8常用药效筛选试验

抗菌实验（清热药）

体外：管碟法、平皿法（抑菌圈直径、最 低抑菌浓度和最低杀菌浓度）

体内：整体动物感染细菌（最低致死浓度 感染），观察死亡率。 抗细菌毒素
观察清热药的抗内毒素作用

内毒素（endotoxin）是革兰氏阴性菌的细胞壁成分 ，在细菌死亡自溶或粘附在其他细胞时，才表现其 毒性。内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A 成分。 清热药抗内毒素作用研究主要有四个方面：增强机 体对内毒素的解毒能力；改善机体对内毒素的反应 性；消除肠源性内毒素池及直接使内毒素解毒。 实验方法：采用给动物静脉注射大肠杆菌或伤寒杆 菌的内毒素形成内毒素血症，或夹闭大鼠的肠上动 脉造成肠源性的内毒素池观察药物对模型动物的体 温变化、白细胞数量、血液流变学、微循环及死亡 率等指标的影响。

芬氟拉明致胃动力障碍模型，盐酸 体外观察药物对动物离体胃、肠平滑肌活动的影响 多巴胺致胃排空延迟模型，L-Arg ，并可观察药物对乙酰胆碱、阿托品（ M阻断）、 （左旋精氨酸）致胃动力障碍模型
六烃季胺（N阻断）、心得安（β阻断）、酚妥拉 明（α阻断）等胃肠作用的影响，初步了解其作用 机制。
胃排空实验 取24小时禁食不禁水小鼠50只，随机分组后给药，
大鼠，随机分组后，灌胃给药每天1次，连续 四周。每天记录进食量，每周称体重调节给药量。 于末次给药后24小时麻醉大鼠，颈动脉取血，2ml 血抗凝处理测血浆MTL；3ml血不做抗凝处理， 用于测定血清GAS。
解热实验（解表药、清热药）


家兔：IV伤寒、副伤寒联合菌苗、内毒素致热
大鼠：鲜酵母液皮下注射致热

方法：随机分组后，先测量各动物给药前正常
体温，给药后30分钟造模，于致热物质注射后
的5、30、60、90、120、240min时间点测量动
物的体温，计算体温升高的百分率。
（三）观察抗炎、抗过敏作用
观察抗菌、抗病毒作用

里热证的病因多为病原微生物感染，因而需进行清热药的 抗菌、抗病毒研究， 中药对急性感染具有“广谱”的特点，宜选用较广泛的菌 株进行体外抗菌试验，选用敏感菌株进行感染动物的保护 试验。并注意对细菌感染过程各阶段的影响，如对细菌于 粘膜表面的粘附能力的影响；对细菌耐药性的影响等。 抗病毒体外实验：通常采用病毒鸡胚接种法或组织细胞培 养法，测定病毒生长情况及观察细胞病变情况，评价药物 对病毒增殖的抑制作用。体内实验是将病毒接种于易感动 物体内造成病毒感染，给予中药（在感染前或/和感染后给 药）进行干预，以动物存活率、存活时间或以动物器官病 变程度等指标来判断药物抗病毒作用。由于清热药的多成 分干扰，抗菌、抗病毒作用应以体内研究为主。
镇痛实验
冰醋酸、 酒石酸锑钾
方法：机械刺激、电刺激、热刺激、 化学刺激致痛法（造模物质） 检测指标：痛阈值、痛阈提高百分率。
常用动物：小白鼠、大白鼠
电子压痛仪
实验仪器
智能热板仪
考察镇静、催眠作用 自发活动观察：吊笼法、旷野法、活动仪
睡眠实验：观察指标有潜伏期、睡眠时间 （翻正反射消失时间）、睡眠发生率
醛等。

血管通透性实验：静脉注射伊文氏兰，观察染料
在皮下组织的渗出量。

肉芽组织增生实验：手术皮下置入固定量棉球，
一段时间后，取出棉球称重。比较给药与不给药组
动物身上取出棉球重量的差异。
足趾容积测量仪
抗炎实验—祛风湿药

佐剂型关节炎：免疫性关节炎病理模型。 佐剂的制备：取冻干卡介苗50mg，80°C，1小时灭 活，混入灭菌石蜡油、羊毛脂（1：1）12.5ml，制 成完全佐剂。 造模方法：无菌条件下足趾皮下注射0.1ml，19天后 开始给药。 观察指标：体重、足趾厚度、致炎后12天开始观察 继发性全身关节病变程度，计算关节炎指数。电镜 观察关节滑膜组织细胞有无肿胀、变性、坏死。

胃中甲基橙残留率(%)=胃中冲洗上清液吸光度/甲基橙 对照管吸光度*100%。
肠推进率实验
取24小时禁食不禁水小白鼠，随机分 组，每组10只，灌胃给药，30分钟后断颈 椎处死动物，打开腹腔，取出全部肠组织。 测量。

肠推进率%=幽门到碳末前沿的距离/ 小肠全长*100%
胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）测定（理 胃动素是一种多肽，在空肠粘膜的浓度最高，有强烈刺激 气药） 上消化道的机械运动和生理性肌电活动的作用。
毒损肺络 (与呼吸道疾病相关)
• 毒损脑络 • (脑病相关)
炎性疾病
(AS、多脏器纤维化)
血栓性疾病 (组织缺血所致炎症级连反应)
注意： • 不同疾病检测部位和指标有所区别
• 非选择性抗炎作用（角叉菜胶足肿胀、 二甲苯耳肿胀）不是主要。
治疗呼吸道病毒感染的研究内容
抑制病原体
改善症状
退 热 抗 炎 抗肺纤维化 抗多脏衰竭作用
40min后将各鼠灌0.1%甲基橙0.2ml，再过20min后将小鼠脱
颈椎处死。取胃置于装有5ml蒸馏水的小烧杯中，剪开胃大 弯，冲冼胃内容物，用NaHCO3调PH值至6～6.5，倒入刻
度离心管，以2000r· min-1离心10min，取上清液用UV-9100
紫外可见分光光度计于420nm处比色，另准备10ml蒸馏水 加入0.1%的甲基橙0.2ml为标准对照。测量各组吸光度,并计 算残留百分率。
观察泻下作用及致泻机理的研究

常采用肠管动力实验法观察此类药物的泻下作用 ，研究泻下作用部位、作用方式。
不吸收

可采用失水便秘模型、地芬诺酯模型、次炭酸鉍
大鼠便秘模型、实热型便秘模型等重点观察药物 的通便作用及肠道水分吸收的影响。
肠内容物推进速度试验法

碳末推进实验（泻下药） 碳末排出时间试验（泻下或止泻） 酚红定量测定法（测定胃肠道不同部位的 酚红含量，分析胃排空速度和不同肠段的
（ —）
（—）
PGG2
5HPETE LTB4 LTA4
（—）LTA4H
CYsTs 脑水肿
PGH2 PGD2 PGE2 TXA2等
黏附分子、 趋化因子表达增加
白细胞浸润
分泌MMP BBB破坏 神经元损伤坏死或凋亡 外周NSE增高
神经元特异性 烯醇化酶
（四）观察镇痛、镇静作用
肌肉酸痛、烦躁是表证主要症状之一，镇痛、镇静试验是考
核解表药对症治疗作用的常用方法。

致痛方法有物理性（热、电、机械）和化学性（醋酸、钾离 子、缓激肽、催产素等）两类，常用动物为小鼠、大鼠、豚
鼠、家兔或犬等。

常用评价指标为嘶叫、舔足、甩尾、挣扎或皮肤及肌肉抽动
等。

镇静试验：观察受试药物对动物一般行为（非条件行为）的 影响，判断是否有中枢抑制（或兴奋）作用，记录方法有直 接观察（行为分级）和仪器记录两类。
白介素8（IL-8）

前列腺素（PGE2）、白三烯 MIP - 1α 、MIP- 1β ：巨噬细胞炎症蛋白
HMGB1

炎症发生 12～18小时后血清 HMGB1活性最高并维持 水 平，而 TNF、IL-1等因子只是在炎症发生后几小时内达到峰 值后又回到基础水平。因此 ，特异地抑制 HMGB1的释放和
多器官功能 碍综合征
急性呼吸窘 迫综合症
观察指标
流感病毒所致小鼠 肺炎的保护 抑制呼吸道炎症
流感病毒肺炎模型 肺指数、死亡率
血清、肺组织与炎症有关 细胞因子
急性期： NO、EOS、IL-1、IL-4、IFNY 、TNF-A等 感染中后期： TNF-A（感染后12小时达峰） 碱性迁移蛋白（感染后72小时 达峰）
推进运动功能。（对胃肠运动的影响）

胃动素、胃泌素的测定（理气药）
对胃肠运动的影响


检测小鼠胃内容物中甲基橙光密度来考察药物对小 鼠胃排空机能的影响； 采用胃肠内标记物葡聚糖蓝-2000在胃内色素相对残 留率及小肠推进比，观察药物对胃排空及肠推进的 影响； 采用胃肠动力障碍模型，观察药物对肠蠕动减缓的 拮抗效应。

炎症是表证证候的主要病理过程。抗炎是解表治
疗的主要对症措施。解表药物对炎症的早、中、
晚期均有作用，但考虑表证的特点，解表药的抗
炎作用评价应以渗出、肿胀、白细胞游走或毛细 血管通透性增强等急性炎症过程为主要观察指标 ，观察受试药物的抗炎作用。
观察清热药的抗炎作用

清热药主要用于急性传染、感染性炎性疾病，其
常见药效筛选试验
解表药主要药理作用： 1.发汗 2.解热 3.镇痛 4.抗病原微生物 5.抗炎 6.影响免疫功能
常用药：麻黄、桂枝、 柴胡、葛根、荆芥、 菊花、防风等。
清热药主要药理作用： 1. 抗病原微生物 2. 解热 3.抗炎 4.影响免疫功能 5.抗自由基 6.抗肿瘤 常用药：黄芩、黄连、 知母、赤芍、银花、 连翘、板蓝根、穿心 莲、决明子、地骨皮 等。

考察解热作用

方法：常采用菌苗或内毒素等引起的感染性发热
以及用松节油和二硝基苯酚等引起的非感染性发
热观察受试药物的退热作用。通过对实验性发热
大鼠体温调节中枢温度敏感神经元放电频率及发 热动物脑脊液中PGE、cAMP含量的影响，分析 解表药作用机制和部位。
观察清热药的解热作用

发热是里热证的重要表现，研究清热药应首选 以内毒素所致的发热反应，其次如酵母性发热、 角叉菜胶所致发热及二硝基酚性发热也可选用， 还可选用内生致热原生成及致热试验、微量PGE 脑室内或下丘脑注射致热试验等用于研究清热药 的解热作用。
抗炎实验观察指标-致炎因子
百度文库
高迁移率族蛋白B1（HMGB1）：是一种DNA结合蛋白，作 为细胞因子参与炎症反应。该后期致炎因子可导致败血症， 是抗炎治疗的一种新的靶分子。

肿瘤坏死因子（TNF）：是重要的早期一过性释放的致炎因 子。

白介素1β（IL-1 β）、白介素6（IL-6）、白介素10（IL-10）、
考察解表药发汗作用

汗法是中医治疗表证的重要方法之一，可以利用 ：汗液着色法、汗腺上皮组织形态观察法和汗液 定量测定法并结合皮肤电生理技术研究解表药对 汗腺分泌、汗腺活动及汗液分泌量的影响。 发汗机制： 扩张汗腺导管，增加汗液分泌； 兴奋汗腺α受体、M受体，促进汗液分泌； 中枢神经的调节及改善血液循环促进发汗。
映Ⅰ型变态反应的发病机制，包括被动皮肤过敏
反应试验（passive cutaneous anaphylaxis，PCA
）、过敏性支气管痉挛试验、Schultz-Dale反应试
验、抗过敏介质试验及肥大细胞试验等。
•常用抗炎实验方法


小鼠耳廓肿胀法：致炎物质有巴豆油、二甲苯
大鼠足跖肿胀法：致炎物有蛋清、角叉菜胶、甲
抗炎作用的主要特点是以抑制早期炎症为强，对 中、晚期炎症作用相对较弱或无，这与其在临床 能较快解除以红、热、肿、痛为特点的“热证”相吻 合，以感染初期的炎性渗出、毛细血管通透性亢 进为主要观察指标，研究清热药的抗炎作用。
抗过敏试验

变态反应临床分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。其中Ⅰ型
变态反应的发病机制较为清楚，多数试验方法反
、改善血液流变性等方面开展研究。
理气药、芳香化湿药、泻下药、消食药 ------主要作用于消化系统

泻下药主要药理作用：泻下、利尿、抗病原微生
物、抗炎、抗肿瘤。

芳香化湿药主要药理作用：对消化道的调节作用 、抗病原微生物作用。

理气药的主要药理作用：对消化道的双向调节作 用、利胆、松弛支气管平滑肌、心血管系统影响 、对子宫的作用等。
活性是一种非常有希望 的抗炎策 略 ，尤其是治疗炎症晚期
所引起的败血症。研 究还发现，由受损组织和活化的免疫 细胞释放的 HMGB1可作为自身免疫原引起自身免疫性疾病 ， 如 RA（类风湿性关节炎）、SLE（系统性红斑狼疮）等。 HMGB1也是治疗自身免疫性疾病重要 的 靶分子。
“清热解毒”功效——抑制炎症反应
脑缺血/再灌注
Ca2+相关第二信使传导系统激活
脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 的 炎 症 代 谢 网 络
磷脂 磷脂酶A2
内 皮 小 胶 质 神 经 元 释 放 IL-1β TNF-α、IL-10等炎性因子
（—）
激活第二信使系统 蛋白激酶 磷 酸酶
COX NF- κB 、 STAT 等转录因子激活
AA释放增加 5-LOX


观察清热药对血液系统及微循环的影响

发热失水可致血液浓缩，病原体及其毒素可以激
活血小板、内外凝血系统继而出现血凝活性异常，
呈现“热瘀互结”、“气血两燔”、“耗血动血”
。微循环障碍不仅造成局部的“缺血缺氧”环境而
损伤机体抗感染防御能力，也给药物的多种疗效带 来困难。

针对清热凉血药可从抑制血小板聚集、抗血栓形成