蛋白质和核酸的含量测定方法课件

【实验原理】
• 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭 双键系统，能吸收紫外光，RNA和 DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。 一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024， 每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约 为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA 溶液在260nm的光吸收值即可计算出 其中核酸的含量。
• 因为食品中除蛋白质外，还含有其 它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋 白。
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三、仪器与试剂
• （一）试剂 • 1、硫酸铜（CuSO4·5H20） • 2、硫酸钾 • 3、硫酸（密度为1.8419g/L） • 4、硼酸溶液（20g/L） • 5、氢氧化钠溶液（400g/L） • 6、0.01mol/L盐酸标准滴
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• 蛋白质（protein）是生命的物质基础，没
有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及 与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物 质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部 分都有蛋白质参与。 • 核酸是许多核苷酸聚合成的生物大分子化 合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛 存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生 物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
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蛋白质——
目前常用的方法有凯氏定氮法、双 缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯 亮蓝法(Bradford)。
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凯氏定氮法_原理
• 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓 硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白 质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫 酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏 使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸 标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘 以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
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仪器及试剂
1.实验器材 离心机, 离心管,紫外分光光度计； 2.实验试剂 (1)钼酸氨—高氯酸试剂(沉淀剂)：如配
制200ml，可在193ml蒸馏水中加入 7ml高氯源自文库和0.5g钼酸氨。 (2)5%~6%氨水
定溶液。 • 7、混合指示试剂：0.1%甲
基红乙溶液液1份，与0.1% 溴甲酚绿乙醇溶液5份临用 时混合。
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反应机理
• （二）仪器
• 微量定氮蒸馏装置：如图所 示。
• 1、电炉； 2、水蒸气发生 器（2L平底烧瓶）；3、螺 旋夹a；
•
4、小漏斗及棒状玻璃
塞（样品入口处）；5、反
应室；6、反应室外层；
•
7、橡皮管及螺旋夹b；
8、冷凝管；9、蒸馏液接
收瓶。
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核酸——
• 核酸测定常用方法有定磷法、定糖 法、紫外吸收法。
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