抗体工程制药课件
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与局部的免疫反应;
免疫球蛋白
• IgD在血清中含量很低;
• IgE在血清含量最少抗。体工程制I药gG IgM IgA IgD IgE
抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再 刺激后， IgＧ将取代IgM
动物血清中产生抗体的时间示意图
抗体工程制药
抗体研究的发展阶段：
①以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表,用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
3.常用的骨髓瘤细胞系— SP2/0，P3.653细 胞，都是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)的缺乏株。
4.免疫方法: 体外免疫法；体内免疫法
抗体工程制药
体内免疫法 ---- 颗粒性抗原(如细菌、细胞)
的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内.
②以1975年Milstein & Kohler创建杂交瘤技
术制备单克隆抗体(McAb)为代表。 ③以1994年Winter,创建了噬菌体抗体库
(repertoire of antibodies displayed on phages)技术,以基因工程方法制备抗体为代 表。在此基础上发展成抗体工程。
抗体工程制药
多克隆抗体和单克隆抗体
Antigen 31 2 4 Immunization
12 3
Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58
1 3
2 4
m m
m m
Spleen cells
B cell
1
+ Myeloma
4
23 4
抗体工程制药
• 多克隆抗体:
31 24
一种抗原具有多个抗原决定簇,每个
抗原决定簇都能刺激一个B细胞产生一种
抗体。这样所获得的免疫血清是多种抗
体的混和物。
• 单克隆抗体(Monoclonal antibody McAb):
由一个抗原决定簇刺激的、单一的B
细胞和骨髓瘤细胞融合增殖后所产生的、
高度均一的抗体。
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon oclonal antibody.
二. 单克隆抗体的制备
McAb（Monoclonal antibody，单克隆抗体）：
将在体外不能长期传代的抗体产生细胞（如 Balb/C小鼠的免疫脾细胞）与在体外能迅速增殖并带 有抗药标记的骨髓瘤细胞（如小鼠的NS-1或SP2/0）在 聚乙二醇（PEG）作用下融合，然后利用抗药性标记 和经稀释法选出单个产生抗体的杂交瘤细胞，再用血 清学方法证实其与抗原结合的特异性和亲和力。这样 的杂交瘤细胞能长期传代同时分泌针对单一抗原上单 一抗原表位的抗体，称为McAb（第二代抗体）。
抗体工程制药
二.单克隆抗体的制备
单
克
隆
抗
体
制
备
过
程
图
抗体工程制药
解
单 克 隆 抗 体 制 备 过 程 图 解
抗体工程制药
抗体工程制药
一.抗原与动物免疫
1.抗原选择 — 完整细胞(肿瘤细胞)；可溶 性蛋白质或多肽;
2.免疫动物 — 小鼠(Balb/C,鼠龄6-8周)或 大鼠 (Lou);
抗体工程制药
Cell fusion
x
31 24
12 34
Antiseum
A mixture of all Ab
Monoclonal antibodies
Pure single Ab
If a single B cell was picked up and cultured, then it will prod uce only one kind of antibody.
37-40℃ 2mins
融合细胞（杂交瘤细胞）
用作细胞融合剂的聚乙二醇(PEG)一般选用MW4000， 常用浓度为50％，pH8.0～pH8.2 。可加入二甲基亚
砜(DMSO)。2002年12月神舟4号飞船搭载B淋巴细胞 和骨髓瘤细抗胞体工升程制空药进行细胞融合实验
②免疫原剂量不足。
（3）佐剂种类
1)油性乳剂—弗氏佐剂（Freund adjuvant） 2)无机化合物
3)微生物及其产物
4)脂质体
5)细胞因子
抗体工程制药
二.细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养
1.细胞融合的基本方法(PEG促融)
脾细胞 骨髓瘤细胞(“永久”细胞)
(1×108)
(2~3×107)
来自百度文库
聚乙二醇(PEG)
抗体工程制药
抗体工程制药
一.概述
抗体(工程)制药—生物技术制药领 域的重要组成部分
抗体工程制药
抗体：能与相应抗原特异性结合的具有
免疫功能的球蛋白。
免疫球蛋白的结构 抗体工程制药
抗体的产生过程：
机体免疫系统受抗原
物质刺激后，B淋巴 细胞被激活，增殖和
分化为浆细胞，由浆 细胞合成和分泌的球 蛋白。
抗体工程制药
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范
围从150,000到950,000道尔顿。分五类：
• IgG在血清中含量最高，达75~80%,是抗感染
的主要抗体;
• IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大的，为
五聚体,是对一个抗原作出反应时产生的
第一个抗体；
• IgA在黏膜表面、乳腺、泪腺形成，主要参
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或
液体石蜡等）、乳化剂和灭活的分枝杆菌组成 的乳化佐剂。 弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌
抗体工程制药
免疫佐剂（adjuvant )
（1）定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机体
可增强抗原的免疫原性的物质。
（2）应用 ①弱免疫原性物质；
与局部的免疫反应;
免疫球蛋白
• IgD在血清中含量很低;
• IgE在血清含量最少抗。体工程制I药gG IgM IgA IgD IgE
抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再 刺激后， IgＧ将取代IgM
动物血清中产生抗体的时间示意图
抗体工程制药
抗体研究的发展阶段：
①以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表,用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
3.常用的骨髓瘤细胞系— SP2/0，P3.653细 胞，都是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)的缺乏株。
4.免疫方法: 体外免疫法；体内免疫法
抗体工程制药
体内免疫法 ---- 颗粒性抗原(如细菌、细胞)
的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内.
②以1975年Milstein & Kohler创建杂交瘤技
术制备单克隆抗体(McAb)为代表。 ③以1994年Winter,创建了噬菌体抗体库
(repertoire of antibodies displayed on phages)技术,以基因工程方法制备抗体为代 表。在此基础上发展成抗体工程。
抗体工程制药
多克隆抗体和单克隆抗体
Antigen 31 2 4 Immunization
12 3
Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58
1 3
2 4
m m
m m
Spleen cells
B cell
1
+ Myeloma
4
23 4
抗体工程制药
• 多克隆抗体:
31 24
一种抗原具有多个抗原决定簇,每个
抗原决定簇都能刺激一个B细胞产生一种
抗体。这样所获得的免疫血清是多种抗
体的混和物。
• 单克隆抗体(Monoclonal antibody McAb):
由一个抗原决定簇刺激的、单一的B
细胞和骨髓瘤细胞融合增殖后所产生的、
高度均一的抗体。
Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon oclonal antibody.
二. 单克隆抗体的制备
McAb（Monoclonal antibody，单克隆抗体）：
将在体外不能长期传代的抗体产生细胞（如 Balb/C小鼠的免疫脾细胞）与在体外能迅速增殖并带 有抗药标记的骨髓瘤细胞（如小鼠的NS-1或SP2/0）在 聚乙二醇（PEG）作用下融合，然后利用抗药性标记 和经稀释法选出单个产生抗体的杂交瘤细胞，再用血 清学方法证实其与抗原结合的特异性和亲和力。这样 的杂交瘤细胞能长期传代同时分泌针对单一抗原上单 一抗原表位的抗体，称为McAb（第二代抗体）。
抗体工程制药
二.单克隆抗体的制备
单
克
隆
抗
体
制
备
过
程
图
抗体工程制药
解
单 克 隆 抗 体 制 备 过 程 图 解
抗体工程制药
抗体工程制药
一.抗原与动物免疫
1.抗原选择 — 完整细胞(肿瘤细胞)；可溶 性蛋白质或多肽;
2.免疫动物 — 小鼠(Balb/C,鼠龄6-8周)或 大鼠 (Lou);
抗体工程制药
Cell fusion
x
31 24
12 34
Antiseum
A mixture of all Ab
Monoclonal antibodies
Pure single Ab
If a single B cell was picked up and cultured, then it will prod uce only one kind of antibody.
37-40℃ 2mins
融合细胞（杂交瘤细胞）
用作细胞融合剂的聚乙二醇(PEG)一般选用MW4000， 常用浓度为50％，pH8.0～pH8.2 。可加入二甲基亚
砜(DMSO)。2002年12月神舟4号飞船搭载B淋巴细胞 和骨髓瘤细抗胞体工升程制空药进行细胞融合实验
②免疫原剂量不足。
（3）佐剂种类
1)油性乳剂—弗氏佐剂（Freund adjuvant） 2)无机化合物
3)微生物及其产物
4)脂质体
5)细胞因子
抗体工程制药
二.细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养
1.细胞融合的基本方法(PEG促融)
脾细胞 骨髓瘤细胞(“永久”细胞)
(1×108)
(2~3×107)
来自百度文库
聚乙二醇(PEG)
抗体工程制药
抗体工程制药
一.概述
抗体(工程)制药—生物技术制药领 域的重要组成部分
抗体工程制药
抗体：能与相应抗原特异性结合的具有
免疫功能的球蛋白。
免疫球蛋白的结构 抗体工程制药
抗体的产生过程：
机体免疫系统受抗原
物质刺激后，B淋巴 细胞被激活，增殖和
分化为浆细胞，由浆 细胞合成和分泌的球 蛋白。
抗体工程制药
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范
围从150,000到950,000道尔顿。分五类：
• IgG在血清中含量最高，达75~80%,是抗感染
的主要抗体;
• IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大的，为
五聚体,是对一个抗原作出反应时产生的
第一个抗体；
• IgA在黏膜表面、乳腺、泪腺形成，主要参
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或
液体石蜡等）、乳化剂和灭活的分枝杆菌组成 的乳化佐剂。 弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌
抗体工程制药
免疫佐剂（adjuvant )
（1）定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机体
可增强抗原的免疫原性的物质。
（2）应用 ①弱免疫原性物质；