兔抗鸡免疫血清的制备及效价测定
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１． 实 验 方 法 ２
１ ２ １ 免疫程 序 ．． 初免 ： ２ｍＬ注 射器 吸取 经 Ｆ Ａ乳 化的鸡 血 清 １ｍＬ 同时在兔 的颈背 部和 大腿 （ 用 Ｃ ， 或臂 部 ） ４ 选 ～６ 点皮 下注 射 ， 点注 ０ ２ｍＬ． 每 ．
二免 ： 间隔 １ ～１ ， 于上述 部 位选 不 同点 以及 两 侧用 窝 部肿 大 的 淋 巴结 内注 射 用 ＦＡ 乳 化 ０ ４ｄ后 再 Ｉ 的鸡血 清 ， 每点注 ０ １ｍＬ 其 余注入 淋 巴结 附近 皮 下， 注射 １ｎ ． ． ， 共 三 免 和四免 ： 分别 间隔 ７ｄ ， 后 耳静脉 注 射无 佐剂 的鸡 血 清抗 原 １ｍＬ．
［ 者简介］王冬梅 （９ ９ ）女 ， 作 １ ６一 ， 甘肃兰州人， 硕士 ， 副教授 ， 主要从事微生物与 免疫学的教学和科研工作
－－ －— —
４９ ・— － － —
免疫 免抗 血清 的效 价 ． 体效 价达 １ １ 抗 ：６以上 的实验兔 通过 心脏采 血法 放血 ， 离血 清 ． 分
兔． 末次加 强免疫后 ７ 兔血 清， 用双 向免疫 扩散法 测定 其效价 ； 用沉降 与 离心 方法分 离血 清 ． 果 ： －９ｄ取 应 采 结 免疫 家 兔在全程免疫后都 产生 了高效价抗体 ， 效价达到 １３ ． ：２ 结论 ： 用抗原鸡血 清免疫 家兔， 可成功 制备 高效价 的免疫血 清， 为
清 ２ Ｌ 加 样后置 湿 盒 中， ３ Ｏｕ ， 置 ７℃培 养 箱 中扩 散 ４ －７ ． ８ ２ｈ 出现沉 淀线 的最 高血 清稀 释倍 数即为 兔免
疫 血清 的效 价 ．
１２４ 血 清的分 离 ．． 血 清 的分 离 要在 无菌条 件 下进 行 ． 采集血 液 先置 ３ 将 ７℃培 养箱 １ｈ 再 置 ４℃ 冰箱 内过夜 使血 清 ， 充分 析 出 ． 日用 无 菌 毛 细 滴 管 吸 取 血 清 ， ０ ／ ｉ 心 １ ｎ 取 上 清 ， 器 除 菌， 防腐 剂 次 ３００ｒｒ ｎ离 ａ ５ｍｉ， 滤 加
１ ２ ２ 试 血及 采血 ．．
末 次 加强免 疫后 ７ ，分 别采 集所 有试 验兔 的 耳静脉 血 样 ３ ５ｍＬ，用 双 向琼 脂 扩散 方 法 测 定 ～９ｄ －
［ 收稿 日期】２ １ —０ ～２ ００ ４ ８ ［ 金项 目］西北 民族大 学中青年科研基金 ［ Ｂ 基 Ｘ ＭＶ一２ ０ ０ ７一Ｂ Ｄ一３ ］ ９
第 ３ 总第７ １卷 ８期
２ ０１ 年 ６ 月 ０
西 北 民 族 大 学 学 报（ 自然 科 学 版 ）
Ｖｏ ． １ Ｎｏ ２ １３ ， ．
Ｊｕｎｌｆ ｏ ｈ ｅ ｎ ｅ ｗｓ Ｕ ｉ ｒｔ ｆ ｔ ｎｌｉ （ ｔｒｌ ｃｅ ｅ Ｎ ｔ ｔ ｖ ｓｙ ｏ Ｎ ｉ ｉｅ ｎ
（ Ｎ， Ｎａ ３ 终浓 度 ０ ０ ％） 分装 ， ０℃冰箱 内保 存备用 ． ．２ 后 一２ ２ 结果
经过 双 向琼脂 扩散 ， 在周边各孔和 中心孔之 间出现 ２ 条沉淀线， ～３ 相邻孔沉淀线互相连接融合， 出现 沉 淀线的最高血 清稀释倍数为 １３， 明该动物 已产 生特异性抗体， ：２证 兔抗血清效价为 １３ ， ： 表明免疫成功 ． ２
今 后 的 实 验 教 学 和 实 验 研 究奠 定 了基础 ．
［ 键 词 ］免 疫血 清 ； 向免 疫 扩 散 法 ； 关 双 效价 测 定
［ 中囝分类号 】 １９ ． ｅ５ ２ １
［ 文献标 识码】Ａ
［ 文章编号 】１ ０ —２ ０ ｛０ ０ ０ ０ ９ １２ ２ １ ）２—０ ４ —０ ０９ ２
动 物 免疫血 清是 医学教 学 、 研及 临床检 验工 作 中经 常 使用 的试 剂 ． 疫 血 清 的制 备 有 很大 的 应 科 免 用价值 ．目前 ， 备抗 体 常用 的方 法有 免疫 动物 或 杂交 瘤 细 胞技 术 等 ． 制 利用 杂 交 瘤 技 术制 备 的 单 克 隆
抗体存 在仅 针对 单个 抗原 表 位 的局限 性 ， 同时制 备 技术要 求 高 ， 成本 昂贵 ． 利 用免 疫动 物制 备免 疫血 而
清的制备技术相对简单、 成本低、 来源方便， 制备的血清可同时针对多个抗原表位， 提高检测的敏感性， 因此在 免疫 学检 测和诊 断 实验 技术 中广泛 应用 ． ’
１ 材料 和方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
１ １１实验 动物 体 重 ２ 的健 康 成年 雄性 家兔 ３只 ． ．． ～３ １ １２试剂 灭菌 ＮＳ ２５ ．． ， ． ％碘 酒 ，５ ７ ％酒 精 ， 氏不 完全佐 剂 （ Ｉ ， 氏完 全 佐剂 （ Ｃ ， 菌鸡 血 清 ， 弗 ＦＡ）弗 Ｆ Ａ）无 琼脂 糖 ． １ １３器械 注射 器（ ．０ｍ ）除菌滤器， ．． ２ｍＬ５ Ｌ ， 量筒， 灭菌三角烧瓶 ， 研钵， 孔器 ， 打 载玻片， 湿盒， 台， 笼等 ． 兔 兔 １１ ４仪 器 全 温度振 荡 培养箱 ， 自动高 压灭 菌器 ， 热灭 菌箱 ， 箱 ， ．． 全 干 冰 离心 机等 ．
Ｊｎ，０ ０ ｕ ｅ ２ １
兔抗鸡 免疫血清 的制 备及效价测 定
王 冬 梅 沈 武玲 ，
（． １ 西北 民族大 学 实验 中心 ， 肃 兰 州 ７ ０ ０ ） 甘 ３ ００
【 摘
要】目的 ： 制备 高效价 兔抗鸡免疫 血清 ． 方法 ： 抗原 鸡血 清经 弗 氏佐 剂乳 化 ， 用一定 的 免疫程 序免 疫 家 将 采
１２３ 兔 免疫 血 清效 价 测定 ．．
双 向琼脂扩散试验 ： 制备 １５ ． ％的生理盐水琼脂糖凝胶铺板， 打梅花孔 ， 封底后加样 ． 中间孔加抗 原鸡血 清 ， 周边 孔 （ 以上方 孔 为第 １孔 ， 按顺 时针方 向分别 称 为 ２ ３４５ ６孔 ） ， ，， ， 依次 加入 倍 比稀释兔 抗血
１ ２ １ 免疫程 序 ．． 初免 ： ２ｍＬ注 射器 吸取 经 Ｆ Ａ乳 化的鸡 血 清 １ｍＬ 同时在兔 的颈背 部和 大腿 （ 用 Ｃ ， 或臂 部 ） ４ 选 ～６ 点皮 下注 射 ， 点注 ０ ２ｍＬ． 每 ．
二免 ： 间隔 １ ～１ ， 于上述 部 位选 不 同点 以及 两 侧用 窝 部肿 大 的 淋 巴结 内注 射 用 ＦＡ 乳 化 ０ ４ｄ后 再 Ｉ 的鸡血 清 ， 每点注 ０ １ｍＬ 其 余注入 淋 巴结 附近 皮 下， 注射 １ｎ ． ． ， 共 三 免 和四免 ： 分别 间隔 ７ｄ ， 后 耳静脉 注 射无 佐剂 的鸡 血 清抗 原 １ｍＬ．
［ 者简介］王冬梅 （９ ９ ）女 ， 作 １ ６一 ， 甘肃兰州人， 硕士 ， 副教授 ， 主要从事微生物与 免疫学的教学和科研工作
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４９ ・— － － —
免疫 免抗 血清 的效 价 ． 体效 价达 １ １ 抗 ：６以上 的实验兔 通过 心脏采 血法 放血 ， 离血 清 ． 分
兔． 末次加 强免疫后 ７ 兔血 清， 用双 向免疫 扩散法 测定 其效价 ； 用沉降 与 离心 方法分 离血 清 ． 果 ： －９ｄ取 应 采 结 免疫 家 兔在全程免疫后都 产生 了高效价抗体 ， 效价达到 １３ ． ：２ 结论 ： 用抗原鸡血 清免疫 家兔， 可成功 制备 高效价 的免疫血 清， 为
清 ２ Ｌ 加 样后置 湿 盒 中， ３ Ｏｕ ， 置 ７℃培 养 箱 中扩 散 ４ －７ ． ８ ２ｈ 出现沉 淀线 的最 高血 清稀 释倍 数即为 兔免
疫 血清 的效 价 ．
１２４ 血 清的分 离 ．． 血 清 的分 离 要在 无菌条 件 下进 行 ． 采集血 液 先置 ３ 将 ７℃培 养箱 １ｈ 再 置 ４℃ 冰箱 内过夜 使血 清 ， 充分 析 出 ． 日用 无 菌 毛 细 滴 管 吸 取 血 清 ， ０ ／ ｉ 心 １ ｎ 取 上 清 ， 器 除 菌， 防腐 剂 次 ３００ｒｒ ｎ离 ａ ５ｍｉ， 滤 加
１ ２ ２ 试 血及 采血 ．．
末 次 加强免 疫后 ７ ，分 别采 集所 有试 验兔 的 耳静脉 血 样 ３ ５ｍＬ，用 双 向琼 脂 扩散 方 法 测 定 ～９ｄ －
［ 收稿 日期】２ １ —０ ～２ ００ ４ ８ ［ 金项 目］西北 民族大 学中青年科研基金 ［ Ｂ 基 Ｘ ＭＶ一２ ０ ０ ７一Ｂ Ｄ一３ ］ ９
第 ３ 总第７ １卷 ８期
２ ０１ 年 ６ 月 ０
西 北 民 族 大 学 学 报（ 自然 科 学 版 ）
Ｖｏ ． １ Ｎｏ ２ １３ ， ．
Ｊｕｎｌｆ ｏ ｈ ｅ ｎ ｅ ｗｓ Ｕ ｉ ｒｔ ｆ ｔ ｎｌｉ （ ｔｒｌ ｃｅ ｅ Ｎ ｔ ｔ ｖ ｓｙ ｏ Ｎ ｉ ｉｅ ｎ
（ Ｎ， Ｎａ ３ 终浓 度 ０ ０ ％） 分装 ， ０℃冰箱 内保 存备用 ． ．２ 后 一２ ２ 结果
经过 双 向琼脂 扩散 ， 在周边各孔和 中心孔之 间出现 ２ 条沉淀线， ～３ 相邻孔沉淀线互相连接融合， 出现 沉 淀线的最高血 清稀释倍数为 １３， 明该动物 已产 生特异性抗体， ：２证 兔抗血清效价为 １３ ， ： 表明免疫成功 ． ２
今 后 的 实 验 教 学 和 实 验 研 究奠 定 了基础 ．
［ 键 词 ］免 疫血 清 ； 向免 疫 扩 散 法 ； 关 双 效价 测 定
［ 中囝分类号 】 １９ ． ｅ５ ２ １
［ 文献标 识码】Ａ
［ 文章编号 】１ ０ —２ ０ ｛０ ０ ０ ０ ９ １２ ２ １ ）２—０ ４ —０ ０９ ２
动 物 免疫血 清是 医学教 学 、 研及 临床检 验工 作 中经 常 使用 的试 剂 ． 疫 血 清 的制 备 有 很大 的 应 科 免 用价值 ．目前 ， 备抗 体 常用 的方 法有 免疫 动物 或 杂交 瘤 细 胞技 术 等 ． 制 利用 杂 交 瘤 技 术制 备 的 单 克 隆
抗体存 在仅 针对 单个 抗原 表 位 的局限 性 ， 同时制 备 技术要 求 高 ， 成本 昂贵 ． 利 用免 疫动 物制 备免 疫血 而
清的制备技术相对简单、 成本低、 来源方便， 制备的血清可同时针对多个抗原表位， 提高检测的敏感性， 因此在 免疫 学检 测和诊 断 实验 技术 中广泛 应用 ． ’
１ 材料 和方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
１ １１实验 动物 体 重 ２ 的健 康 成年 雄性 家兔 ３只 ． ．． ～３ １ １２试剂 灭菌 ＮＳ ２５ ．． ， ． ％碘 酒 ，５ ７ ％酒 精 ， 氏不 完全佐 剂 （ Ｉ ， 氏完 全 佐剂 （ Ｃ ， 菌鸡 血 清 ， 弗 ＦＡ）弗 Ｆ Ａ）无 琼脂 糖 ． １ １３器械 注射 器（ ．０ｍ ）除菌滤器， ．． ２ｍＬ５ Ｌ ， 量筒， 灭菌三角烧瓶 ， 研钵， 孔器 ， 打 载玻片， 湿盒， 台， 笼等 ． 兔 兔 １１ ４仪 器 全 温度振 荡 培养箱 ， 自动高 压灭 菌器 ， 热灭 菌箱 ， 箱 ， ．． 全 干 冰 离心 机等 ．
Ｊｎ，０ ０ ｕ ｅ ２ １
兔抗鸡 免疫血清 的制 备及效价测 定
王 冬 梅 沈 武玲 ，
（． １ 西北 民族大 学 实验 中心 ， 肃 兰 州 ７ ０ ０ ） 甘 ３ ００
【 摘
要】目的 ： 制备 高效价 兔抗鸡免疫 血清 ． 方法 ： 抗原 鸡血 清经 弗 氏佐 剂乳 化 ， 用一定 的 免疫程 序免 疫 家 将 采
１２３ 兔 免疫 血 清效 价 测定 ．．
双 向琼脂扩散试验 ： 制备 １５ ． ％的生理盐水琼脂糖凝胶铺板， 打梅花孔 ， 封底后加样 ． 中间孔加抗 原鸡血 清 ， 周边 孔 （ 以上方 孔 为第 １孔 ， 按顺 时针方 向分别 称 为 ２ ３４５ ６孔 ） ， ，， ， 依次 加入 倍 比稀释兔 抗血