金黄色葡萄球菌ppt课件

第三法：MPN计数法
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平 板 计 数 法
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平板计数法——平板接种
• 步骤： • 10倍系列梯度稀释，并选取2-3个适宜梯度； • 每个梯度吸取1mL,以0.3，0.3,0.4mL分别接种3
个BP平板； • 涂布，完全吸收样液后，倒置培养； • 选取3个平板菌落数合计20-200cfu的梯度平板，
在陈旧培养物中，衰老的菌体常转 为革兰氏阴性。 • 培养特性：最宜温度：37℃（6.5-46 ℃）
最适宜pH:7.4(4.2-9.3） 耐盐性：可在10%-15% NaCl，40%胆汁中生长 • 能产生色素、血浆凝固酶、接触酶、肠毒素等
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金黄色葡萄球菌的检测方法
• GB 4789.10-2016 • ISO 6888 • FDA(BAM) online chapter 12 • 化妆品卫生规范 • USP/BP/EP • ……
金黄色葡萄球菌检验
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金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争 议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄 球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改
变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。
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金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus
• 阳性现象：试管倾注斜意或点倒： 置时，呈现凝块，即凝固 现象，
1，必须每半小时观察；
或凝固 体积大2，于陈原旧培体养积物（的培一养超半过。18-24h）或生长不良
的，可能导致假阴性；
3，不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落，高盐
可能导致假阴性。
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GB 4789.10-2010
第一法：定性检测
第二法：平板计数法
注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌； 二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。
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定性检测——血浆凝固酶鉴定试验
• 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h；
0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃ 培养6h；
每半小时观察；
同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228)
主要成分：卵黄亚碲酸钾、丙酮 酸、甘氨酸、氯化锂
注意点：
一，卵黄亚碲酸钾需要预热到50℃左右，加入冷却到50℃培 养基基础中； 二，长期保存的冷冻或干燥食品中菌落颜色较淡一些，外观 可粗糙干燥。
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定性检测——平板划线分离
菌落形态：白色或者金黄色菌落 ，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱 纤维羊血
计数典型菌落数 •注意挑点去：5个典型菌落（不够5个全挑）做血浆凝 1，固用酶于涂实布验平。板必须干燥；
2，涂布是，涂布棒不要接触平板边缘
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平板计数法——计算
• 选择合计菌落数在20-200的平板，计算典型菌 落数。如果：
• a)只有一个稀释度平板菌落数在20-200CFU之 间且有典型菌落，计数该稀释度平板上典型 菌落；
T=
1.1d
式中：
T --------样品中金黄色葡萄球菌菌落数
A1----第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落总数
A2----第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落总数
B1----第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数
源自文库
B2----第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数
C1----第一稀释度（低稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
• b）最低稀释度平板的菌落小于20，计数该稀 释度平板上的典型菌落。
• c) 某一稀释度平板的菌落大于200且有典型菌 落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，计 数该稀释度平板上的典型菌落。
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平板计数法——计算
• d)某一稀释度平板的菌落大于200且有典型 菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，其 平板上的菌落数不在20~200之间，按以下公 式，计数该稀释度平T=A板B/Cd上的典型菌落。
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GB4789.10-2016的主要变化
• 1.删除了英文名称 • 2.修改操作程序，删除了分离培养基血平板 • 3.删除了增菌液10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤
（跟国际接轨，FDA，ISO等均无定性方法， 且都使用7.5%氯化钠肉汤） • 4.修改葡萄球菌肠毒素检验为可选项
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定性检测——选择性增菌
• 步骤：称取25g样品至盛有225ml 7.5%氯化 钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的容器 中，均质。液体样品量取25mL。
其中 T-----样品中金黄色葡萄球菌菌落数 A-----某一稀释度典型菌落总数 B-----某一稀释度凝固酶阳性菌落数 C-----某一稀释度用于凝固酶试验的菌落数
d-----稀释因子
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平板计数法——计算
• e)两个连续稀释度平板菌落数均在20 CFU-
200 CFU之间，按以下公式计算：
A1B1/C1＋A2B2/C2
C2----第二稀释度（高稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
1.1------计算系数
d--------稀释因子（第一稀释度）
• 作用：以划线方式在琼脂平板上分离出单菌 落，通过单菌落的菌落形态判别出具有典型 形态的可疑菌落进行下一步生化及血清实验 确定。
• 操作要点：1，保持用于划线平板表面干燥 2，必须在平板中画出单菌落 3，用于划线平板需要现配现用
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定性检测——平板划线分离
菌落形态：灰色到黑色，边缘常 为淡色，周围为一混浊带，在其 外缘常有一透明圈。
• 作用：1，复苏细菌； 2，选择性增菌
• 操作要点：1，准确称（量）取； 2，按标准要求时间温度培养
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定性检测——平板划线分离
• 步骤：分别用接种环取培养液1环，划线接 种于一个Baird-Parker平板和一个血平板（， 于36±1℃分别培养18-24h（血平板）或 40-48h（ Baird-Parker平板）
• 金黄色葡萄球菌：属于微球菌科，葡 萄球菌属的；有“金葡菌”等别称
• 金葡菌是化脓性感染的常见致病菌， 能导致肺炎，心包炎，毛囊炎，败血 症，烫伤样皮肤症等
• 传播途径：水、食物等 • 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉
素）
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金黄色葡萄球菌生物特征
• 形态特征：革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。
无鞭毛、 无芽胞、有荚膜（体外培 养一般不产生）。