免疫功能。
因此，外周血中白细胞的数量对于诊断疾病、评估免疫状态及监测疾病进展具有重要意义。
外周血采集白细胞的标准主要包括以下几个方面：1. 采集方法：外周血采集一般采用负压采集法或抽血法。
负压采集法是通过使用带有鞘管的采血针，将血液通过真空管吸入，以保持血液细胞完整和纯净。
抽血法则是通过使用注射器和连续抽吸来采集血液。
2. 采样时间：外周血的白细胞数量在一天中会有波动，通常在早上较高，下午稍低。
因此，一般建议在早晨空腹时进行采样。
3. 采集部位：外周血的采集部位通常选择在前臂的静脉区，如肘窝部位的腕静脉。
这个部位相对容易触及，而且较为安全。
4. 采集前准备：在采集外周血前，务必做好准备工作，包括消毒采血点、准备采血器具、确保采血针锐利等。
同时，也需要告知患者采血的过程和可能的不适感。
5. 采集量：为了保证准确性和稳定性，建议收集一定数量的外周血。
一般约2-5ml的血液足够进行常规白细胞计数。
通过采集外周血并检测白细胞数量，医生可以根据结果来判断患者的免疫状态和健康状况。
例如，白细胞计数的升高可能表明存在炎症或感染，而白细胞计数的降低则可能表明存在免疫功能低下或骨髓抑制等问题。
此外，白细胞亚群的检测还可以进一步评估患者的免疫细胞类型和比例，从而帮助医生更准确地诊断疾病。
总之，外周血采集白细胞标准对于医学诊断和治疗过程中起到重要作用。
通过采集和检测外周血中的白细胞数量，医生可以更好地了解患者的免疫状态和健康状况，并根据检测结果制定相应的治疗方案。
然而，在采集外周血过程中，医护人员应保持严格的操作规范，以确保样本的准确性和可靠性。
外周血采集白细胞标准
外周血采集白细胞标准近年来，随着生物医学科技的飞速发展，外周血白细胞采集技术在临床研究和治疗中的应用日益广泛。
为了确保采集过程中的安全和效果，制定一套科学、规范的外周血采集白细胞标准至关重要。
一、外周血采集白细胞的基本原则1.尊重供者意愿：在采集外周血白细胞前，应充分了解和尊重供者的意愿，确保采集过程符合伦理要求。
2.选择合适的采集时间：通常选择在早晨，避免在饭后、劳累或身体不适时进行采集。
3.严格无菌操作：采集过程中应遵循无菌操作规程，防止感染的发生。
4.适量采集：根据研究需求和供者身体状况，合理确定采集体积和细胞数量。
二、外周血采集白细胞的方法与步骤1.准备工作：检查并确保采集设备齐全、正常运行，准备好所需试剂、耗材和仪器。
2.供者定位：让供者舒适地坐或平躺，选择合适的穿刺部位，如前臂正中的肘区浅表静脉。
3.穿刺操作：严格遵循穿刺技术规范，避免损伤血管和神经。
4.采集过程：启动血细胞分离机，按照预设程序进行采集。
采集过程中密切观察供者反应，确保采集过程顺利进行。
5.结束采集：达到预期采集量后，妥善处理采集管道和针头，消毒穿刺部位，结束采集。
6.质量控制：对采集到的外周血白细胞进行质量评估，确保细胞质量和数量达到研究要求。
三、外周血采集白细胞的安全性与注意事项1.严格掌握采集适应症和禁忌症，确保供者身体状况符合采集要求。
2.采集过程中密切观察供者反应，如出现不适症状，应及时处理。
3.避免采集过程中过度挤压供者手臂，以免影响细胞质量。
4.注意保暖，避免供者在采集过程中受凉。
5.采集完成后，告知供者注意事项，如避免剧烈运动、保持穿刺部位清洁等。
总之，外周血采集白细胞是一项较为复杂的技术，制定一套规范的操作标准对于确保采集过程的安全、有效至关重要。
在实际操作中，应根据研究需求和供者身体状况，严格遵循无菌操作规程，确保采集到的外周血白细胞质量达到研究要求。
1。
血液白细胞提取流程
血液白细胞提取流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!血液白细胞提取流程一、准备工作阶段。
在进行血液白细胞提取之前，需要进行充分的准备。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP)
人外周血白细胞D N A提取标准操作规程(S O P)-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP) （血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)）1实验原理本法采用血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)，从全血中分离白膜层，去除其中的红细胞及蛋白质，裂解白细胞释放DNA，再通过去除DNA中的杂质使其纯化，得到高纯度的DNA原液，最后使用微量紫外可见分光光度计对DNA的浓度及纯度进行定量检测。
2实验仪器2.1 1.5ml EP管2.2微量移液器，10μL、50μL、200μL、1000μL2.3涡旋振荡器2.4数显恒温搅拌循环水箱2.5吸附柱CB32.6收集管2.7离心机2.8涡旋振荡器2.9微量紫外可见分光光度计（Thermo NanoDrop1000）3实验试剂3.1正常人混合血液，应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3.2红细胞裂解液（裂解红细胞）3.3缓冲液GA（轻微裂解作用，为蛋白激酶K提供反应环境），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.4蛋白激酶K（裂解蛋白质）3.5缓冲液GB（裂解白细胞，释放DNA），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.6无水乙醇（沉淀DNA，去除杂质）3.7缓冲液GD（去除蛋白质），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.8缓冲液PW（去除盐），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.9洗脱缓冲液TE（保存DNA）4实验步骤4.1样品的采集与保存：用装有EDTA的塑料管采集2mL静脉血，2000rpm离心5min，可见分层，分别为血浆层、白膜层、红细胞，将血浆吸出弃去，再通过点吸的方式将白膜层全部吸出，置于干净的1.5mL EP管备用。
如无法及时提取DNA，则应置于-80℃进行保存。
外周血白细胞中DNA提取与检测
5
四、操作步骤
1、破碎细胞：
吸去血清，混匀含有EDTA Na2的抗凝全血→取0.3mL至EP管（1）→加1mLSTMT，混 匀→离心（12000rpm 1-2min），弃上清→加1mL0.9% NaCl洗涤离心,弃上清 （12000 rpm 1-2min）→加460 μ L NE ,充分吹散沉淀→加35 μ L 10%SDS，轻 轻混匀。
9
谢 谢 各 位
10
一、实验目的
1.掌握真核细胞中DNA制备原理。
2.熟悉从外周血白细胞中提取DNA的方法。
3.掌握紫外分析仪检测DNA的原理。
2
二、实验原理
STMT破碎红细胞及白细胞的细胞膜→离心收 集白细胞核→SDS破膜
破碎细胞
DNA提取
苯酚氯仿抽提、乙醇沉淀洗涤
检测
琼脂糖凝胶电泳，紫外分析仪检测
3
三、仪器试剂
加样：DNA样品10 μ L +载样缓冲液2 μ L，混匀，取10 μ L点样
电泳：点样端接负极，100V，40min
紫外分析仪下观察结果
7
电泳结果图
8
五、注意事项
1、注意安全（苯酚具有强腐蚀性），操作戴手套； 2、所用玻璃器皿及溶液需经高压灭菌处理； 3、混匀试剂、吸取上清等操作时应动作要轻柔,避免动作剧烈； 4、离心分离两相时，应保证一定的转速和时间，且吸取上清时 注意不要吸取到中间层及有机相； 5、沉淀后注意不要将DNA沉淀倒掉。
2、DNA提取：
加等体积苯酚，轻摇1min→离心（12000rpm 3-5min）→吸取上层水相于另一EP管（2） →加1/2体积苯酚+1/2体积氯仿-异戊醇，轻摇1min →离心（12000rpm 1min）→取上 层水相于另一EP管（3）→加等体积氯仿-异戊醇→离心（12000rpm 1min） →取上层 水相于另一EP管（4）
外周血DNA抽提(离心柱法)
外周血DNA 抽提（离心柱法）以BIOG 为例产品特点 试剂盒组成 组分 50次 100次 吸附柱和收集管各50个 各100个 裂解液 18mL 36 mL 洗涤液A 21mL 42 mL 洗涤液B 9 mL 18 mL 洗脱液 3mL 6 mL 消化液 1.2 mL 2.4 mL DNA Carrier 0.24 mL 0.48 mL 说明书1份1份操作步骤1. 请自行准备：无水乙醇、1.5mL 离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A ：21mL 加入9mL 无水乙醇；42mL 加入18mL 无水乙醇。
b) 洗涤液B ：9mL 加入21mL 无水乙醇；18mL 加入42mL 无水乙醇。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取1.5mL 离心管，加入200μL 样本，4μL DNA Carrier 混合均匀，加入300μL 裂解液及20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。
4. 加入1000μL 无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA 的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL 上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液；6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL 溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集DNA 溶液。
白细胞分类计数标准操作程序SOP文件
白细胞分类计数标准操作程序文件一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：检验科日常操作规范三、操作人员：检验科授权工作人员。
[测定原理]把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料构成的染色液染色，血片中的细胞由于内容物不同，而被染成不同的颜色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得相对比值（百分率），以观察数量﹑形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。
[试剂及仪器]（一）染色液1. 瑞氏—姬姆萨复合染色液I液取瑞氏染粉 lg、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加 2 ML丙三醇和少量甲醇(分析纯)，研磨片刻，吸出上层染液。
再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上清液。
如此连续几次，共用甲醇500ml。
收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3min，共5天，以后存放一周即能使用。
Ⅱ液 pH6.4—6.8磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾(无水)6.64g磷酸氢二钠(无水)2.56g加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整 pH，加水至1000ml。
2．快速染色液I液:磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 2.56g水溶性伊红 Y 4g(或伊红 B2.5g)蒸馏水 1000ml石炭酸 40ml煮沸，待冷备用。
Ⅱ液亚甲蓝 4g蒸馏水 1000m1蒸馏水 1000m1高锰酸钾 2.4g煮沸，待冷备用。
3．30s快速单一染色液贮存液瑞氏染粉 2.0g姬姆萨染粉 0.6g天青 E 0.6g甘油 10.0ml聚乙烯D比咯烷酮(PVP) 20.0g(或曲拉通X-100 3ml)甲醇 1000ml磷酸盐缓冲液(pH6.2-6.8)磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 0.26g石炭酸 4.0ml蒸馏水加至 1000ml应用液l液、2液按3：1比例混合放置14天后备用。
（二）显微镜。
（三）计数器。
[标本的采集]取手指血或静脉血1.0ml，置于抗凝管中（2%EDTAK2）摇匀待检。
或直接未梢取血涂成血片。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP) （血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)）
1实验原理
本法采用血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)，从全血中分离白膜层，去除其中的红细胞及蛋白质，裂解白细胞释放DNA，再通过去除DNA中的杂质使其纯化，得到高纯度的DNA原液，最后使用微量紫外可见分光光度计对DNA 的浓度及纯度进行定量检测。
2实验仪器
EP管
微量移液器，10μL、50μL、200μL、1000μL
涡旋振荡器
数显恒温搅拌循环水箱
吸附柱CB3
收集管
离心机
涡旋振荡器
微量紫外可见分光光度计（Thermo NanoDrop1000）
3实验试剂
正常人混合血液，应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
红细胞裂解液（裂解红细胞）
缓冲液GA（轻微裂解作用，为蛋白激酶K提供反应环境），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
蛋白激酶K（裂解蛋白质）
缓冲液GB（裂解白细胞，释放DNA），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
无水乙醇（沉淀DNA，去除杂质）
缓冲液GD（去除蛋白质），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
缓冲液PW（去除盐），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
洗脱缓冲液TE（保存DNA）
4实验步骤
样品的采集与保存：用装有EDTA的塑料管采集2mL静脉血，2000rpm离心
5min，可见分层，分别为血浆层、白膜层、红细胞，将血浆吸出弃去，再通过点吸的方式将白膜层全部吸出，置于干净的EP管备用。
如无法及时提取DNA，则应置于-80℃进行保存。
样品预处理：
裂解红细胞：通过低速涡旋15s混匀样品，取150μL样品置于干净的EP管，加入750μL红细胞裂解液，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀5min，然后10000rpm离心2min，吸去上清，留下白细胞沉淀。
重悬白细胞：加入200μL缓冲液GA，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀
3~5min，使白细胞沉淀重悬。
裂解蛋白质：加入20μL蛋白激酶K，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀1min。
裂解白细胞，释放DNA：加入200μL缓冲液GB，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀10min，70℃水浴10min。
沉淀DNA，去除杂质：加入200μL无水乙醇，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀15s，简短离心使样品进一步混匀并去除管盖内壁的水珠。
将管内所有溶液都加入吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
去除蛋白质：向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
去除盐类：向吸附柱CB3中加入600μL缓冲液PW，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
去除盐类：重复步骤（7）。
向吸附柱CB3中加入600μL缓冲液PW，12000rpm 离心1min，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
去除残存漂洗液：将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm离心2min，倒掉废液。
将吸附柱CB3打开盖子置于室温放置10min。
洗脱DNA：将吸附柱CB3转入一个干净的EP中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50μL洗脱缓冲液TE，室温放置5min，12000rpm离心2min，将溶液收集到EP 管中，如无法及时测定，应置于-80℃进行保存。
测定DNA浓度及纯度：使用微量紫外可见分光光度计进行测定，测定前通过手弹EP管底部3~5次的方式来使DNA溶液混匀。
5实验结果分析
A230nm：碳水化合物和盐类最高吸收峰吸收波长。
A280nm：蛋白质及酚类物质最高吸收峰吸收波长。
A260nm：DNA/RNA最高吸收峰吸收波长。
260/280：比值应在~之间，低于表示有蛋白质及酚类物质污染，高于表示有RNA污染。
260/230：比值应大于1，低于1表示有碳水化合物和盐类污染。
ng/μL：样品浓度单位，是通过样品在260nm处的吸光值以及选择的分析常数来计算的。
采用本法提取的DNA溶液浓度应大于100ng/μL。