西瓜细菌性果斑病的发生与病原菌鉴定

西瓜 ( Citrullus lanatus) 是一种栽培历史较悠 久的瓜果 ,汁多味甜 ,清凉爽口 ,是消暑解渴佳品 , 有“夏季水果之王”的美称 。农民种植西瓜可获得 较好的经济效益 ,所以提高西瓜种植的质量和产 量具有十分重要的意义 。但是近几年由于大量优 质高产西瓜品种的引进 ,加之栽培面积的增加 ,西 瓜病害的种类逐渐增多 , 新病害不断发生。 2001 年吉林省西瓜种植区受到了一种新的细菌
摘 要 : 首次报道了西瓜细菌性果斑病在吉林省的发生 。从不同来源病株上的不同发病部位分离出有致病 性的 2 个菌株 (W1 和 W2 ) ,通过对其形态学 、培养性状 、生理生化性状和寄主范围的测定 ,并根据其在西瓜上 引起病害的症状特点 ,将其确定为燕麦食酸菌西瓜亚种 ( Acidovorax avenae subsp1 citrulli Willems et al1) 。 关键词 : 西瓜 ; 细菌性果斑病 ; 食酸菌属 中图分类号 : S43615 文献标识码 : A 文章编号 : 100025684 (2004) 0320263204
3 病原菌鉴定结果
311 致病性测定结果 在分离纯化的 5 个菌株中有 2 个菌株对西瓜
有致病性 ,能产生与田间相似症状 。经在西瓜苗 和果实上接种再分离 ,证实 2 个菌株对西瓜有致 病性 ,分别命名为 W1 、W2 。这 2 个菌株均能在烟 草上产生过敏性坏死反应 。 312 细菌的形态及染色反应
第 26 卷 第 3 期 金 岩等 :西瓜细菌性果斑病的发生与病原菌鉴定
265
(015～110) μm , 电 镜 下 观 察 有 极 生 鞭 毛 1 根 (图 1) 。
图 1 病菌的电镜照片
Fig. 11 Electron micrograph of the pathogen
Ξ 基金项目 : 吉林省科技厅资助项目 (吉科合字 970203 - 6) 作者简介 : 金 岩 (19762) ,女 ,助教 ,研究方向 :植物细菌病害 。 收稿日期 : 2004201216
ΞΞ 通讯作者
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
264
吉 林 农 业 大 学 学 报 2004 年
1 西瓜细菌性果斑病的症状
该病从苗期到成株期均可发生 ,病菌可危害 叶片 、茎及果实 ,主要为害果实 。病菌先感染西瓜 子叶 。子叶受害时叶尖或叶缘先发病 ,出现水浸 状小斑点 ,并逐渐向子叶基部扩展形成条形或不 规则形暗绿色水浸状病斑 。在条件适宜时 ,子叶 病斑可扩展到嫩茎 ,引起嫩茎腐烂 ,使整株幼苗坏 死 。随后感染真叶 ,真叶受害初期出现水浸状的 小斑点 ,扩大时受叶脉的限制成多角形 、条形或不 规则形暗绿色病斑 ,后期转为褐色 ,下陷干枯 ,形 成不明显的褐色小斑 ,周围有黄色晕圈 。病斑通 常沿叶脉发展 ,对植株的直接影响不大 ,但却是感 染果实的重要病菌来源 。植株生长的中期 ,叶片 上的病斑很少 ,通常不显著 ,暗褐色 ,略呈多角形 , 病叶很少脱落 。
按文献[ 2 ] 中所述方法观察 NA 平板菌落形 态 、NA 斜面菌苔形态 、肉汁胨液体 (NB) 培养基中 的生长情况 。上述试验的培养温度为 30 ℃,2 d 后进行观察 。 216 金氏 B 培养基 ( KBA) 上荧光色素的产生
将病原菌接在 KBA 培养基上 ,24～48 h 后在 波长 254 nm 的紫外灯下检查荧光色素的产生 。 217 病原菌的生理生化性状测定
2 西瓜细菌性果斑病病原菌鉴定方法
211 病原菌的分离和纯化 采用平板划线分离法 ,对不同来源病株上的
不同发病部位进行病原菌பைடு நூலகம்分离和纯化 ,得到纯 化培养菌株 5 个 。将各菌株保存在 YDC 斜面培 养基上备用 ,使用时转至 NA 培养基上活化 。 212 病原菌的致病性测定
将获得的 5 个菌株在 30 ℃条件下培养 24～ 48 h ,配成 108 cfuΠmL 菌悬液 ,采用高压喷雾法 、针 刺法接种到健康无病西瓜苗和果实上 ,28 ℃下薄 膜保湿 24～48 h 。同时将菌悬液用灭菌注射器注 入到成熟的烟草叶片内 ,48 h 后观察是否有过敏 性坏死反应发生 。
均按照文献 [ 1 ] 、[ 2 ] 所述的有关方法进行 。 所采用的病原菌均为 NA 培养基上培养 24～48 h 的新鲜菌种 ,每个菌株的测定项目至少重复 3 次 。 218 寄主范围测定
将 30 ℃培养 36 h 的菌株配成 108 cfuΠmL 菌悬 液 ,采用高压喷雾法分别接种于健康的黄瓜 ( Cuc2 umis sativus L1) 、甜瓜 ( Cucumis melo L1) 、南瓜 ( Cu2 curbita moschata Duch1ex Poir) 、西 葫 芦 ( Cucurbita pepo L1) 、茄子 ( Solanum melongena L1) 、辣椒 ( Cap2 sicum annuum L1) 、白菜 ( Brassica campestris sp1 chi2 nensis Makino) 、番茄 ( Lycopersicon esculentum Mill1) 、 芫荽 ( Coriandrum sativum L1) 、茼蒿 ( Chrysanthemum coronarium var1 spatisum Bailey) 上 。接种后 28 ℃下 用塑料薄膜保湿 48 h ,1 周后观察结果 。
2 个菌株革兰氏染色反应均为阴性 ,菌体短 杆 状 , 两 端 钝 圆 , 大 小 为 ( 2 ～ 3 ) μm ×
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
吉林农业大学学报 2004 ,26 (3) :263～266
Journal of Jilin Agricultural University
西瓜细菌性果斑病的发生与病原菌鉴定Ξ
金 岩 1 , 2 , 张俊杰1 , 吴燕华3 , 高 洁1ΞΞ
(11 吉林农业大学农学院 , 长春 130118 ; 21 辽宁农业职业技术学院质检中心 , 熊岳 115214 ; 31 杜邦先锋中国公司 , 北京 100004)
2 个菌株在人工接种的条件下 ,除能侵染西 瓜外 ,对其他葫芦科植物如黄瓜 、甜瓜 、南瓜 、西葫 芦也能侵染 ,还能侵染番茄 、茄子 、辣椒 ,不能侵染 白菜 、芫 荽 、茼 蒿 。其 他 生 理 生 化 试 验 结 果 见 表 1。
Occurrence of Watermelo n Bacterial Fruit Blotch and Identificatio n of Its Patho gens J IN Yan1 ,2 , ZHANG J un2jie1 , WU Yan2hua3 , GAO Jie1
(11 College of Agronomy , Jilin Agricultural University , Changchun 130118 , China ; 21 Quality Analysis Center , Liaoning Agricultural Occupational and Technical College , Xiongyue 115214 , China ; 31 Dupont2Pioneer China Company , Beijing 100004 , China) Abstract : In this paper , the occurrence of watermelon bacterial fruit blotch was first reported in Jilin province1Two pathogenative strains were isolated from different parts of the infected plant in different sources1 Based on the determination of their morphology , cultural characteristics , physiological & bio2 chemical characteristics and ecology , and on the comparison of these characteristics with the concerned parts in《Bergey′s Manual of Determinative Bacteriology》9th ed , the pathogens identified are Acidovorax avenae subsp1 citrulli Willems et al119921 Key words : watermelon ; bacterial fruit blotch ; Acidovorax
213 病原菌的形态观察及染色 对有致病性的菌株 ,按一般细菌学常规方
法[1] ,30 ℃下培养 24～48 h 后进行革兰氏染色 ;采 用透射电镜的负染技术观察病原菌的鞭毛着生状 态及数目 ,观察菌体形态 ,测定菌体大小 。 214 类脂粒颗粒 ( PHB) 积累
按常规方法制成涂片后 ,用苏丹黑染 10 min , 用水冲去染剂 ,再用二甲苯冲洗至图片无色 ,然后 用番红水溶液复染 1～2 min ,水洗 ,吸干后镜检 。 215 病原菌的细菌学培养性状
性病害 ———细菌性果斑病的严重危害 。该病害主 要危害果实 ,一旦发病用药防治基本没有效果 ,而 且可导致种子带菌 ,成为下一年重要的初侵染源 。 该病的发生严重影响了西瓜的产量和品质 ,成为 吉林省西瓜生产上亟待解决的难题之一 。基于西 瓜细菌性果斑病已对吉林省西瓜生产构成严重威 胁 ,我们对其病原菌进行了分离 、鉴定 ,以期为病 害的防治奠定基础 。
313 细菌学培养性状 2 个菌株在 NA 平板上生长 24 h 后 ,形成乳
白色圆形菌落 ,光滑 ,中间稍隆起 ,边缘整齐 ,大小 为 1～2 mm。NA 斜面上生长 48 h 后 ,形成丝状菌 苔 ,表面光滑 ,半透明 ,无黏性 ,培养基不变色 。肉 汁胨培养液中生长良好 ,无菌膜 、菌环产生 ,表面 下生长呈云雾状 ,有沉积物 ,有少量絮状沉淀 ,无 色无味 。在 KBA 培养基上不产生荧光色素 。能 积累 PHB 。2 个菌株在含葡萄糖的培养基上氧化 产酸 ,均为好氧性 ,且有运动性 。2 个菌株的最适 生长温度为 28～32 ℃,最低生长温度为 8 ℃,最高 生长温度为 44 ℃。2 个菌株在 1 %～9 %的盐度范 围内均能生长 ,但在含盐量 1 %～2 %条件下生长 最好 ,含盐量 10 %时不生长 。
开花后 14～21 d 的果实最容易被感染 ,首先 在果实上部表面出现数个几毫米大小灰绿色至暗 绿色水浸状小斑点 ,随后扩大成不规则的大型橄 榄色水浸状斑块 。发病初期病变只局限在果皮 , 果肉组织仍然正常 ,但将严重影响西瓜的商品价 值 。发病中期以后 ,病菌可单独或随同腐生菌蔓 延到果肉 ,使果肉变成水浸状 ,颜色也有所改变 。 发病后期病斑转为褐色 ,果皮龟裂 ,随着病斑深入 果肉 ,并因杂菌感染最后引起全果腐烂 ,失去食用 价值 。病斑上常有黏稠 、褐色的菌脓溢出 。有些 品种果实受感染后 ,在表皮上仅出现龟裂的小褐 斑 ,而无明显的橄榄色水浸状斑块 ,但病菌已侵入 果肉组织 ,造成严重的水浸状病症 。