细菌内毒素方法学验证方案
8、细菌内毒素检查的验证
定量法：标准曲线的验证实验。相关系数
|γ |≥0.980，可以平均或直接回归。
3、 供试品验证
3.1 目的：验证供试品在实验条件下对BET是否存在干 扰。所谓“在实验条件下”是指实验时供试品的状
况（浓度、pH值等）对实验所使用的具体厂家的试
剂的相容性。 3.2 验证项目及标准 凝胶法：供试品干扰试验，结果无干扰 定量法：供试品干扰试验。相关系数 |γ |≥0.980，回收率在50~200%
细菌内毒素检查的 验证
细菌内毒素检查的验证
1.
2.
3.
4. 5.
实验室的验证 试剂验证 供试品验证 干热除热原验证 定量检测设备的验证
1、 实验室验证
1.1 目的：验证实验室的条件以及实验员的实验 技能是否满足BET实验的要求。 1.2 验证项目及标准 凝胶法：鲎试剂标示灵敏度的复核试验。复 核结果应在标示灵敏度50~200%
– 2、运行确认（OQ）
包括软件运行密码的安全性确认，设备与软件 的连接通信、稳定性确认等； – 3、性能确认（PQ） 包括光学性能、温控性能、检测均一性能的确
认等。
3.3 验证方法 （1）验证前一般进行初筛试验，取一批样品挑选出 合适的验证浓度、方法； （2）取三批样品进行干扰验证试验； （3）可能的话，设置一个安全系数。
3、 供试品验ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ（续）
3.3 验证失败的处理 1）分析失败的原因 2）消除干扰因素
3）重做验证实验
4、干热除热原验证
4.1目的：证明干热除热原过程的有效性。 4.2验证项目及标准 一般将内毒素指示剂加入待去热原的物品中，证
范围内。
定量法：标准曲线的可靠性试验。相关系数 |γ |≥0.980，但回归方式必须是直接
盐酸赖氨酸注射液细菌内毒素检查法方法学验证
和 ２支供试 品阳性对照 （ 即含 ２０ 浓度标准 内毒素的该浓度 ．
的供 试 品稀 释 液） 。
５ １ 鲎 试剂 ．
批 号 为 １０ １ １ １２ ５ ；生 产 厂 家 为 湛 江安 度 斯 生 物 有 限公 司 。
盐 酸赖氨酸 注射液 限值 Ｌ：０ ＵｍＬ，按最 大有效稀 释 ．Ｅ ／ ５
ｌ － （ ／） ｏ ＹＸ４ ｇ
（） 待复核鲎试剂 ：批号为 １０ １ １ １ １ ２５ ；生 产厂家为湛江安
度斯生物有 限公 司；终 点浓度 （ Ｕｍ ）为 ０ ５ ．５ ． 、 Ｅ ／Ｌ ． 、０２ 、０ ５ ２ ２
０２ 。 ．５
ｌ ｏ （ ／ ） ｏ ［１ｇ．５＋ｌ ｏ２ ＝ｌ ｇ ∑Ｘ４ ＝ｌ ｇ （ ０２ ｏ ｏ ．５＋ｌ ０２ ｇ ｏ ． ｇ ５＋ ｌ ０２ ） ］ ．５ ＵｍＬ ｏ ． ／ ＝０２ ／ ｇ ５４ Ｅ （）待复核鲎试剂 ：批 号为 １０ ２ ０ ２ ６ １ ；生产厂家 为湛 江博 １ 康海 洋 生物 有 限公 司 ；终 点 浓 度 （ Ｕｍ ） 为 ０１５ ．５ Ｅ ／Ｌ ．２ 、０ 、 ２
司。
（） 阴性对照管 （ Ｃ管） ４ Ｎ ：加入 ０２ｍ 细菌内毒素检查用 ． ｌ
水 ，其作用是防止试剂或器具 自身的污染影响检查结果的准确 性 ，做 ２ 。 支
（） 标 准对 照反 应 终点 浓 度 （ ＵｍＬ ：０１５ ． ５ １ Ｅ ／ ） ．２ 、０１ 、 ２
０．５、 ０．５。 ２ ２
（） 标 准对 照 反 应终 点 浓 度 （ ＵｍＬ 为 ０２ 、０ ５ １ Ｅ／ ） ． ５ ． 、 ２
０２ ．５、 ０２ 。 ．５
倍数 Ｍ Ｄ＝ Ｌ 计算 ，确定稀释倍数 为 ２ ４ 、１ 、１ Ｖ Ｃ× ／ 、 、８ ２ ６
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案一、背景介绍细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒分子，它可以引起中毒反应并对人类健康造成危害。
因此，准确检测和验证细菌内毒素的方法非常重要。
本方案旨在验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
二、实验目的本实验旨在验证细菌内毒素检验方法，确保其能够准确地检测细菌内毒素的含量。
三、实验材料和设备1. 细菌内毒素检验试剂盒2. 细菌培养基3. 细菌菌种4. 培养皿5. 恒温培养箱6. 试管7. 离心机8. 显微镜9. 无菌培养室四、实验步骤1. 准备工作a. 清洁实验桌面和实验器材，防止污染。
b. 准备所需要的材料和设备，并确保其干净和无菌。
2. 细菌培养a. 随机取一支细菌菌种采样放入培养基中并均匀涂抹于培养皿上。
b. 将培养皿置于恒温培养箱中，以适当的温度和时间培养细菌。
3. 细菌内毒素检验a. 取一份细菌内毒素检验试剂盒，根据说明书的指导进行试剂的调配和处理。
b. 等待试剂反应完成后，根据试剂盒的说明书进行结果的解读。
4. 结果分析a. 观察试剂盒结果，根据颜色变化和强度判断细菌内毒素的含量。
b. 结果符合预期的样本被认为是阳性，否则为阴性。
五、质量控制1. 测量前需进行必要的质量控制，包括试剂的稳定性和标准品的准确性。
六、风险控制1. 实验过程中需佩戴个人防护装备，如实验手套和口罩，以减少潜在的健康风险。
七、数据处理与结果1. 将实验所得数据进行整理和统计，并进行数据分析和结果的解读。
八、讨论与结论1. 讨论实验结果与预期结果之间的差异，分析可能的原因，并提出改进和优化的建议。
2. 结论验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
九、参考文献参考实验所使用的细菌内毒素检验方法的相关文献。
以上是细菌内毒素检验方法验证方案的内容，该方案通过详细的步骤和操作说明，确保了实验的准确性和可靠性。
通过验证该方法，将可为细菌内毒素检验提供可靠的数据支持，为相关领域的研究和应用提供技术支持。
中国药典 细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法中，按以下步骤进行实验。
首先，制备试样溶液。
将待测样品溶解在合适的溶剂中，并通过过滤将溶液过滤至少两次以去除杂质。
然后，制备标准溶液。
将内毒素标准品按照指定浓度配制成溶液。
接下来，准备试管。
将标准溶液和试样溶液分别装入两个试管中，并加入适量的无菌生理盐水作为空白对照。
然后，进行混合。
轻轻旋转试管混合样品，确保溶液均匀混合。
接着，培养细菌。
将特定的细菌株接种在培养基中，分别加入试管中的样品溶液，并在适当条件下进行培养。
培养结束后，观察结果。
通过观察培养基的变化，比较试管中的样品溶液和空白对照的差异，判断样品中是否存在细菌内毒素。
最后，记录结果。
根据观察结果，记录样品的检验结果，并进行数据分析。
细菌内毒素检查验证方案之欧阳学创编
细菌内毒素检查验证方案时间：2021.03.03 创作：欧阳学文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述1 2 验证目的及范围13 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5验证前准备26验证的实施27 偏差处理5 8 验证数据及评估59验证报告及评审510 再验证及周期511 验证文件及归档512 附件51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4验证依据《中华人民共和国药典》2015版 1143 细菌内毒素检查法 5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2.电热干燥箱6.1.3.恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5.旋涡混合器6.1.6.鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检验方法验证方案
1 概述：为了符合2010版GMP的要求，为了确保生产检验出符合预定用途和注册要求的产品，确保产品质量合格。
保证用药安全。
确认检查方法的科学持续稳定可靠适用性理想。
本方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
2 验证目的：为确保注射用水细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度在本实验室条件下的适用性保证检测结果科学准确可靠，特制定此方案对注射用水细菌内毒素检查方法进行验证。
3 验证方式：结合实验室实际情况，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查。
由合格的检验人员对同一批供试品进行检查同一操作方法同一批供试品检查重复检查3次记录检查结果对比，看检查结果是否符合要求，重复性稳定性是否符合要求。
4 验证范围：适用于注射用水细菌内毒素检查方法验证，按照2010版药典附录细菌内毒素检查方法检查项下要求逐一进行。
5 验证结果的评价：根据药典合格标准来验证确认，确认检查方法检查结果的重现性稳定性是否符合要求。
适用性是否理想。
6 验证机构组成6.1验证委员会根据验证工作需要，常设验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织，负责审批验证方案和验证报告、发放验证证书。
验证委员会针对每一个具体验证项目成立专门的验证小组，负责该验证项目的验证方案起草，实施、组织与协调，负责验证结果记录与评定，负责完成验证报告。
6.2验证委员会组成：姓名部门及职务验证委员会中职务验证工作中职责6.4职责：6.4.1 验证委员会：6.4.1.1 负责验证方案的审批。
6.4.1.2 负责验证的总协调工作，以保证本验证方案顺利实施。
6.4.1.3 负责验证数据及结果的审核。
6.4.1.4 负责发放验证证书。
6.4.2 验证小组：6.4.2.1 负责验证方案的制定和实施。
6.4.2.2 负责验证工作的组织与协调。
6.4.2.3 负责验证数据的收集和结果评定。
6.4.2.4 负责完成验证报告。
7文件准备和培训7.1所需文件已准备齐全。
7.2培训：在确认实施前，依据验证小组通过的方案，对参加验证人员培训，明确分工。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
无菌、微生物限度、细菌内毒素方法学验证
问题：生长缓慢的判断标准？
敏感菌株与阳性对照菌
阳性对照菌不是验证试验选定的敏感菌 株
问题：降低了阳性对照菌的意义，实际 工作中抑制枯草芽孢杆菌的样品很多 （敏感菌株），但阳性对照只能选择金 黄色葡萄球菌。
关于大肠埃希菌的问题
供试品无菌检查中规定“抗革兰阴性菌 为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌”， 但在方法学验证中所用菌株没有大肠埃 希菌。 解决措施：抗革兰阴性菌的抗菌药物进 行方法学验证时增加大肠埃希菌。 即将修订，将铜绿假单胞菌修订为大肠 埃希菌。修订后按新方法执行。
问题：冲洗条件、冲洗量的选择
有些厂家提供的验证资料中，对非抑菌
性供试品也采用大量的冲洗，100ml/次 *10次/膜，增加了出现误差的机会。 1. 对膜的损伤 2. 检验方法繁琐，大大增加检验人员 的工作量（检验要按照已经验证的方法 进行） 3. 验证试验方法选择总的原则是由易 到难
结果判断：
与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均 生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下 无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检 查法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢 或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下
有抑菌作用。
消除供试品抑菌的方法
药品无菌和微生物限度检查法验证作为中国药 典2005年版增订的一项重要内容对促进我国药品 微生物检验的标准化是十分重要和必要的，执行
近一年以来的情况表明，方法验证是促使我国药
品无菌和微生物限度检查方法更加合理、科学和 严谨的重要途径。（2006年6月全国会议纪要）
中检所和药典会多次召开会议肯定工作的成绩、 研讨存在的问题，希望各级领导能给予高度重 视，从各方面支持这项工作长期持续发展。
4.细菌内毒素检测的相关验证
凝胶法干扰试验（1批次）
平行 管
1 2 平行 管
1 2 3 4
溶液C（内毒素标准品）
溶液D（阴性对照）
需要28支 反应管
E2λ
Eλ
E0.5λ
溶液A（供试品溶液） S ○ ○
溶液A（供试品溶液） S ○ ○
需要64支 反应管
溶液编号 溶液内容 平行管数
溶液编号 溶液内容 平行管数
24 湛江安度斯生物有限公司
凝胶法干扰试验
结果分析示例
B
S4E2λ
S4Eλ
S4E0.5λ
+
+
－
+
+
－
+
+
－
+
+
－
C
E2λ
Eλ
E0.5λ
+
+
－
+
+
－
最理想的无干扰 状况
5. 选择三批产品，进行干扰试验。
如有可能，请保留一个安全系数（选择≤1/2MVD的稀释倍数进行检测）。
*凝胶法干扰初筛试验中，可以选择任意灵敏度的鲎试剂。一般为了试验的方便，选择灵敏度低的鲎试剂。
17 湛江安度斯生物有限公司
凝胶法干扰初筛试验
平行
管
S1
1
○
溶液A（供试品溶液）
S2
S4
…
○
○
…
溶液D（阴性对照）
SMVD
检查用水
○
中国药典2019年版无菌、微生物限度及细菌内毒素检查方法学验证内容简介
菌名
分类
芽孢
对氧需求
铜绿假单胞菌 革兰氏阴性杆菌
无芽孢 需氧
枯草芽孢杆菌 革兰氏阳性杆菌
有芽孢 需氧
金黄色葡萄球菌 革兰氏阳性球菌
无芽孢 需氧
大肠埃希菌
革兰氏阴性短杆菌 无芽孢 需氧
生孢梭菌
梭菌
有芽孢 厌氧
2019年8月
17
菌种的要求： 传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的 冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保 藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
2019年8月
19
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜 面培养基上，23~28℃培养5～7天，加入3～ 5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然 后，吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉 花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无 菌试管内，用0.9％无菌氧化钠溶液制成每 lml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
2019年8月
15
无菌检查验证用菌株：
金黄色葡萄萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26 003]
铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10 104] **拟修订为大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63 501]
2019年8月
35
举例说明上市抽验样品无菌检查方法学验证检验量（液 体制剂）
≤1ml
每个菌10支,共60支（全取样）
1＜V＜5 共30（取样量为半量）
5≤V＜20 建议30（取样量为2ml，建议全部过滤）
20≤V＜50 建议30（取样量为5ml，建议全部过滤）
细菌内毒素验证
• 只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液 C的结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求时，试验方为有效。
• 干扰试验中我们需要对三批供试品，两个不同厂家的鲎试剂进行试验
干扰试验结果举例
例1、批号1——厂家1鲎试剂试验结果
鲎试剂灵敏度复核试验
• 根据鲎试剂灵敏度的标示值（ λ ），将细菌内毒素工作标准品加入1ml内毒素检查 用水溶解，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后按所用的鲎 试剂灵敏度2λ、λ、0.5λ、0.25λ进行稀释。0.1ml鲎试剂+ 0.1ml标准品，平行4管； NC： 0.1ml鲎试剂+ 0.1mlBET用水，平行2管37℃±1℃孵育60min±2min。
细菌内毒素方法验证
细菌内毒素验证基本程序
试验准备 计算MVD 初筛试验
确定样品内毒素限值
选择试剂
鲎试剂灵敏度复核试验
供试品干扰
干扰试验
结果判断
计算公式：MVD=cL/λ
MVD为供试品的最大有效稀释倍数，c为供试品溶液的浓度，L供试品的细菌内毒素限值。如果 计算在MVD时的供试品浓度，即最小有效稀释浓度，可使用公式MVc=λ /L.
Es= antilg (∑Xs/4) Et = antilg (∑Xt/4) （Xsl，g）Xt。分别为系列溶液反应终点浓度的对数值
---
阴性对照 -
正式干扰试验接受标准 当阴性对照4管为阴性，两组最大浓度2λ均为阳性， 最低浓度0.25λ均为阴性时，试验结果有效。Et/Es值 在0.5～2（包括0.5、2）之间为无干扰，反之为有干 扰
丹曲林钠细菌内毒素测定方法学验证
丹曲林钠细菌内毒素测定方法学验证目的通过检验、控制丹曲林钠原料药的内毒素水平以期控制注射用丹曲林钠的内毒素限值，因此需要建立丹曲林钠原料药的细菌内毒素验证方法。
方法用DMF溶解丹曲林钠至0.12mg/mL，以灵敏度为0.06EU/mL的两个厂家的鲎试剂，按照内毒素检测方法进行了鲎试剂灵敏度复核实验、溶剂干扰试验、样品干扰试验等方法学验证实验。
结果两个厂家鲎试剂的入c均为0.06EU/mL，在0.5～2入之内；采用上述方法进行验证，溶剂及样品均无干扰。
结论丹曲林钠原料内毒素验证需要DMF溶解样品，按照最低稀释浓度要求配制的供试品对内毒素的检测也没有干扰，因此可以判定可用该方法对本品进行内毒素检查。
标签：丹曲林钠；细菌内毒素；方法学验证；DMF[文献标识码]A丹曲林钠的商品名为Dantrium，是美国保洁（P&G）公司研制的药物，于1979年被美国FDA批准上市。
丹曲林钠用于治疗恶性高热。
恶性高热（malignant hyperthermia，MH）是一种严重的骨骼肌肉代谢亢进综合征，是一种常染色体显性遗传性疾病。
MH的发生主要是基于骨骼肌细胞内迅速且不可控的ca2+浓度增加，进而产生致死性的代谢亢进危象，在没有特异性治疗药物的情况下，一般的临床降温措施难以控制体温的增高，最终可导致患者死亡。
据报道，在接受全身麻醉的患者中MH发生率在1：10000到1：250000，且各地发生率各有差异。
有丹麦研究称MH发病率在1：250000，纽约的一项研究称MH发病率在1：100000，同时，另一项法国的研究发现全身麻醉中MH发生率可达1：10000，而且他们发现利用基因检测的方法预估其发病率应该在1：2000到1：3000之间。
近来，有研究称携带MH相关治病基因的几率可高达1：400。
丹曲林钠是特异性RYRl受体拮抗剂，是目前公认的治疗MH发作的特效药，它能够关闭RYRl 受体的异常开放，迅速减少肌质网释放Ca2+，从而终止MH发作。
注射用水内毒素检验方法验证方案
注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。
2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。
3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备➢将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。
➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。
6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。
细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。
6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。
6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。
细菌内毒素检测方法验证方案 定稿
细菌内毒素检测方法验证方案起草人：审核人：批准人：生效日期：文件分发范围：QA、QC1.验证目的：为确保细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此验证方案。
2.验证范围：适用于注射液细菌内毒素检测方法验证。
3.验证小组成员及职责：组长：，QC经理，负责协调小组的行动，跟进验证方案的审批流程，协调与其他部门及小组成员内的交流，组织验证数据并文件化。
组员：，QC人员，负责起草方案并按照确认方案进行验证，起草验证报告。
组员：QC微生物主管，负责验证方案与报告的审核，验证过程的复核。
4.验证依据：4.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.2《药品生产验证指南》(2003年版)4.4《细菌内毒素检验操作规程》（SN-O08-F0061-02）4.5《中国药典2010版二部》附录5.验证前准备：5.1人员培训确认：检查人：日期：复核人：日期：5.2仪器设备5.3检验材料、试剂及标准品6. 鲎试剂灵敏度复核：以上该批鲎试剂按《细菌内毒素检查法操作规程》（SN-O08-F0061-02）检查法的要求复核标示灵敏度，应符合规定。
《鲎试剂灵敏度复核记录》（SN-O08-F0061-R02-01）编号：。
灵敏度复核结果： EU/ml7.验证方法：通过比较内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对细菌内毒素（BET）检查有干扰，至少对3批样品进行干扰试验。
7.1供试品细菌内毒素限值和最大稀释倍数的确定（L）：7.1.1限值：每1mg中含细菌内毒素的量应小于30EU7.1.2供试品的最大有效稀释倍数（MVD）公式：MVD＝C*L/λ式中：C为供试品溶液的浓度（为2.5mg/ml），其中当L以EU/ml表示时，C为1.0ml/ml；当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位为mg/ml或U/ml，λ为鲎试剂的灵敏度。
7.1.3最大有效稀释倍数（MVD）计算结果：MVD＝CL/λ＝（2.5mg/ml*30EU/mg）/0.25 EU/ ml＝ 300倍7.2干扰试验7.2.1细菌内毒素标准溶液制备：取细菌内毒素工作标准品（160EU/ml）一支，开启，加入1ml 细菌内毒素检查用用水溶解，置旋涡混合器上混合15分钟，得到160EU/ml的内毒素标准溶液（以E160表示），用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ。
中国药典第二部分细菌内毒素检验方法
中国药典第二部分细菌内毒素检验方法
中国药典第二部分中包含了多种细菌内毒素检验方法，这些方法用于检测药物中是否含有细菌内毒素，以确保药品的质量和安全性。
以下是一些常见的细菌内毒素检验方法：
1. 破碎毒素检验法：将含有可能含有细菌内毒素的样品与敏感动物接触，观察是否有毒性反应。
这种方法已经有一定的局限性，并且不适合大规模的检验。
2. LAL试验法：利用与细菌内毒素特异性结合的激活酶酵素（LAL）来检测细菌内毒素。
这种方法基于生物反应原理，可以快速、准确地检测出细菌内毒素的存在。
LAL试验法是目
前最常用的细菌内毒素检验方法之一。
3. 细胞培养法：通过细胞培养技术，将待测样品与细胞共同培养，观察是否存在毒性反应。
这种方法可以模拟真实的细胞环境，对多种细菌内毒素具有较高的敏感性。
4. 放射免疫试验法：利用放射性标记的抗体与细菌内毒素结合，通过放射免疫分析技术来检测细菌内毒素。
这种方法可以进行定量测定，但需要使用放射性物质，操作较为复杂。
5. 特异性试验法：根据细菌内毒素的特异性，设计特定的试验方法进行检测。
例如，利用特定酶致黑色反应法检测棒状杆菌内毒素等。
以上是中国药典第二部分中常见的细菌内毒素检验方法，每种
方法都有其优缺点和适用范围，制药企业可以根据需要选择合适的方法来进行细菌内毒素检测。
细菌内毒素检测方法验证 (1)
目的---------------------------------------------------------------------------------------------------------范围---------------------------------------------------------------------------------------------------------责任人-----------------------------------------------------------------------------------------------------内容--------------------------------------------------------------------------------------------------------1.实验材料及用具-------------------------------------------------------------------------------------2.具体验证步骤-----------------------------------------------------------------------------------------2.1. 鲎试剂灵敏度复核------------------------------------------------------------------------------2.2..干扰实验---------------------------------------------------------------------------------------------2.3.供试品细菌内毒素检查--------------------------------------------------------------------------3. 验证结论----------------------------------------------------------------------------------------------附：表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验预实验表3.干扰试验记录表4.细菌内毒素检查记录目的：为确保注射用重组抗Her2单克隆抗体细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
2024版中国药细菌内毒素检查法验证方案
2024版中国药细菌内毒素检查法验证方案嘿，各位同行，今天咱们来聊聊细菌内毒素检查法验证方案，这可是咱们药界的大事儿。
作为一名有着10年方案写作经验的大师，我就来给大家详细梳理一下2024版的验证方案。
一、概述细菌内毒素检查法是一种用于检测药品、医疗器械等物品中细菌内毒素含量的方法。
它主要是通过检测细菌内毒素与鲎试剂发生凝集反应来实现的。
此方法具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等特点，广泛应用于药品质量控制。
二、验证目的1.验证细菌内毒素检查法的可靠性、准确性、重复性。
2.确定细菌内毒素检查法的适用范围。
3.为药品、医疗器械等物品的细菌内毒素限量提供科学依据。
三、验证方法1.鲎试剂法：采用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应，通过比色法或浊度法测定凝集程度，从而计算出细菌内毒素含量。
2.酶联免疫法：利用细菌内毒素与特异性抗体结合，通过酶联免疫反应测定细菌内毒素含量。
四、验证步骤1.验证实验材料：准备鲎试剂、细菌内毒素标准品、待测样品等。
2.验证实验方法：按照细菌内毒素检查法操作规程进行实验。
3.验证实验数据：记录实验数据，包括细菌内毒素标准品、待测样品的凝集程度、吸光度等。
4.数据处理：计算细菌内毒素含量，进行统计分析。
5.结果判定：根据细菌内毒素限量标准，判断待测样品是否符合要求。
五、结果判定及处理1.结果判定：细菌内毒素含量小于等于限量标准时，判定为合格；大于限量标准时，判定为不合格。
2.处理：对不合格样品，进行原因分析，采取相应的质量控制措施，确保产品质量。
下面，我来给大家举个例子，以便更好地理解这个验证方案。
假设我们要验证某药品的细菌内毒素含量，我们需要准备鲎试剂、细菌内毒素标准品、待测样品等实验材料。
然后，按照细菌内毒素检查法操作规程进行实验，记录实验数据。
计算细菌内毒素含量，与限量标准进行比较。
如果细菌内毒素含量小于等于限量标准，那么该药品判定为合格；如果大于限量标准，那么该药品判定为不合格，需要进一步采取措施进行质量控制。
细菌内毒素方法学验证方案
细菌内毒素方法学验证方案生效日期：再验证时间：审批表1．概述细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中应用广泛，本方案通过对无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检测，对生产过程进行质量控制。
因此对细菌内毒素检验方法的验证就显得尤为重要。
2．目的为了保证所购买的无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检验方法的专属性和灵敏性，且保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
3．范围本方案适用于无菌氯化钠溶液、配套药盒以及本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的无菌检查方法的验证。
4．确认小组成员与职责成立确认小组，明确各成员及相应职责。
5．参考文件5.1确认与验证管理规程5.2《中国药典》2010年版二部附录XI E6．验证所需仪器和材料6．1验证中所用到的仪器：电子天平、电热干燥箱、恒温水浴箱、水银温度计和旋涡混合器，验证所涉及到的仪器均经过检定或确认合格，且在有效期内。
6．2验证所需试剂：具有国家主管部门的批准文号的鲎试剂和由中国药品生物制品检定所统一发放的细菌内毒素工作标准品。
7.验证标准在实验结果中，必须要阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。
8.验证步骤8.1实验前准备验证前首先要进行细菌内毒素标准品的制备，内毒素限值的确定。
然后确认鲎试剂是否进行灵敏度复核和干扰试验。
确定干扰试验中的最大稀释倍数（MVD）。
8.1.1根据2010年版中国药典二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中规定，细菌内毒素限值计算公式：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，本品以EU/mg表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU/（kg．h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。
注射时间若不足1小时，按1小时计算。
本品以腺苷蛋氨酸计最大剂量为1000mg。
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细菌内毒素方法学验证方案
生效日期：
再验证时间：
审批表
1．概述
细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中应用广泛，本方案通过对无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检测，对生产过程进行质量控制。
因此对细菌内毒素检验方法的验证就显得尤为重要。
2．目的
为了保证所购买的无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检验方法的专属性和灵敏性，且保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
3．范围
本方案适用于无菌氯化钠溶液、配套药盒以及本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的无菌检查方法的验证。
4．确认小组成员与职责
成立确认小组，明确各成员及相应职责。
5．参考文件
5.1确认与验证管理规程
5.2《中国药典》2010年版二部附录XI E
6．验证所需仪器和材料
6．1验证中所用到的仪器：电子天平、电热干燥箱、恒温水浴箱、水银温度计和旋涡混合器，验证所涉及到的仪器均经过检定或确认合格，且在有效期内。
6．2验证所需试剂：具有国家主管部门的批准文号的鲎试剂和由中国药品生物制品检定所统一发放的细菌内毒素工作标准品。
7.验证标准
在实验结果中，必须要阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。
8.验证步骤
8.1实验前准备
验证前首先要进行细菌内毒素标准品的制备，内毒素限值的确定。
然后确认鲎试剂是否进行灵敏度复核和干扰试验。
确定干扰试验中的最大稀释倍数（MVD）。
8.1.1根据2010年版中国药典二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中规定，细菌内毒素限值计算公式：
L=K/M
式中
L为供试品的细菌内毒素限值，本品以EU/mg表示；
K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU/（kg．h）；
M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。
注射时间若不足1小时，按1小时计算。
本品以腺苷蛋氨酸计最大剂量为1000mg。
L=5EU/（kg．h）*60kg*1h/1000mg=0.3EU/mg因此本品的细菌内毒素限值为
0.3EU/mg。
8.2.2确定最大有效稀释倍数（MVD）
样品溶液的制备：取注射用********适量（约相当于含腺苷蛋氨酸500mg）加入注射用溶剂5ml，再用细菌内毒素检查用水稀释至每1ml含腺苷蛋氨酸10mg的溶液。
本品内毒素限值为0.3EU/mg。
MVD=cL/λ
L=0.3EU/ml c=10mg/mlλ1=0.5EU/ml，λ2=0.25EU/ml 因此MVD1=6，MVD2=12
8.1.3细菌内毒素标准溶液的制备
取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
8.2细菌内毒素检查
在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
8.2.1.操作方法
8.2.1.1制备内毒素标准对照溶液
取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（方法同8.1.3）。
8.2.1.2.供试品溶液的制备：（稀释倍数不得超过MVD）
取注射用********加入注射用溶剂并制成每1ml含腺苷蛋氨酸10mg的溶液，再根据MVD加入细菌内毒素检查用水稀释，再用此稀释液将8.2.1.1中的同支细菌内毒素
标准品稀释成4个浓度即2λ、λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液。
8.2.1.3. 阳性对照溶液的制备
用检查用水将内毒素标准品稀释制成2λ浓度的内毒素标准溶液（方法同8.2.1.1.）。
8.2.1.4.供试品阳性对照溶液的制备
用待检测的供试品溶液或其稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度的内毒素溶液。
（方法同8.2.1. 3. 供试品阳性对照溶液的制备）。
8.2.1.5.阴性对照液用细菌内毒素检查用水
8.2.1.6.鲎试剂的准备
取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
8.2.1.7.加样
取8支（管）溶解好的鲎试剂，其中2支加入0.1ml供试品溶液或其稀释液（其稀释倍数不得超过MVD）作为供试品管，2支加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管（PC），2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照管（NC），2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管（PPC）。
8.2.1.8.将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，保温60±2分钟。
保温和取放试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
8.2.2. 结果判断
8.2.2.1.判断标准
当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。
若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供试品2 管均为阳性，应认为不符合规定；如2 管中1管为阳性，1 管为阴性，按上述方法另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。
若第一次实验时供试品的稀释倍数小于MVD而结果出现2 管均为阳性或2管中1管为阳性时，按同样方法复试，复试时要求将其稀释至MVD。
8.2.2.2.判断结果：（记录附后）
9.确认总结
对每一项测试结果均应有记录和签名，并与相应标准做比较，最后给出合格与否的结论。
10．质量保证：质量保证员对验证过程进行复核并签名，以证明该验证方案已被执行，从而说明细菌内毒素检验符合生产要求。
11．背离标准的处理
在验证过程中，若与标准存在偏差、例外等情况时，都要作好相应的记录。
对于超出标准规定误差的，则应填写记录并制定纠错方案，任何对背离标准所采取的纠正措施都必须经质量管理部经理的批准。
12．验证报告
12．1验证目的。
12．2验证范围。
12．3验证记录。
12．4验证情况综述。
12．5验证结果。
12．6偏差及异常处理措施。
12．7评价及建议。
12．8验证结论及再验证时间。
12．9验证报告的审核和批准：验证报告由质量保证员审核签字，质量管理部经理批准签字。
12．10验证报告经审核批准后，归档保存。