免疫血清学技术

荧光色素
是能够产生明显荧光，并能作为染料使用 的有机化学物称为荧光色素或荧光染料。
可用于标记的荧光素有异硫氰酸荧光素 (FITC)、四乙基罗丹明(RB 200)和四甲基 异硫氰酸罗丹明(TRITC)
染色原理及方法
FITC含有异硫氰基，能与IgG分子自由基 结合，形成FITC-IgG复合物，且不影响结 合抗原的能力和特异性，因此，当荧光抗 体与抗原结合后形成有荧光性的抗原抗体 复合物
常用直接法与间接法 将SPA标记FITC制成FITC-SPA
（二）酶标抗体技术
根据抗原抗体反应的特异性和酶催化反应 的高敏感性而建立起来的免疫检测技术。
基本程序：标记－抗原抗体复合物－底物 根据底物溶液的颜色反应来判定有无相应
的免疫反应。颜色反应的深浅与标本中相 应抗体或抗原的量呈正比。
SPA与IgG结合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗体 活性。
当此被覆着特异性抗体的葡萄球菌与相应的抗原结合 时，就可互相连结引起协同凝集反应，简称COAG。
（二）沉淀试验
可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌 体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等)与相应抗体结合，在适量电解 质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称 为沉淀试验(precipitation test)。
根据参与反应的抗原性质不同，分为由颗粒性 抗原参与的凝集试验和由可溶性抗原参与的沉 淀试验二大类
（一）凝集试验
细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体 结合，在有适当电解质存在下，经过一定 时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝 集试验(agglutination test)。
参与凝集试验的抗体主要为IgG、IgM。 凝集试验可用于检测抗原或抗体。 凝集试验可根据抗原的性质、反应的方式
用于标记的酶
用于标记的酶有辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶
常用的载体颗粒
有Fra Baidu bibliotek细胞(“O”型人红细胞，羊红 细胞)、聚苯乙烯胶乳颗粒，
白陶土、离子交换树脂、火棉胶 致敏颗粒：载体吸附了可溶性抗原
间接血凝试验
将抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体， 在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集，称为间 接血凝试验(passive heamagglutination assay, PHA)
对蛋白质、核酸等高分子物质具有良好的吸附性能。 利用聚苯乙烯乳胶的微球作载体，以吸附某些抗原(或
抗体)，即能用以检测相应的抗体(或抗原)，称为乳胶 凝集反应。(latex agglutination test)
协同凝集试验
葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A，简称SPA) 是大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多 种哺乳动物IgG分子的Fc片结合。
免疫电泳技术
免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳
二、标记抗体技术
抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原 抗体复合物是不可见的。
将特殊物质标记在抗体分子上，通过检测标 记分子来显示抗原抗体复合物的存在，即根 据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感 性建立的技术，称为标记抗体技术(labelled antibody technique)。
数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为 阳性反应。
本法主要用于抗原的定性试验，如炭疽病的诊断 (Ascoli试验)。试验时出现白色沉淀带的最高抗原稀释 倍数，即为血清的沉淀价。
琼脂免疫扩散试验
琼脂的作用 抗原抗体在琼脂凝胶中扩散，当二者在比例
适当处相遇，即发生沉淀反应，形成肉眼可 见的沉淀带，此种反应称为琼脂免疫扩散， 又简称琼脂扩散和免疫扩散。 ➢ 单向单扩散 单向双扩散 ➢ 双向单扩散 双向双扩散
间接凝集试验
将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫 无关的，一定大小的不溶性颗粒(统称为载 体颗粒)的表面，然后与相应抗体(或抗原)作 用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现 的特异性凝集反应称为间接凝集反应。
敏感性高，但特异性较差
可溶性抗原
细菌、立克次氏体及病毒的可溶性抗原 原虫、吸虫、丝虫的浸出液 动物的可溶性物质 激素及各种组织器官浸出液 植物性蛋白质如花粉浸出液等 某些细菌的可溶性多糖
第
免疫血清学技术
用于检测抗原或抗体的体外
四
免疫反应技术或称免疫检测 技术，这一类技术因一般都
需用血清进行试验，通常称
讲
为免疫血清学反应或免疫血
清学技术
一、凝聚性试验
抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质 存在下，相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或 沉淀物，根据是否产生凝聚现象来判定相应抗 体或抗原，称为凝聚性试验
分为直接凝集试验（简称凝集试验）和间 接凝集试验。
直接凝集试验
颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集 现象的试验称作直接凝集试验(direct agglutination test)
玻片法：定性试验，适用于新分离细菌的 鉴定或分型
试管法：定量试验，检测待测血清中是否 存在相应抗体和测定抗体含量
将抗体致敏于红细胞表面，用以检测检样本中相 应抗原，致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝 集，称为反向间接血凝试验(reverse passive heamagglutination assay, RPHA)。
乳胶凝集试验
聚苯乙烯乳胶是利用化工原料聚苯乙稀经过乳液聚合 得到的高分子乳胶液，乳胶微球直径约0.8m。
抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分 子较小，单位体积内所含的量多，与抗体结 合的总面积大，故在作定量试验时，为了不 使过剩，通常稀释抗原，并以抗原稀释度作 为沉淀试验效价。
参加沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉 淀素。
环状沉淀试验
在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁 加入待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层
高敏感性的标记分子
荧光素 酶分子 放射性同位素
荧光抗体技术 酶标抗体技术 同位素标记技术
（一）荧光抗体标记技术
fluorescent-labelled antibody technique
是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然 后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析 示踪相应的抗原或抗体的方法。