蛋白亚细胞定位方法
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1.挑单克隆斑加到30ml LB中，加AMP。37℃摇过夜。
2.分别取15ml菌液加到1L的LB中，加AMP，继续在37℃下摇至OD600=0.5-0.6,严格
控制OD。
3. 加IPTG，使终浓度达到0.2mM , 18℃摇过夜。
4. 在4℃下以7700 × g (e.g. 8000 rpm)离心10min.
5. 弃去上清，放在冰上。
6. 加入30~50ml ice-cold 1× PBS，用移液器悬浮细胞。
7. 用超声波超生。取一部分超生后的产物用SDS-PAGE检测。
8. 向溶液中加入20%的Trion x-100，使终浓度达到1%。Mix gently for 30 min to aid in solubilization of the fusion protein。应该是在冰上。
9. 10 000 rpm 离心for 10 min at 4 °C. 转移上清到一个新的容器中。
1× PBS (ice-cold): Dilute 10× PBS with sterile H2O. Store at 4 °C.
10× PBS is 1.4 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4, pH 7.3.
1×PBS is 140 mM NaCl ; 2.7 mM KCl; 10 mM Na2HPO4; 1.8 mM KH2PO4, pH7.3
1L, 1×PBS配方如下：称取NaCl 8.18g; KCl 0.2g; Na2HPO4.12H2O 3.58g ;
KH2PO4 0.245g 溶于800ml水中，用HCl调节PH=7.3，最后加蒸馏水定容至1L,高温高压灭菌。