色谱柱的使用及保养

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色谱柱的使用和维护

色谱柱的使用和维护

色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具,广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。

为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命,以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。

一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理,以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。

常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。

激活后,需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。

2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。

首先,要确保样品的纯度和浓度,以避免对色谱柱产生污染。

其次,对于有机溶剂溶解的样品,最好使用过滤器进行过滤,以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。

3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。

根据需要分离的组分特性,选择合适的流动相性质和组成,并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。

此外,注意保持流动相的流速稳定,并定期更换或再生。

4.检测器的设置根据需要检测的组分,选择合适的检测器并进行适当的设置。

常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪(UV-Vis)、荧光检测器、质谱仪等。

在使用检测器前,要确保其正常工作并进行校准。

5.流量控制使用色谱仪时,应保持流量的稳定性。

定期检查和校准流量控制器,并调整至适当的设置,以确保色谱柱正常运行。

6.色谱条件的优化根据分析需要,在保证分离效果的前提下,进行色谱条件的优化。

包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等,以提高分离效果和保护色谱柱。

二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后,应进行洗脱以去除残留的样品和杂质,并用适当的溶剂进行平衡。

洗脱和平衡步骤的操作要轻柔,避免使用高压流动相进行冲洗。

对于一些特殊样品,如蛋白质和多肽,可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。

2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时,应注意以下几点:首先,将色谱柱从设备上拆卸下来,用纯净溶剂充分洗脱并平衡,保证柱内干净;其次,封闭柱两端,避免进入灰尘和空气,可以使用柱塞或盖子进行封闭;最后,将柱放置在干燥、阴凉的地方存放,避免受到阳光直射和高温。

常用液相色谱柱使用与保养

常用液相色谱柱使用与保养

常用液相色谱柱使用与保养液相色谱(Liquid Chromatography,简称LC)是一种分离和分析物质的方法,广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。

在液相色谱系统中,色谱柱是其中最为重要的组成部分之一,对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。

因此,正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。

一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型,如反相、离子交换、凝胶、手性等。

选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。

2.考虑色谱柱尺寸,如柱径和柱长。

柱径越小,理论板高度越高,分离效果越好,但同时也容易增大柱后压力。

柱长则决定了分离时间,通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。

3.考虑色谱柱填充物,如C18、C8、C4等反相填料。

填充物的理化性质不同,会对分离效果产生影响。

根据样品性质和分离目标选择填料。

二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观,确保柱壁完好无损,无裂缝或损坏。

同时检查柱头端口是否干净,无污物残留。

2.进行柱前的处理,如样品预处理和溶剂预处理,保证样品的稳定性和纯度,避免对色谱柱产生不利影响。

3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱,以免对柱填料产生机械损伤。

4.在柱温控制装置的帮助下,保持色谱柱运行温度的稳定,以确保分离结果的重复性和再现性。

三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。

使用前,色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方,避免阳光直射。

使用后,将色谱柱用保护帽覆盖,防止灰尘、气体和湿气进入柱内。

中间暂停使用时,用适当的主流溶液保养柱床,避免干燥。

保养柱床时需将色谱柱倒放,使柱床保持湿润状态。

2.避免在色谱柱上溢液,以免引起柱床断裂或填料活化。

使用前,尽量将样品溶液过滤或超声处理,避免样品中存在大颗粒杂质。

3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量,避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。

对于需要多次使用的色谱柱,洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。

凝胶填料凝胶色谱柱安全操作及保养规程

凝胶填料凝胶色谱柱安全操作及保养规程

凝胶填料凝胶色谱柱安全操作及保养规程1. 引言凝胶填料凝胶色谱柱是一种常用的色谱柱,广泛应用于生物分离和分析领域。

本文档旨在介绍凝胶填料凝胶色谱柱的安全操作方法和保养规程,以确保实验过程的安全和凝胶柱的稳定性。

2. 安全操作2.1 实验室准备在使用凝胶填料凝胶色谱柱前,确保实验室器材完整、清洁,并检查色谱柱是否完好无损。

2.2 操作前准备在操作凝胶填料凝胶色谱柱前,采取以下预防措施:•佩戴实验室安全眼镜和手套;•确保色谱仪和其他相关设备的连接稳固;•准备好实验材料和试剂,确保其纯度和质量;•检查色谱柱是否已经充分平衡。

2.3 样品处理在样品处理时,需要注意以下事项:•遵循相关实验室操作规程,避免接触有害物质;•样品处理过程中,注意避免温度和湿度的极端变化,以免对凝胶填料产生不利影响;•样品处理后,确保液相色谱柱表面干净,没有残留物。

2.4 色谱柱装配和操作在进行色谱柱装配和操作时,需要注意以下事项:•色谱柱装配前,仔细阅读和理解相关操作手册,确保正确安装;•操作过程中,避免使用过大的压力,以免对凝胶填料造成破坏;•遵守色谱柱的使用限制,避免超过推荐的最高压力和流量。

2.5 操作后处理在操作结束后,需要进行适当的柱后处理:•柱后处理方法包括清洗、平衡和存储;•根据实验室具体情况和要求,选择合适的柱后处理方法;•柱后处理方法的选择应遵循色谱柱供应商的建议和要求。

3. 保养规程为了保持凝胶填料凝胶色谱柱的稳定性和延长使用寿命,需要定期进行保养。

3.1 柱前准备在进行保养前,需要进行柱前准备工作:•仔细查看柱后处理方法,了解柱前准备工作的具体要求;•清洗色谱柱外部表面,确保干净无尘;•根据实验室的要求,检查和更换色谱柱的连接器、垫圈等附件。

3.2 柱后处理柱后处理是保养凝胶填料凝胶色谱柱的重要步骤:•依据实验情况和需要,选择合适的柱后处理方法;•清洗色谱柱,使用适当的溶剂和方法,去除残留的样品和杂质;•均匀平衡色谱柱,以保证凝胶填料的稳定性和柱效;•注意避免对色谱柱施加过大的压力,以免导致柱损坏。

毛细管柱气相色谱柱安全操作及保养规程

毛细管柱气相色谱柱安全操作及保养规程

毛细管柱气相色谱柱安全操作及保养规程1. 引言毛细管柱是气相色谱分析中常用的分离柱之一,具有高分离效率和广泛的应用范围。

为了确保分析结果准确可靠,并延长毛细管柱的使用寿命,正确的操作和良好的保养非常重要。

本文将介绍毛细管柱的安全操作和保养规程,以帮助用户正确使用和维护毛细管柱。

2. 气相色谱仪操作注意事项在进行毛细管柱气相色谱分析时,需要注意以下几点:2.1 处理样品•样品应以合适的溶剂溶解,并过滤以去除杂质,避免对毛细管柱产生污染。

•不要使用对毛细管柱有腐蚀性的样品,以免损坏柱子。

•样品注入时要避免产生气泡,气泡会影响分析结果。

2.2 设定合适的分析条件•确保柱温、进样量、流速等分析条件合适,避免超负荷操作。

•柱温过高可能导致柱子损坏,柱温过低可能导致分离不完全。

2.3 安全操作•在操作气相色谱仪前,确保仪器连接正常,无泄露情况。

•注意使用正确的毛细管柱连接方式,并确保连接处密封良好。

•避免在高温下触摸柱子,以免烫伤。

•在柱子更换或维护时,确保仪器处于关闭状态,并按照操作说明进行操作。

3. 毛细管柱的保养和维护正确的保养和维护可以延长毛细管柱的使用寿命,并提高色谱分析的准确性。

3.1 使用合适的进样量•进样量过大可能导致柱子堵塞,进样量过小可能导致峰形变尖。

•根据样品的浓度和目标分析结果,选择合适的进样量。

3.2 定期进行柱子空白运行•定期进行柱子空白运行,以去除附着在柱子壁上的有机杂质。

•空白运行时,不要注入任何样品,只用纯溶剂进行柱子洗脱。

3.3 避免柱子超负荷操作•超负荷操作容易导致柱子失效和损坏。

•根据分析的需要,选择合适的柱长和直径,以免过载柱子。

3.4 定期检查气相色谱仪的背压•过高的背压可能说明柱子已经损坏,需要更换。

•检查背压时,确保仪器处于关闭状态,以免发生意外。

3.5 定期更换柱子•根据使用情况和分析结果,定期更换毛细管柱。

•柱子使用寿命一般为几百到几千个样品,超过使用寿命可能导致分离效果下降。

液相色谱柱的使用及保养

液相色谱柱的使用及保养

C18, C18, C18, C18,
phenyl, CN, NH2, Silica C8, phenyl, CN, Silica C8, Silica C4 C18, C8
色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法
先用甲醇洗去极性杂质
回收率低,不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱以外的因素(一)
“柱效”问题,不一定是色谱柱问题!
仪器问题:连接不好造成死体积
进样器
检测器
管路,连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
流动相问题:色谱柱未平衡好 进样量太大
色谱柱与仪器的联接
影响实验结果好坏的最重要因素
是决定性的步骤
样品预处理常用的方法
高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-固萃取 其他
/ 液-液萃取
Sep-Pak样品处理小柱
样品预处理的过程
去除微粒
过滤
过滤膜/过滤装置
有机(0.5m)/无机(0.45m)
膜片可更换
流速∶1.0 ml/min 纸速∶20 cm/min (用记录仪时,接检测器10mV档) 检测器灵敏度∶0.5-1.0AUFS (用记录仪时) 检测器时间常数∶小于0.2

谱带展宽(ml) =1000×W(cm)/20 (记录仪) =1000×W(min) (工作站)
液相色谱实用技术(二)
样品衍生∶氨基酸分析
PT法 IA CG O方 NS C
R
-
N C H O CO ຫໍສະໝຸດ 2氨 基 酸异酯 硫 氢 酸 苯
S R N H O H C C H NC O

色谱柱使用管理规程

色谱柱使用管理规程

色谱柱使用管理规程一、目的和适用范围为了规范色谱柱的使用,确保色谱分析的准确性和可靠性,特制定本管理规程。

本规程适用于实验室中使用的各类色谱柱。

二、工作原则1.资源共享:实验室内的色谱柱应尽量共享使用,避免重复购买。

2.保养维护:色谱柱在使用过程中应定期进行保养维护,延长其使用寿命。

3.检查验证:每次使用色谱柱前应进行检查和验证,确保其正常工作。

4.数据记录:使用色谱柱进行分析时应详细记录相关数据,以备后续分析和验证使用。

三、色谱柱的存储和保养1.存储条件:色谱柱应存放在干燥、阴凉、避光的地方,远离酸碱等有害物质。

2.温度控制:色谱柱应避免暴露在高温环境中,存放温度一般不超过30℃。

3.包装保护:未使用的色谱柱应保持原包装完整,避免受潮、损坏等情况。

4.清洗方法:使用完毕的色谱柱应及时进行清洗,避免残留物对下次使用的影响。

5.使用周期:色谱柱的使用周期应根据实际情况确定,一般建议每个色谱柱使用不超过100次。

四、色谱柱的检查和验证1.外观检查:每次使用色谱柱前应检查其外观是否完好,如有破损应立即更换。

2.连接检查:色谱柱的连接部分应检查是否松动,如有松动应重新连接或更换。

3.确认类型:使用色谱柱前应确认其类型和规格是否符合实验需求。

4.验证方法:使用标准样品对色谱柱进行验证,确认其分离效果和分析准确性。

五、色谱柱的使用记录1.样品信息:每次使用色谱柱时应记录样品的基本信息,包括样品名称、浓度、体积等。

2.柱温记录:记录色谱柱的运行温度,以便后续分析结果的比对和验证。

3.运行参数:记录色谱柱的运行参数,包括流速、时间梯度等。

4.分离效果:记录色谱柱的分离效果,包括峰形、峰高、峰面积等。

5.结果分析:对色谱柱的分析结果进行详细分析,包括峰的识别、定量等。

六、色谱柱的报废和更新1.报废标准:当色谱柱使用寿命超过预设次数或出现严重损坏时,应报废。

2.更新周期:实验室应定期更新色谱柱,以保证分析结果的准确性和可靠性。

制备色谱柱安全操作及保养规程

制备色谱柱安全操作及保养规程

制备色谱柱安全操作及保养规程色谱柱在化学实验和制药工业中扮演着重要的角色,它可以分离和纯化复杂混合物中的化合物。

然而,操作和保养色谱柱需要严格的流程和规范。

在本文中,我们将讨论从制备到保养的完整操作过程。

制备色谱柱首先,我们需要选择合适的柱子。

色谱柱的种类和尺寸取决于你需要分离/纯化的样品和所使用的分离方法。

一般来说,柱子材料为不锈钢、玻璃、铝等。

接下来,我们需要将固相填充物装入柱子中。

固相填充物有许多种,包括硅胶、活性炭、聚合物等。

在装填填充物的时候,我们需要注意以下几点:1.选择合适的填充物,确保其与样品有良好的相容性。

2.将填充物均匀地分布在柱子中。

3.压实填充物,以确保其在操作过程中不会移动或塌陷。

完成填充后,我们需要确保柱子的密封性。

将以上步骤完成后,在柱子两端加上闭合件,使其密封,以防止填充物从柱子中溢出。

色谱柱保养正确的色谱柱保养可以延长其使用寿命并确保分离效果。

下面是一些色谱柱保养的基本操作:1. 养护使用结束后,应用适当的溶液溶洗柱子,包括向上冲洗和向下冲洗两种方式。

在任何情况下,都不要让洗涤剂在填充物被浸泡的时间过长,防止填充物被腐蚀或松动。

洗涤后,再进行适当的干燥和保护。

2. 存储在某些情况下,色谱柱不会在一个系列中立即使用。

这时,色谱柱需要被存储到一定时间,以免发生填充物沉淀,水分被吸入或杂质被附着。

在存储时,应将关闭的保护端部分涂覆防护油并放入干燥的柜子或存储盒中。

3. 清洁清洁柱子时,可以用棉花棒蘸取丙酮或甲醇进行清洗。

不仅柱子内部要经常清洗,柱子外壁也需定期清洗。

另外,要定期更换管道系统中的滤膜和O型圈,以期达到更好的分离效果。

4. 细心呵护请务必小心操作颈间滩部分。

从柱体实验中移除柱盖或回收废料的过程中,应轻压手膜,以避免损坏或断裂中间滩住它。

下降移除柱塞(并且还原其位置)时,切勿使用过大的力度,以及重新使用不当的螺纹或生锈的金属件(会削弱覆盖性)。

总结以上内容包含了色谱柱的安全操作和保养规程,应该能够让你了解并规范化色谱柱的操作和保养。

菲罗门色谱柱安全操作及保养规程

菲罗门色谱柱安全操作及保养规程

菲罗门色谱柱安全操作及保养规程作为常用的色谱分析仪器之一,色谱柱在实验室中扮演着非常重要的角色。

而菲罗门色谱柱作为市场上主流的色谱柱品牌之一,其安全操作和保养也是不可忽视的。

本文将详细介绍菲罗门色谱柱的安全操作和保养规程,以确保在实验室使用过程中更加安全稳定。

安全操作1. 储存在储存菲罗门色谱柱时,需要避免在高温、寒冷、潮湿的环境下,尽量保持储存环境干燥、温度适宜。

存放前色谱柱表面应清洗干净,打包并密封包装好,防止灰尘、灰泥等物质进入色谱柱中,对色谱柱表面和填充物造成危害。

2. 连接色谱柱连接时,要确保连接件紧密,并且连接部位不得有污染物。

此外,连接管件需要适配色谱柱口径和螺纹。

连接前,检测连接件和色谱柱口径和螺纹是否一致,连接顺序正确,并且连接紧固。

3. 使用使用菲罗门色谱柱时,如果色谱柱压力超过色谱柱规定的最大工作压力,将会对色谱柱造成损害。

同时,在色谱柱使用过程中,避免使用大容积样品或者反应物进行分析分离,因为这样会导致样品或反应物沉积在色谱柱的孔隙中,影响色谱柱的分离效果。

另外,需要避免使用粘附性或骨架支撑的样品。

对于孔隙较小的色谱柱,使用前需要进行预准备,按照使用方法进行编程操作。

4. 预准备孔隙较小的色谱柱使用前需要进行预准备。

预准备可以清除色谱柱表面净化剂,并且可以除去填充物中的碎屑、灰尘等杂质。

预准备过程一般分为以下几步:1.将色谱柱安装到LC仪器中。

2.在LC仪器的控制界面上选择并启动“初次运行”程序。

3.按照“初次运行”程序引导进行操作。

5. 维护和保养维护和保养对于保证色谱柱的稳定运行非常重要。

安装和卸载安装和卸载菲罗门色谱柱时,需要注意色谱柱连接件和色谱柱螺纹的对应,防止损坏柱口和连接件。

安装完成后需要对连接件逐一检查,确保连接紧密。

洗涤色谱柱使用了一段时间的色谱柱,会因为样品和反应物的沉积而降低分离效果,因此需要定期进行洗涤。

洗涤时,可使用适当的溶剂,添加洗涤剂加强去污功能,手动地逆流进行洗涤。

色谱柱的使用说明

色谱柱的使用说明

1、色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。

在使用前,一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。

在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。

(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。

如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。

另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0,BDS C18适合于碱性化合物,PH值适用范围为2.0-10.0。

当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。

(3)样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。

在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。

2、色谱柱的保存(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。

注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。

(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。

对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。

储存的温度最好是室温。

3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。

色谱柱维护保养方法

色谱柱维护保养方法

色谱柱维护保养方法色谱柱维护保养非常重要,可以延长其使用寿命,并确保分离效果和分析结果的准确性。

以下是常见的色谱柱维护保养方法:1. 色谱柱的储存:如果打算长时间不使用色谱柱,可以将其封装,并储存在干燥、避光和温度适宜的地方,以防止柱内填料受潮、变质或分层。

2. 柱前保护:可以在色谱柱前端安装一个柱前保护器,以延长色谱柱的使用寿命。

柱前保护器可以过滤掉样品中的大颗粒物质,防止其对色谱柱造成损害,并保护柱后的检测器。

3. 样品预处理:对样品进行合适的前处理,如过滤、稀释、净化等,可以减少对色谱柱的损害,减轻色谱柱的负担。

4. 样品pH调节:合适的pH值可以增强样品的溶解性,降低颗粒物质的沉淀和析出,从而延长色谱柱的使用寿命。

但要注意不要超出色谱柱的pH范围限制。

5. 洗脱溶剂选择:选择适合的洗脱溶剂可以有效地清洗色谱柱,去除残留物质,恢复柱性能。

常用的洗脱溶剂包括纯水、有机溶剂、缓冲液等。

选择洗脱溶剂时,要注意其对色谱柱填料的溶解性以及对分离结果的影响。

6. 色谱柱的受控使用:在使用色谱柱进行分析时,要注意避免超过柱压和最大样品容量的限制,避免样品直接接触到填料床层面,避免样品中含有腐蚀性物质等。

7. 定期检查:可以定期检查色谱柱的性能,如检查柱背压、峰形、峰对称性、分辨率等。

8. 色谱柱的再生:当色谱柱分离效果下降时,可以尝试使用一些再生方法,如洗脱溶剂冲洗、温度升高、pH调节等,以恢复色谱柱的分离能力。

以上是色谱柱维护保养的一些常见方法,实际操作时应根据具体的色谱柱类型和样品特性进行调整。

此外,根据色谱柱供应商的建议和操作手册,进行正确的操作和保养也是非常重要的。

液相色谱柱空柱管安全操作及保养规程

液相色谱柱空柱管安全操作及保养规程

液相色谱柱空柱管安全操作及保养规程液相色谱柱是分析化学中经常使用的重要设备,其常用的配件之一是空柱管(Guard Column)。

空柱管可以保护主色谱柱,延长柱的寿命,同时也能提高柱的效率和稳定性。

本文将介绍液相色谱柱空柱管的安全操作及保养规程。

安全操作1. 安装空柱管液相色谱柱空柱管安装时,应先检查空柱管是否与主柱相匹配。

安装时,必须将空柱管正确地插入到接头处,并根据需要使用节流器或其他辅助装置。

2. 清洗空柱管清洗空柱管前,应注意不要将空柱管曝露在环境中,以免产生污染或其他影响。

清洗前必须确保气泡全部排出,并注意规定好的洗涤程序和清洗方法。

在空柱管使用前,一定要彻底清洗干净以避免污染主柱。

3. 更换空柱管在某些情况下,空柱管需要更换。

更换空柱管时,必须按照规定程序操作,并注意不要弄掉其他柱的接头,否则会影响色谱的稳定性和准确性。

在更换空柱管后,要重新安排柱的顺序,并按照规定的程序对色谱仪进行校准。

保养规程1. 常规检查为了保证色谱柱的稳定性和可靠性,需要对色谱柱进行常规检查。

检查时,应注意柱是否完好无损,是否存在破损或者漏气现象。

如发现异常情况,则需要进行下一步的清洗或维护。

2. 空柱管更换周期空柱管的更换周期需要根据具体情况而定。

一般情况下,建议每60-80次分析进行一次空柱管的更换,以保证样品的准确性和色谱分离的稳定性。

3. 定期清洗为了保证色谱柱的性能稳定,还需要对色谱柱进行定期清洗。

在正常使用情况下,建议每30天对色谱柱进行一次清洗,以确保色谱柱的稳定性和可靠性。

4. 保护柱柱罐为了避免磕碰或者其他损伤情况的发生,建议在移动柱柱罐时,在外部加上一层保护罩或者泡沫垫,使柱罐更加稳定、更加可靠。

5. 清洗柱柱罐在某些情况下,柱柱罐需要进行清洗。

清洗柱柱罐时,一定要使用专业工具和清洗液,不要随意选择清洗方法,以免对柱柱罐产生影响。

总结液相色谱柱空柱管是液相色谱技术中的重要设备之一,其保养和操作都非常重要。

气相相色谱柱使用及 维护保养

气相相色谱柱使用及 维护保养

气相相色谱柱使用及维护保养
气相相色谱柱是一种常用的分析仪器,用于分离和测定复杂混合物中的化合物。

以下是气相相色谱柱的使用和维护保养的一些建议:
1. 使用前准备:
- 检查色谱柱的完整性和连接件的密封性,确保没有破损或
泄漏。

- 确保色谱柱与色谱仪的连接正确并牢固。

- 根据样品的性质和分析目的选择适当的色谱柱类型和尺寸。

2. 柱的调节和条件设置:
- 在使用新柱或长时间未使用的柱之前,进行柱的调节步骤。

柱调节可以提高分离效果并确保分析结果的准确性。

- 根据分析所需的温度、流速、进样量等条件调整色谱仪,
以获得最佳的分辨率和分离效果。

3. 样品进样:
- 样品进样前必要时进行预处理,如样品制备、溶解、过滤等。

- 样品进样应注意避免超量进样或进样带入杂质,以免对柱
产生堵塞或污染。

4. 定期清洗和保养:
- 定期进行柱的清洗和保养,以保证柱的寿命和分离性能。

- 清洗时可以使用合适的溶剂(如甲醇、乙醇等)进行反向
和正向冲洗,以去除残留的样品和杂质。

- 清洗后应彻底干燥柱,避免水分残留。

5. 储存和保管:
- 当柱不使用时,应用适当的保护盖盖上色谱柱,以防止灰尘和杂质的进入。

- 存放时建议选择干燥、避光和温度稳定的环境。

总的来说,正确的使用和定期的维护保养可以延长气相相色谱柱的寿命,并保持良好的分离效果和分析结果的准确性。

如果遇到柱效退化或出现异常,建议及时更换或联系厂家技术人员寻求解决方案。

气相色谱柱操作保养规程

气相色谱柱操作保养规程

气相色谱柱操作保养规程前言气相色谱技术在很多领域都有广泛的应用,其中色谱柱是气相色谱仪的重要部件之一,因此色谱柱的保养和操作都很重要。

本文旨在介绍气相色谱柱的基本操作和保养规程,以确保色谱柱顺利运行和延长其使用寿命。

操作规程1. 色谱柱的安装•将色谱柱拆封,并用纯净的溶剂洗涤,使其内部和外部表面充分清洁。

•检查色谱柱接口处是否有磨损和气密性是否良好。

如有问题,可更换色谱柱接口。

•将色谱柱安装在气相色谱仪上,并根据仪器提示调整柱温。

注意柱温过高或过低都会影响分离效果,因此需要调整至合适温度。

通常情况下,使用随机配送的样品时,可按照常规方法使用色谱柱。

2. 色谱柱的使用•每次使用前需用纯净的溶剂逆流洗涤色谱柱,一般使用甲醇、氯仿、乙醇、苯等溶剂。

洗涤条件由经验决定,但使用的溶剂应为分析中未使用的常规溶剂。

•进样前需使用样品稀释液将待测样品稀释至适当浓度,并过滤除杂质。

进样体积应适当,过大和过小都会影响分离效果,通常为1~2 μL。

•在分离过程中,严禁强力摇晃色谱柱,避免色谱柱内填料损坏或位移。

同时,气相色谱仪在运行时应保持稳定,避免震动对实验结果造成影响。

3. 色谱柱的维护•每次使用后,需用纯净的溶剂逆流洗涤色谱柱,将样品及产生的残留物质彻底洗净。

•长时间停机或更换柱上填料时,应将色谱柱用纯净的甲醇进行保护,以免柱上的填料发生任何变化。

•定期检查色谱柱的气密性,如出现泄漏等情况应及时更换接口和密封圈。

•如果柱温调节不准确,需要进行柱温校正,或者进行柱温热偏移修正。

结语本文介绍了气相色谱柱的操作保养规程,包括色谱柱的安装、使用和维护等方面。

这些规程对于保持色谱柱良好运行状态,延长其使用寿命有着重要的意义。

若出现任何异状,应及时处理或更换。

希望本文能够为气相色谱柱的使用者提供一定的帮助。

高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养

高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养

高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养高效液相色谱仪色谱柱的正确操作色谱柱是高效液相色谱仪最紧要的部件,被测物质能否被很好的分别和测定,色谱柱的性能起着决议性的作用。

因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维护和修理保养,以延长色谱柱的使用寿命。

1、使用预柱和保护柱预柱(pre—column)安装于泵和进样器之间,它给色谱柱中的流动相供应了完全的平衡,并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。

保护柱(guardcolumn)可以阻拦能够坚固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱,保护柱应与色谱柱的填料相同。

预柱和保护柱可以常常更换,而不需要常常更换色谱柱,这就延长了色谱柱的使用寿命。

2、防止气体进入有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的,否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。

因此,为了防止气泡进入色谱柱,确定要使用经过脱气的流动相,并且要严格依照下列步骤来安装色谱柱。

a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝,察看是否有溶剂渗出;b、如有溶剂渗出,即可将色谱柱接到管路上,以避开气泡的进入;c、如无溶剂渗出时,表明色谱柱的此端已经进去空气了,此时,可将色谱柱的出口端接到进样阀上,以流动相来反方向冲洗色谱柱,以便将柱内的空气排出。

建议以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱,假如溶剂的流速太快或者是压力蓦地的上升都将会导致柱性能的降低;d、假如流出的溶剂里不含有气泡,说明柱内的气体已经被排出了,再将色谱柱以正确的方向接好,这样气泡就进不到色谱柱里面了。

3、清洗为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中,在每次的样品分析工作完成之后,都应适时地清洗色谱柱。

首先要用对被测样品洗脱本领强的溶剂来洗脱色谱柱,以分析工作中常用的反相色谱分析法为例,因其先流出的物质是极性大的物质,此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来,洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。

色谱柱的安装,设置,老化和维护

色谱柱的安装,设置,老化和维护

色谱柱的安装,设置,老化和维护液相色谱柱的使用方法:1、色谱柱的使用说明:(1)、色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。

在使用前,一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。

在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。

(2)、流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。

如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。

另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0,BDS C18适合于碱性化合物,PH值适用范围为2.0-10.0。

当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。

(3)、样品:样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。

在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。

2、色谱柱的保存(1)、反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。

注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。

(2)、长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。

对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。

储存的温度最好是室温。

3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。

色谱柱的正确使用和维护 色谱柱如何做好保养

色谱柱的正确使用和维护 色谱柱如何做好保养

色谱柱的正确使用和维护色谱柱如何做好保养色谱柱的正确使用和维护特别紧要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。

在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。

1.避开压力和温度的急剧变色谱柱的正确使用和维护特别紧要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。

在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。

1.避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。

温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形;柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料,因此在调整流速时应当缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。

2.选择使用适合的流动相(尤其是pH),以避开固定相被破坏。

有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避开分析柱中的硅胶基质被溶解。

3.应渐渐更改溶剂的构成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂更改为全部是水,反之亦然。

4.一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。

否则反冲会快速降低柱效。

5.避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。

保护柱一般是填有相像固定相的短柱。

保护柱可以而且应当常常更换。

6.常常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质。

在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50~75ml。

7.色谱柱使用过程中,假如压力上升,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;假如柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头显现塌陷,死体积增大。

8.保存色谱柱时应将柱内充分乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。

确定禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

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高效液相色谱NH2柱安全操作及保养规程

高效液相色谱NH2柱安全操作及保养规程

高效液相色谱NH2柱安全操作及保养规程一、NH2柱的使用原理NH2柱是一种液相色谱柱,使用时会采用氨基化的硅胶作为固定相。

由于硅胶表面的官能团是氨基基团,能够与样品中的极性分子发生相互作用,进而对分离进行调节。

二、NH2柱的使用方法1.连接装置安装NH2柱时应连接检测设备,如进样器,检测器等。

连接时,应先连接进样器,再连接检测器。

2.洗涤在第一次使用NH2柱时,需进行洗涤。

使用洗涤液流通2-3个小时后,清空出柱中的洗涤液,然后用纯水进行洗涤,以去除任何残留物。

3.平衡在柱洗干净后,应用该检测方法的溶液和需要分析的溶液对NH2柱进行平衡。

溶液中需要下降等温升级,升温速度不要过快,以避免硅胶固定相表面积损失过大。

4.样品处理样品应先进行过滤或系列化。

如果需要,还可进行脱盐处理。

接下来,可以直接使用这个样品进行连续检测,得到相对准确的定量分析结果。

5.清洗当分析结束后,应立即用纯水进行冲洗,避免任何污渍残留在NH2柱上。

三、NH2柱的保养方法1.不会使用的人员不得安装或拆卸NH2柱;2.应使用安全稳固的操作平台;3.注意检查NH2柱连接的阀门、管道及垫片是否严密;4.避免机械冲击,特别是避免NH2柱连接处遭到打击;5.存放NH2柱时应避免阳光直射,不能暴露在高温、潮湿、有酸性气体或腐蚀性气体的环境中;6.避免NH2柱柱筒陷入液相内,以避免液相侵犯NH2柱内部,导致NH2柱出现问题;7.保持NH2柱表面清洁,避免表面污垢的附着。

四、NH2柱的故障与解决方法NH2柱在使用过程中,可能会出现以下故障情况:1. 柱运行异常问题原因可能是样品处理不当:样品会形成附着在NH2柱表面上的沉淀,导致柱进行正常分离的障碍或减缓。

此时需要对样品进行再次过滤或降温等处理。

2. 样品无法通过柱可能是进样器或检测器出现故障。

需要关闭进样器或检测器,检查柱筒是否存在压力问题,如果发现气泡等问题,需要及时清洗气泡。

3. 封补过强的流量或特別严重的样品陈成很容易出现封补。

色谱柱的使用和保养

色谱柱的使用和保养

色谱柱的使用
1.
2.
3. 4. 5.
pH値 pH値 不同品牌色谱柱适用 pH値范围不同,但C18色 pH値范围不同, 谱柱(ODS)其适用的pH値范围一般为1.5— 谱柱(ODS)其适用的pH値范围一般为1.5—9.0, 应避免在pH小于1.5或大于9.0的流动相中使 应避免在pH小于1.5或大于9.0的流动相中使 用. Promosil色谱柱适用的pH値范围为1.5— Promosil色谱柱适用的pH値范围为1.5—9.0, 其最适宜的pH値范围为2 其最适宜的pH値范围为2—8. KinetexTM C18色谱柱稳定于pH1.5至10. C18色谱柱稳定于pH1.5至 KinetexTM PFP色谱柱稳定于pH1.5至8. PFP色谱柱稳定于pH1.5至 KinetexTMHILIC色谱柱稳定于pH2至7.5 HILIC色谱柱稳定于pH2至
色谱柱的使用
1.
压力 不同色谱柱适用压力范围不同, 不同色谱柱适用压力范围不同,长时间在高 压下使用会损坏色谱柱. 压下使用会损坏色谱柱.
2.
Promosil色谱柱可承受400bar的压力, Promosil色谱柱可承受400bar的压力, 正常操作压力应在250bar下进行. 正常操作压力应在250bar下进行.
色谱柱的保养
色谱柱使用后的清洗和保存
1. 2. 3.
4.
5:95乙腈/水(或甲醇/水),先去除缓冲盐. 95乙腈 乙腈/ 或甲醇/ ),先去除缓冲盐 先去除缓冲盐. 95: 乙腈/ 95:5乙腈/水(或甲醇/水). 或甲醇/ 冲洗色谱柱后请用柱塞头旋紧色谱柱,以防保存 溶剂挥 冲洗色谱柱后请用柱塞头旋紧色谱柱, 发和柱床变干。 发和柱床变干。 长时间不使用的色谱柱,柱内不宜留有较多的水或缓冲液, 长时间不使用的色谱柱,柱内不宜留有较多的水或缓冲液, 应使用至少20-30柱体积的 应使用至少20-30柱体积的50%的甲醇/水或乙腈/水冲洗 柱体积的50%的甲醇 水或乙腈/ 的甲醇/ 色谱柱,然后用20-30柱体积的甲醇或乙腈冲洗柱子 柱体积的甲醇或乙腈冲洗柱子, 色谱柱,然后用20-30柱体积的甲醇或乙腈冲洗柱子,然后 用柱塞头旋紧色谱柱. 用柱塞头旋紧色谱柱.

常用液相色谱柱使用与维护保养

常用液相色谱柱使用与维护保养

常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一,它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。

本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。

一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作:在使用前,需要对液相色谱柱进行准备工作。

首先,检查柱的外观是否完好无损,如果发现任何损坏或污染,应立即更换。

其次,检查柱装置是否牢固,连接是否紧密。

最后,将固定相和移动相装入柱中,确保固定相充分均匀地填充在柱内。

2.柱的条件调节:根据实验需要,调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。

在调节柱温时,应注意避免温度过高或过低对柱的损害。

调节流速时,应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。

控制柱压时,要确保柱内压力稳定在可接受范围内,避免超过柱的承压能力。

3.样品进样:将待测样品注入进样口或进样器中,注意避免空气进入柱,避免对柱的污染。

可以选择外部进样或直接进样的方法,具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。

4.运行柱:在启动液相色谱仪前,先将柱进行预冲洗。

预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。

启动液相色谱仪后,根据实验要求设定好运行条件,开始进行实验。

在实验过程中,要及时观察色谱图的变化,根据实验需要调节柱温、流速等参数。

5.柱的保存:在柱使用完毕后,将固定相充分冲洗干净,保证柱内固定相的干燥和保存。

然后,将柱装入保护柱架中,避免碰撞和损坏。

柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。

二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗:在使用液相色谱柱之前,需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。

清洗方法包括预洗和后洗。

预洗可以选择与移动相相同的溶剂,将溶剂通过柱时,将固定相表面的杂质冲洗掉。

后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂,将固定相和样品残留物进行清洗。

2.避免柱的干燥:柱在使用过程中,应尽量避免柱的干燥,因为柱的干燥会对固定相造成损害。

在柱停用时,应及时用溶剂进行冲洗并封存起来,以保持柱内的湿润状态。

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改变分离的选择性
改变组份的基团,如:
变离子型化合物为非离子型,用反相方法分离
典型的例子
氨基酸分析
样品衍生∶氨基酸分析
PICO-TAG方法
NC S
异硫氢酸苯酯
R NH2 CH COO-
氨基酸
S
R
NH C NH CH COO-
AccQ-Tag 衍生法
H O
NO
1°及2°氨基酸
N
N
O
半衰期<1秒
O
AQC衍生试剂
重复性差、回收率低
实验的重复性差
色谱柱被污染 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定
回收率低,不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱以外的因素(一)
“柱效”问题,不一定是色谱柱问题!
仪器问题:连接不好造成死体积
进样器 检测器 管路,连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
实验室中60~80%的成本及工作量在样品制备上
加速样品的制备时间 降低样品前处理的成本 提高分析的准确性及回收率 更容易自动化 减少样品处理步骤 降低对不稳定样品的影响 提高安全性
Waters的Sep-Pak小柱
Waters专门开发了固相萃取技术(SPE) Sep-Pak小柱的应用领域
除去杂质及干扰组份 把样品分成不同极性的组分析 富集微量的组份
Sep-Pak小柱的主要种类
反相 正相 离子交换
Sep-Pak的种类
反相 正相 离 子 交 换
固 定 相 非 极 性 极 性
带 电 荷
溶剂 从 极 性 从 非 极 性 pH或 离 子 强
到 非 极 性 到 极 性 度 (低 到 高 )
根据Sep-Pak及样品的性质,选洗脱强度不同的 溶剂把样品分开
Waters色谱柱的联接
Waters及Phase Separations锥箍及螺母相同, 但锥箍前露出不锈钢管长度不同,其长度被称为 :“stop-depth” Waters除Spherisorb以外的各种品牌的色谱柱用 的是“Waters”标准,其stop-depth的长度为 0.130英寸 Spherisorb品牌的色谱柱及Phase Separations 公司其他品牌色谱柱用的是“Parker-style”标准 ,其 stop-depth 为0.090英寸
Guard-Pak预装保护柱
Waters的部件号,WAT088141 有各种填料的预装柱供选择,使用方便。填料容 积较小,也引起柱效降低
可换芯式保护柱
新型的保护柱 — Sentry Guard
适应的用户类型
非常脏, 非常复杂的样品本底
生化样品, 溶液 环境样品 食品
不想作太多的固相萃取 不想降低柱效
20倍柱体积的:甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗
记 住 ∶ 每 种 色 谱 柱 可 能 有 特 定 的 方 法 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 !
色谱柱的存放
存放前的处理
除去杂质、盐
合适的存放溶剂 避免色谱柱床的干枯 避免机械震动 防止细菌生长 注意存放的温度
色谱柱常见毛病
柱压过高
多少才算高?
色谱柱的保养(一)
样品方面
除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度
如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶 解度,防止其在流动相中析出
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
色谱柱的保养(二)
流动相方面
除去微粒 纯度的要求
超纯水,梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值,在填料的允许范围内 缓冲液(盐)的浓度 溶剂:色谱纯,并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量
可更换的消耗品
更换滤芯,部件号 WAT005139 (5/pkgs) 更换垫圈,部件号 WAT084567 (10/pkgs)
保护柱
可避免化学污染。多数保护柱影响到整个 色谱柱的柱效,特别是在用微柱时 保护柱的种类
普通自装填料的保护柱
Waters的部件号,WAT084550,用户自装填料 影响柱效同装填技术有关,柱效降低较大
高速离心
大于:10,000g
超滤
机理
超滤是一种基于分子量分离的技术
目的
根据分子量的不同把分子、细胞及病毒等分 为不同的馏份 除去小分子样品中的大分子蛋白 脱盐
选择性沉淀
常用于生化样品中除蛋白
有机溶剂
乙腈,甲醇
强酸
三氯乙酸,过氯酸

50% 硫酸铵 10% TCA
样品衍生
提高检测的灵敏度
增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度 增加荧光基团使样品用高灵敏度荧光检测器
各种不同填料配合Waters柱
Sentry Guard 的规格
产品描述
3.920mm柱长
适应任何色谱柱,不需工具即可安装及更换
可换柱芯式设计,提供各种填料:
BondaPak: C18, phenyl, CN, NH2, Silica
Nova-Pak: C18, C8, phenyl, CN, Silica
在不同条件下,有些填料可以用于反相或离子交换, 如∶NH2 / CN 确认回收率
各种Sep-Pek小柱(二)
反相
包括∶C18 / tC18 / C8 / tC2 / Diol / NH2 / CN
可先用6到10倍柱体积的甲醇或乙腈活化,再用6到10倍 柱体积的水或缓冲液平衡,不要让小柱干了 样品溶解在强一些极性的溶剂中 加入样品 用强极性溶剂洗脱不想要的组份 用极性弱些的溶剂洗脱第一组感兴趣的组份 用极性更弱的溶剂洗脱剩下的感兴趣的组份Leabharlann 不同的Stop-Depth长度
色谱柱以外的因素(二)
柱压过高问题,不一定是色谱柱问题!
系统反压问题
阻尼器堵塞 进样器堵塞 管路或连接口堵塞 在线过滤器不干净 保护柱
压力传感器不准确 流速是否错误?
色谱柱以外的因素(三)
实验的重复性差
梯度实验时平衡时间不足 温度波动 流动相组成改变 样品溶剂不同 样品稳定性不好 方法的开发不好
确认回收率
Sep-Pak小柱的方法开发
SPE方法开发的几个关键因素
文献查阅
Waters有专门Sep-Pak应用资料的数据库(P/N = 88286 ) 查阅Waters的网页(waters)
流速控制
同色谱理论:以10ml/min润湿小柱,1~5ml/min加载样品 离子交换填料或固定相少于100mg的小柱,用更低的流速 加载样品 以1~5ml/min流速洗脱样品
是决定性的步骤
样品预处理常用的方法
高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-固萃取 / 液-液萃取
Sep-Pak样品处理小柱
其他
样品预处理的过程
去除微粒
过滤
过滤膜/过滤装置
有机(0.5m)/无机(0.45m) 膜片可更换
一次性使用的膜“Cartridge”
使用方便简单,交叉污染小 有更小内径,可用于微量样品的处理
新型的保护柱 — Sentry Guard
Sentry Guard 的特点
特点
高质量, 高效填料 - 不损失柱效 增加分析柱效 - 增加适应范围 20mm柱长 - 脏样品载荷能力大,能延长保 护柱寿命 手可拧紧接头,安装时不需要工具
通用柱套 - 适用于所有的HPLC柱(3.9及4.6内径) 整体式(对Waters柱)- 使用方便,容易
流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
在线的保护装置
给色谱柱提供物理的保护
除去样品及流动相中的颗粒
给色谱柱提供化学的保护
防止分析柱被化学污染
装置
在线过滤器 自装填料保护柱 预装保护柱
在线过滤器
In-Line Filter,部件号 WAT084560
防止颗粒在色谱柱头累积 优点:基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用(如:氨基酸 分析)
Resolve:
C18, C8, Silica
Delta-Pak: C18, C4
Symmetry:
C18, C8
色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法
先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化
键合相柱(烷基)的一般方法
确认回收率
各种Sep-Pek小柱(三)
离子交换
包括∶Accell Plus CM / Accell Plus QMA / NH2
可先用6到10倍柱体积的去离子水或弱缓冲液平衡, 样品溶解在去离子水或弱缓冲液中 加入样品 用弱缓冲液洗脱不想要的组份 用强一些缓冲液(改变pH或离子强度)洗脱第一组感兴趣 的组份 用更强的缓冲液洗脱剩下的感兴趣的组份
不同色谱柱有差异 不同系统有差异 不同溶剂有差异
柱效低 重复性差 不出峰,回收率低
柱压过高
为什么柱压会过高
微粒堵塞
样品 流动相 密封垫
柱床膨胀 不可逆吸附 细菌生长
柱效低
为什么柱效低
色谱柱被污染 过滤片部分堵塞
样品、流动相或密封垫的细小颗粒造成的堵塞
色谱柱内的死体积
流动相pH值及组成不合适造成固定相流失 流速急剧变化造成固定相物理损坏 机械震动造成固定相产生裂缝 柱床收缩或干枯
保护色谱柱
减少死体积 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
加热
简单,如同抽真空一起使用,其效果很好。但容易造成流动相 组成的变化
抽真空
同上,一般在溶剂抽滤的同时,也有脱气的效果
超声波
简单,但效果不理想。
通惰性气体(一般用氦气)
可保持连续脱气,多用于低压梯度
脱气机
可保持连续脱气,多用于低压梯度
样品的预处理
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