不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
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14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly． But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry． 10% hydrochloric acid doesn＇t destroy the tissue and has the best influence for HE stain． The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid． EDTA can decalcify for a long ，have the minimum damage for bone tissue．
检的手术标本 50 例，其中有长骨、短骨、不规矩骨，包含骨干 2. 3 对组织损伤 EDTA 脱钙液对骨组织的损伤最小，对组
和骨端的骨皮质、骨髓质。
织损伤： EDTA 脱钙液 ＜ 10% 盐酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ 14% 硝酸
1. 2 材料与设备 所有化学试剂均由广州化学试剂一厂生 （ 见表 1） 。
产； 切片机、染色机和切片刀片均由英国 shandan 公司生产。 2. 4 切片质量 14% 硝酸切片质量最好。EDTA 脱钙液切片
1. 3 脱钙液 的 配 制 14 份 浓 硝 酸 加 86 份 自 来 水 配 制 成 质量最差，骨组织中钙盐残存，出现“返砂”现象，切片在镜下
14% 硝酸； 10 份浓盐酸加 90 份自来水配制成 10% 盐酸； 盐酸 或肉眼可见非常明显的“刀痕”现象，甚至影响观察（ 见表 1） 。
【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry． Methods 50 cases of fresh human bone example are selected． The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution （ including 14% nitric acid，10% hydrochloric acid，20% a hydrochloric acid and EDTA） ． Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry． Conclusion
物质，使得抗原的免疫活性降低，在免疫组化染色中抗原不 脱钙对组织细胞或多或少都有影响，苏木素染色可以适当延
细胞核 淡红色-不着色 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰
切片质量 好，无“返砂” 好，无“返砂” 稍有“返砂”
有“返砂”
作者单位： 510085 中山大学附属第一医院病理科（ 罗灿峤 钟觉民） ， 耳鼻喉科（ 莫木琼）
·28·
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
·27·
不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
罗灿峤 莫木琼 钟觉民
【摘要】 目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对 HE 染色的影响。方法 选取 50 例手术切除的新鲜骨标本，运用 4 种常用的脱钙液（ 14% 硝酸、10% 盐酸、20% 甲盐酸和 EDTA 脱钙液） 进行脱钙，比较其脱钙效果和对 HE 染色的影响。结果 不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、 HE 染色效果影响有显著区别。结论 14% 硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差； 10% 盐酸 对骨组织的损伤小，HE 染色的效果最好，但用时较长； 20% 甲盐酸脱钙能力和 HE 染色效果都介于 10% 盐酸和 EDTA 脱钙液之间； EDTA 脱钙液脱钙用时最长，对骨组织的损伤最小。
【Key words】 Decalcifying solution； HE stain； Bone tissue
骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成， 二钠盐 10 g，PBS 溶液 100 ml（ 滴加 NAOH 溶液至溶解，然后
骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。 用 HCL 中和至 pH 7. 0） 配制成 EDTA 脱钙液。
酸、醋酸、甲酸等） ，也可以利用电解、微波等进行物理脱钙， 进行常规脱水、石蜡包埋、HE 染色。 或混和使用［1］。本研究希望通过对比各种脱钙液的脱钙效 2 结果
果及其后 HE 染色和免疫组化效果，探讨既方便临床应用，又 2. 1 脱 钙 效 果 14% 硝 酸 最 好。14% 硝 酸 ＞ 10% 盐 酸 ＞
标本出现“返砂”现象，制片易出现明显“刀痕”现象，影响观 EDTA 脱钙液脱钙作用较缓慢，一般要 4 ～ 5 周，大多要 5 ～ 6
察。另外，14% 硝酸脱钙液对组织的损伤最大，脱钙后组织肿 胀明显，组织细胞的形态结构难以保持完整清晰。由于 14%
周，脱钙温度以常温为宜，可加温至 37°C 快速脱钙，但脱钙效 果不理想［3］。另外，EDTA 脱钙液在使用过程中还需注意不
由于 EDTA 是一种优良的脱钙螯合剂，故 EDTA 脱钙液
要是因为其脱钙能力最强，脱钙时间最短，但这也使得骨组织 的脱钙作用优于酸性溶液，对组织破坏极小，能保持组织细
的脱钙程度较难掌握，往往造成过度脱钙。同时，14% 硝酸的 胞的完整结构，尤其细胞显微化学改变甚微，且能保存组织
渗透能力差，对骨组织特别是比较硬的骨组织渗透能力更差， 中的抗原物质和某些酶类的活性，有利于组织免疫组化和组 导致其对不同组织的渗透程度不相同，脱钙效果不一样，部分 织化学染色，从而更进一步地保证了实验结果的精确性［2］。
或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学 cm × 1. 5 cm × 0. 3 ～ 0. 5 cm，厚 0. 3 cm ～ 0. 5 cm，然后充分浸
实验工作。因此，必须寻找一种合适的脱钙液进行骨组织脱 泡在不同脱钙液中，间隔一定时间后更换脱钙液，当用缝衣针
钙。现时的脱钙液有无机酸（ 硝酸、盐酸、硫酸） 和有机酸（ 蚁 顺利穿过无阻力感、手术刀可顺利切开即为脱钙成功。继而
硝酸为强酸，脱钙后细胞核的染色能力下降，切片经常规 HE 宜用金属容器，尽量用玻璃容器； 同时，组织经过脱钙后必须
染色后细胞核着色能力下降而返蓝困难而变成淡红色，对比 在流动的自来水充分冲洗，自来水的弱碱性可中和残留在组
度差。此外，强酸在溶解骨组织钙盐的同时也容易破坏抗原 织中的脱钙液酸性，有利于组织切片苏木素的着色，同时由于
适合科学研究的脱钙方法。
20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
1 资料与方法
2. 2 脱钙时间 14% 硝酸时间最短。14% 硝酸 ＞ 10% 盐酸
1. 1 标本 选取 2008 年 1 月至 2008 年 8 月我院手术室送 ＞ 20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
20 ml，甲酸 20 ml，自来水 100 ml，配制成 20% 甲盐酸； EDTA
表 1 4 种脱钙液效果比较
组别 14% 硝酸 10% 盐酸 20% 甲乙酸 EDTA 脱钙液
时间 6 ～8 h 3 ～4 d 1 ～2 周 5 ～6 周
肉眼观察组织颜色 淡黄-黄 无变化 无变化 无变化
细胞形态 稍肿胀 无变化 无变化 无变化
2，3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究
张继国 岳旺
【摘要】 目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠 2，3-吲哚醌后的药代动力学，为该药的新药开 发提供依据。方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约 0. 25 ml 血液，采集时间点为： 给予受试物前（ 0 hr） 和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h 和 24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出 50 μl 全血 采用甲醇蛋白沉淀进行预处理，奎硫平作为内标。预处理后样品采用 LC / MS / MS 法进行测定，并用药动 学处理软件 WinNonlin 5. 2 采用非房室模型计算相关药代动力学参数。结果 Sprague Dawley 大鼠静脉 注射和口服两种制剂的药动学参数（ 平均值 ± 标准偏差） 如下。静脉注射： Tmax 为（ 0. 83 ± 0. 29） hr，Cmax 为 （ 141. 53 ± 10. 99） μg / L，t1 /2 为（ 1. 68 ± 0. 84） hr，AUC0-t 为（ 1068. 15 ± 389. 06） μg / hr / L，AUC0-∞ 为（ 1211. 19 ± 469. 18） μg·hr / L，Vz 为（ 4. 13 ± 1. 41） L / kg，CLz 为（ 1. 89 ± 0. 94） L / hr / kg； 口服： Tmax 为（ 0. 05 ± 0. 00） hr，Cmax 为 （ 1725. 53 ± 469. 70 ） ng / ml，t1 /2 为 （ 4. 21 ± 2. 78 ） hr，AUC0-t 为 （ 7711. 21 ± 2533. 12 ） μg / hr / L， AUC0-∞ 为（ 7986. 07 ± 2623. 38） μg / hr / L，以 AUC0-t 计算，生物利用度平均为（ 57. 75 ± 18. 97） % 。结论 2，3-吲哚醌大鼠体内消除较快，可能存在非线性消除，口服吸收较好。
由于磷酸钙和碳酸钙的存在造成骨组织的硬度较大，不易切 1. 4 步骤 每例标本平均分成 4 份，确保所有骨组织的性质
片且极易脱片，因此在病理制片过程中，必须要进行脱钙处 都一样。新鲜骨组织及时用 10% 中性福尔马林水溶液固定。
理，但如果骨组织脱钙过度又会严重影响组织细胞染色效果， 充分固定后，用锋利的钢锯将骨组织切成小块，大小约 1. 5
【关键词】 脱钙液； HE 染色； 骨组织
Comparison of the application of the different decalcifying solution in the bone tissue LUO Can-qiao， MO Mu-qiong，ZHONG Jue-min． Department of Pathology，The First Hospital Affiliated to Sun Yat-Seen University，Guangdong 510085，China
图 1 A. 14% 硝酸； B. 10% 盐酸； C. 20% 甲盐酸； D. Eห้องสมุดไป่ตู้TA 脱钙液
3 讨论
研究，都能得到优良效果，免疫组织化学染色能理想地显示
脱钙是骨组织制片中的重要一环，也是病理技术难点，而 抗原物质，免疫组化阳性反应物为棕黄色，定位明确，组织切
脱钙剂的选择尤其重要。
片背景干净。
14% 硝酸脱钙液是目前临床使用最广的一种脱钙液，主
【关键词】 2，3-吲哚醌； 药物代谢动力学； 静脉注射； 口服
作者单位： 271016 泰安泰山医学院（ 张继国） ； 青岛大学（ 岳旺）
2. 5 脱钙后 HE 染色的效果 10% 盐酸脱钙后 HE 染色的效 果最好，细胞核与细胞质层次分明，对比清晰，颜色鲜艳。其
余脱钙后 HE 染色的效果 14% 硝酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ EDTA 脱 钙液（ 见图 1） 。
检的手术标本 50 例，其中有长骨、短骨、不规矩骨，包含骨干 2. 3 对组织损伤 EDTA 脱钙液对骨组织的损伤最小，对组
和骨端的骨皮质、骨髓质。
织损伤： EDTA 脱钙液 ＜ 10% 盐酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ 14% 硝酸
1. 2 材料与设备 所有化学试剂均由广州化学试剂一厂生 （ 见表 1） 。
产； 切片机、染色机和切片刀片均由英国 shandan 公司生产。 2. 4 切片质量 14% 硝酸切片质量最好。EDTA 脱钙液切片
1. 3 脱钙液 的 配 制 14 份 浓 硝 酸 加 86 份 自 来 水 配 制 成 质量最差，骨组织中钙盐残存，出现“返砂”现象，切片在镜下
14% 硝酸； 10 份浓盐酸加 90 份自来水配制成 10% 盐酸； 盐酸 或肉眼可见非常明显的“刀痕”现象，甚至影响观察（ 见表 1） 。
【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry． Methods 50 cases of fresh human bone example are selected． The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution （ including 14% nitric acid，10% hydrochloric acid，20% a hydrochloric acid and EDTA） ． Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry． Conclusion
物质，使得抗原的免疫活性降低，在免疫组化染色中抗原不 脱钙对组织细胞或多或少都有影响，苏木素染色可以适当延
细胞核 淡红色-不着色 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰
切片质量 好，无“返砂” 好，无“返砂” 稍有“返砂”
有“返砂”
作者单位： 510085 中山大学附属第一医院病理科（ 罗灿峤 钟觉民） ， 耳鼻喉科（ 莫木琼）
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中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
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不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
罗灿峤 莫木琼 钟觉民
【摘要】 目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对 HE 染色的影响。方法 选取 50 例手术切除的新鲜骨标本，运用 4 种常用的脱钙液（ 14% 硝酸、10% 盐酸、20% 甲盐酸和 EDTA 脱钙液） 进行脱钙，比较其脱钙效果和对 HE 染色的影响。结果 不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、 HE 染色效果影响有显著区别。结论 14% 硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差； 10% 盐酸 对骨组织的损伤小，HE 染色的效果最好，但用时较长； 20% 甲盐酸脱钙能力和 HE 染色效果都介于 10% 盐酸和 EDTA 脱钙液之间； EDTA 脱钙液脱钙用时最长，对骨组织的损伤最小。
【Key words】 Decalcifying solution； HE stain； Bone tissue
骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成， 二钠盐 10 g，PBS 溶液 100 ml（ 滴加 NAOH 溶液至溶解，然后
骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。 用 HCL 中和至 pH 7. 0） 配制成 EDTA 脱钙液。
酸、醋酸、甲酸等） ，也可以利用电解、微波等进行物理脱钙， 进行常规脱水、石蜡包埋、HE 染色。 或混和使用［1］。本研究希望通过对比各种脱钙液的脱钙效 2 结果
果及其后 HE 染色和免疫组化效果，探讨既方便临床应用，又 2. 1 脱 钙 效 果 14% 硝 酸 最 好。14% 硝 酸 ＞ 10% 盐 酸 ＞
标本出现“返砂”现象，制片易出现明显“刀痕”现象，影响观 EDTA 脱钙液脱钙作用较缓慢，一般要 4 ～ 5 周，大多要 5 ～ 6
察。另外，14% 硝酸脱钙液对组织的损伤最大，脱钙后组织肿 胀明显，组织细胞的形态结构难以保持完整清晰。由于 14%
周，脱钙温度以常温为宜，可加温至 37°C 快速脱钙，但脱钙效 果不理想［3］。另外，EDTA 脱钙液在使用过程中还需注意不
由于 EDTA 是一种优良的脱钙螯合剂，故 EDTA 脱钙液
要是因为其脱钙能力最强，脱钙时间最短，但这也使得骨组织 的脱钙作用优于酸性溶液，对组织破坏极小，能保持组织细
的脱钙程度较难掌握，往往造成过度脱钙。同时，14% 硝酸的 胞的完整结构，尤其细胞显微化学改变甚微，且能保存组织
渗透能力差，对骨组织特别是比较硬的骨组织渗透能力更差， 中的抗原物质和某些酶类的活性，有利于组织免疫组化和组 导致其对不同组织的渗透程度不相同，脱钙效果不一样，部分 织化学染色，从而更进一步地保证了实验结果的精确性［2］。
或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学 cm × 1. 5 cm × 0. 3 ～ 0. 5 cm，厚 0. 3 cm ～ 0. 5 cm，然后充分浸
实验工作。因此，必须寻找一种合适的脱钙液进行骨组织脱 泡在不同脱钙液中，间隔一定时间后更换脱钙液，当用缝衣针
钙。现时的脱钙液有无机酸（ 硝酸、盐酸、硫酸） 和有机酸（ 蚁 顺利穿过无阻力感、手术刀可顺利切开即为脱钙成功。继而
硝酸为强酸，脱钙后细胞核的染色能力下降，切片经常规 HE 宜用金属容器，尽量用玻璃容器； 同时，组织经过脱钙后必须
染色后细胞核着色能力下降而返蓝困难而变成淡红色，对比 在流动的自来水充分冲洗，自来水的弱碱性可中和残留在组
度差。此外，强酸在溶解骨组织钙盐的同时也容易破坏抗原 织中的脱钙液酸性，有利于组织切片苏木素的着色，同时由于
适合科学研究的脱钙方法。
20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
1 资料与方法
2. 2 脱钙时间 14% 硝酸时间最短。14% 硝酸 ＞ 10% 盐酸
1. 1 标本 选取 2008 年 1 月至 2008 年 8 月我院手术室送 ＞ 20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
20 ml，甲酸 20 ml，自来水 100 ml，配制成 20% 甲盐酸； EDTA
表 1 4 种脱钙液效果比较
组别 14% 硝酸 10% 盐酸 20% 甲乙酸 EDTA 脱钙液
时间 6 ～8 h 3 ～4 d 1 ～2 周 5 ～6 周
肉眼观察组织颜色 淡黄-黄 无变化 无变化 无变化
细胞形态 稍肿胀 无变化 无变化 无变化
2，3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究
张继国 岳旺
【摘要】 目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠 2，3-吲哚醌后的药代动力学，为该药的新药开 发提供依据。方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约 0. 25 ml 血液，采集时间点为： 给予受试物前（ 0 hr） 和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h 和 24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出 50 μl 全血 采用甲醇蛋白沉淀进行预处理，奎硫平作为内标。预处理后样品采用 LC / MS / MS 法进行测定，并用药动 学处理软件 WinNonlin 5. 2 采用非房室模型计算相关药代动力学参数。结果 Sprague Dawley 大鼠静脉 注射和口服两种制剂的药动学参数（ 平均值 ± 标准偏差） 如下。静脉注射： Tmax 为（ 0. 83 ± 0. 29） hr，Cmax 为 （ 141. 53 ± 10. 99） μg / L，t1 /2 为（ 1. 68 ± 0. 84） hr，AUC0-t 为（ 1068. 15 ± 389. 06） μg / hr / L，AUC0-∞ 为（ 1211. 19 ± 469. 18） μg·hr / L，Vz 为（ 4. 13 ± 1. 41） L / kg，CLz 为（ 1. 89 ± 0. 94） L / hr / kg； 口服： Tmax 为（ 0. 05 ± 0. 00） hr，Cmax 为 （ 1725. 53 ± 469. 70 ） ng / ml，t1 /2 为 （ 4. 21 ± 2. 78 ） hr，AUC0-t 为 （ 7711. 21 ± 2533. 12 ） μg / hr / L， AUC0-∞ 为（ 7986. 07 ± 2623. 38） μg / hr / L，以 AUC0-t 计算，生物利用度平均为（ 57. 75 ± 18. 97） % 。结论 2，3-吲哚醌大鼠体内消除较快，可能存在非线性消除，口服吸收较好。
由于磷酸钙和碳酸钙的存在造成骨组织的硬度较大，不易切 1. 4 步骤 每例标本平均分成 4 份，确保所有骨组织的性质
片且极易脱片，因此在病理制片过程中，必须要进行脱钙处 都一样。新鲜骨组织及时用 10% 中性福尔马林水溶液固定。
理，但如果骨组织脱钙过度又会严重影响组织细胞染色效果， 充分固定后，用锋利的钢锯将骨组织切成小块，大小约 1. 5
【关键词】 脱钙液； HE 染色； 骨组织
Comparison of the application of the different decalcifying solution in the bone tissue LUO Can-qiao， MO Mu-qiong，ZHONG Jue-min． Department of Pathology，The First Hospital Affiliated to Sun Yat-Seen University，Guangdong 510085，China
图 1 A. 14% 硝酸； B. 10% 盐酸； C. 20% 甲盐酸； D. Eห้องสมุดไป่ตู้TA 脱钙液
3 讨论
研究，都能得到优良效果，免疫组织化学染色能理想地显示
脱钙是骨组织制片中的重要一环，也是病理技术难点，而 抗原物质，免疫组化阳性反应物为棕黄色，定位明确，组织切
脱钙剂的选择尤其重要。
片背景干净。
14% 硝酸脱钙液是目前临床使用最广的一种脱钙液，主
【关键词】 2，3-吲哚醌； 药物代谢动力学； 静脉注射； 口服
作者单位： 271016 泰安泰山医学院（ 张继国） ； 青岛大学（ 岳旺）
2. 5 脱钙后 HE 染色的效果 10% 盐酸脱钙后 HE 染色的效 果最好，细胞核与细胞质层次分明，对比清晰，颜色鲜艳。其
余脱钙后 HE 染色的效果 14% 硝酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ EDTA 脱 钙液（ 见图 1） 。