医学免疫学实验(精)
医学免疫学实验：噬细胞吞噬功能检测
第二次实验2：吞噬细胞吞噬功能检测一、实验目的学习并掌握吞噬细胞吞噬功能检测。
二、实验原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。
四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞噬细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞噬现象。
通过计算吞噬百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞噬功能。
一、实验材料1. ICR 品系小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. PBS 缓冲液3. 3％硫代乙醇酸钠4.羊红细胞（1％悬液，北京大学医学部实验动物中心提供）5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管及载玻片6. 瑞氏染液、甲醇四、实验步骤1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后，注射羊红细胞（1％悬液）1ml 于小鼠腹腔内。
3. 注射1 小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2 分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。
5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。
6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30 分钟。
取出涂片，用预温的PBS 冲洗3 次，然后用甲醇固定1 分钟，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混匀后，滴于涂片上染色5-10 分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。
五、实验结果观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100 个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。
也可用吞噬指数表示，即将100 个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100。
吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。
医学免疫学CDC实验报告
CDC实验一.实验原理细胞表面抗原与相应的抗体（IgG1~3或IgM）特异性结合形成的免疫复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而导致细胞膜穿孔。
因此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反应；不带抗原的细胞，未损伤，不染色，为阴性反应。
二. 实验步骤1.胸腺细胞悬液制备颈椎脱臼法处死小鼠↓暴露胸腔，分离出胸腺↓镊子夹住胸腺反复轻轻研磨↓单个细胞PBS洗２次，1000rpm，10min↓加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液调节细胞浓度至3-4×107/ml三.结果判断①细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。
②细胞毒性作用的判断标准如下：阴性反应( －) 死细胞占0-10%可疑阳性反应( ±) 死细胞占11-20%弱阳性反应( + ) 死细胞占21-50%阳性反应( ++ ) 死细胞占51-80%强阳性反应(+++ ) 死细胞占81-100%四.结果记录1.表格记录2.照片展示五.讨论①.第①组成阳性的原因：实验中加入抗原、抗体、补体、LC 。
抗原抗体能形成抗原抗体免疫复合物，通过经典途径激活补体，形成攻膜复合物，从而导致细胞膜穿孔，细胞受损，台盼蓝进入细胞，染成蓝色，呈阳性反应。
说明CDC 实验必须要有抗原、抗体、补体共同参与。
②.第②组成阴性的原因：实验中加入抗体、LC。
因为无抗原和补体，不能形成抗原抗体免疫复合物，也无补体，因此不能形成攻膜复合物，不能使细胞膜穿孔，细胞无损伤，台盼蓝无法进入细胞，不能被染成蓝色，呈阴性反应。
说明CDC实验必须要有补体的参与。
③.第③组呈阴性的原因：试验中加入LC和补体，因为无抗原抗体，所以没有抗原抗体免疫复合物的形成，补体不能被激活，不能形成攻膜复合物，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。
说明CDC实验必须要有抗原、抗体的参与。
④.第④组呈阴性的原因：实验中只加入LC，既无抗原抗体免疫复合物的形成，也无补体，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。
医学免疫学实验：免疫器官和免疫细胞
第一次实验：免疫器官和免疫细胞（示教）一、免疫器官免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。
在哺乳类动物，中枢免疫器官包括胸腺和骨髓；在禽类，中枢免疫器官包括胸腺和法氏囊。
外周免疫器官有淋巴结、脾脏等。
1.胸腺胸腺位于胸腔纵隔上部，胸骨后方。
胸腺的组织结构：胸腺分左右两叶，表面覆盖有一层结缔组织被膜，被膜深入实质将实质分割成若干小叶。
胸腺小叶的外层为皮质，内层为髓质。
胸腺皮质区分为浅皮质区和深皮质区。
皮质区内85%-90％的细胞为未成熟的T 细胞。
髓质区内有大量的胸腺上皮细胞和稀疏分散的较成熟的胸腺细胞、单核﹣巨噬细胞和树突状细胞。
人类胸腺在胚胎期及出生后2岁内生长很快，体积较大；2岁后到青春期发育仍很快；但青春期后开始萎缩，逐渐由脂肪组织所代替，它在机体免疫功能的建立上占有重要地位。
骨髓内有部分淋巴细胞迁移到胸腺内，在胸腺素的影响下，增殖分化成为具有免疫功能的T 细胞，再经血流输送到淋巴结和脾等周围免疫器官发挥免疫功能。
若新生期切除胸腺或胸腺生长肿瘤，可导致细胞免疫功能显著下降，常因感染而死亡。
胸腺组织切片2.骨髓骨髓位于骨髓腔中，分为红骨髓和黄骨髓。
红骨髓有造血功能，由造血组织和血窦构成。
造血组织主要由基质细胞和造血细胞组成。
基质细胞包括网状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等。
骨髓是各类血细胞和免疫细胞发生的场所。
骨髓又是B 细胞分化成熟的场所和体液免疫应答发生的场所。
因此骨髓既是中枢免疫器官又是外周免疫器官。
骨髓概述图3.法氏囊在禽类，法氏囊是位于泄殖腔上方的一个囊状物，内充满着淋巴组织，其中淋巴细胞不断受囊素的影响，发育成B 淋巴细胞。
若新生期切除法氏囊，抗体的形成将受影响，而细胞免疫功能不受影响。
对于 B 淋巴细胞发育而言，禽类的法氏囊具有哺乳类动物骨髓相似的作用。
法氏囊外观4.淋巴结淋巴结的实质分为皮质区和髓质区两部分。
皮质区分为浅皮质区和深皮质区两部分。
浅皮质区靠近被膜下，是B 细胞定居的场所，称为非胸腺依赖区。
医学免疫学实验一抗原抗体反应
抗原制备方法
1 合成抗原
通过化学合成方法合成具有抗原性的化合物。
2 提取抗原
从生物样品中提取具有抗原性的分子。
3 重组技术
利用基因工程技术制备具有抗原性的蛋白质。
抗体制备方法
1 动物免疫法
2 体外免疫法
将抗原注射到动物体内，使其产生抗体。
利用体外细胞培养系统产生抗体。
3 单克隆抗体技术
通过细胞融合技术制备单克隆抗体。
抗原抗体反应对抗原浓度非常敏感，可用 于定量检测。
抗原抗体反应的分类
直接反应
直接检测抗原或抗体的存在， 例如免疫荧光法和酶联免疫 吸附试验（ELISA）。
间接反应
利用辅助物质间接检测抗原 或抗体的存在，例如免疫印 迹法（Western Blotting）。
功能性反应
评价抗体的生物学活性，例 如中和试验和血凝试验。
医学免疫学实验一抗原抗 体反应
本讲座将介绍医学免疫学实验中的抗原抗体反应的基本原理和方法，并探讨 其在疾病诊断和药物应用中的重要性。
什么是抗原
抗原是指能诱导机体免疫反应的物质，可以是细菌、病毒、细胞、蛋白质或多糖等。
什么是抗体
抗体是机体免疫系统产生的一类蛋白质，具有识别和结合抗原的能力。
抗原与抗体的相互作用
抗原检测方法
酶联免疫吸附试验 （ELISA）
利用酶标记的抗体或抗原进 行检测，常用于病毒和细菌 的检测。
免疫电泳法
利用电泳分离技术检测抗原 的存在，常用于蛋白质分析。
免疫层析法
利用成型的免疫层析柱分离 和检测抗原和抗体，常用于 快速筛查。
抗体检测方法
免疫荧光法
利用荧光标记的抗体检测目 标物，常用于细胞和组织的 检测。
医学免疫学实验
【实验方法】
1. 标记。取洁净载玻片1块，如下图标记。
A B
2. 采血。用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采 血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。收入小 试管，用吸管各取适量分别加在载玻片的两端。
A B
3. 加抗体。将抗A、B试剂分别加1滴与玻片上两 侧的血液混匀。
A
抗A
B
抗B
4. 观察红细胞有无凝集发生？ 如有凝集，可见红细胞凝集成细沙样； 无凝集，红细胞呈均匀分散。
【讨论】
实验二、直接凝集反应（玻片法） —— 血型鉴定
玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作 为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗 原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼 观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便， 快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断 或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
医学免疫学实验（一） ——凝集反应
【实验目的】
1. 了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 2. 掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和 结果分析。
【实验内容】
1. 直接凝集反应（试管法）— 溶血素效价的测定 2. 直接凝集反应（玻片法) — 血型鉴定
3. 间接凝集反应 — RF因子的乳胶凝集实验（示教）
NS (ml)
溶血素 (ml)
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
弃去
—
0.2
稀释度
1%SRBC(ml）
1:100
0.2
1:200
0.2
医学免疫学实验报告
医学免疫学实验报告免疫学实验报告引言：免疫学是研究人体免疫系统的科学，通过实验研究可以更好地了解免疫系统的功能和应对机制。
本次实验旨在探究免疫系统对外来抗原的应答过程，并评估免疫细胞的活性和效能。
实验材料与方法：1. 实验动物：使用小鼠作为实验对象，因其免疫系统与人类相似度较高。
2. 抗原制备：选择一种常见的抗原，如牛血清白蛋白（BSA），通过纯化和浓缩得到高纯度的抗原溶液。
3. 免疫程序：将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组注射抗原溶液，对照组注射生理盐水。
观察并记录两组小鼠的免疫应答情况。
4. 免疫指标测定：采集小鼠血液样本，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术测定血清中特定免疫球蛋白（如IgG、IgM）的水平。
实验结果与讨论：1. 免疫应答：实验组小鼠在注射抗原后，免疫系统迅速启动，产生针对抗原的特异性免疫应答。
对照组小鼠未注射抗原，免疫系统无明显应答。
2. 抗原特异性免疫球蛋白：ELISA结果显示，实验组小鼠血清中特定抗原特异性免疫球蛋白（如IgG）的水平显著升高，而对照组无明显变化。
这表明实验组小鼠的免疫系统成功识别并产生了针对抗原的免疫应答。
3. 免疫细胞活性：通过流式细胞术等技术，观察并比较实验组和对照组小鼠免疫细胞的活性。
实验结果显示，实验组小鼠的免疫细胞活性较高，表明其免疫系统对抗原的识别和攻击能力增强。
4. 免疫记忆效应：在实验组小鼠中，注射抗原后，免疫系统形成了对抗原的记忆效应。
再次注射相同抗原时，免疫应答更为迅速和强烈。
而对照组小鼠未形成明显的免疫记忆效应。
结论：本次实验结果表明，免疫系统对外来抗原具有高度的特异性和记忆性。
免疫细胞的活性和效能在免疫应答中起到关键作用。
这些实验数据为进一步研究免疫系统的功能和应对机制提供了重要依据。
展望：在未来的研究中，可以进一步探究免疫系统对不同类型抗原的应答差异，以及免疫细胞的分化和调控机制。
此外，可以结合其他技术手段，如基因工程和单细胞测序，深入研究免疫系统的细节和复杂性。
医学免疫学实验技术
医学免疫学实验技术医学免疫学实验技术是研究和应用免疫学原理和方法的一门学科。
它主要通过实验手段来观察和分析生物体对外界抗原的免疫反应，从而揭示机体的免疫机制和疾病发生发展的规律。
本文将从实验技术的基本原理、常用实验方法和应用领域等方面进行介绍。
一、实验技术的基本原理免疫学实验技术的基本原理是利用生物体对抗原的特异性免疫反应来检测、分离和定量抗原或抗体。
根据抗原和抗体的相互作用原理，可以通过免疫沉淀、电泳、免疫荧光、酶联免疫吸附等方法来分离和检测抗原或抗体。
同时，还可以利用免疫反应的特异性和高度敏感性来检测和定量微量物质。
二、常用实验方法1. 免疫沉淀法：该方法利用抗原与抗体的特异性结合，将抗原-抗体复合物与载体（如蛋白A、蛋白G等）结合，经过离心沉淀后，可以分离出抗原和抗体。
2. 免疫电泳法：该方法将待测样品经过电泳分离后，利用抗体与目标抗原的结合，形成免疫沉淀带。
通过电泳分离的方式，可以实现对不同抗原的检测和分离。
3. 免疫荧光法：该方法利用荧光标记的抗体与待测样品中的抗原结合，通过荧光显微镜观察荧光信号的强弱来检测抗原的存在和定量。
4. 酶联免疫吸附法：该方法利用酶标记的抗体与待测样品中的抗原结合，通过酶的催化作用，将底物转化为可见的产物，从而实现对抗原的检测和定量。
三、应用领域医学免疫学实验技术在临床诊断、疾病预防和药物研发等领域具有广泛的应用价值。
1. 临床诊断：免疫学实验技术可以用于检测和诊断各类感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等。
例如，通过检测患者体液中的特定抗体或抗原，可以判断患者是否感染了某种病原体或患有某种疾病。
2. 疾病预防：免疫学实验技术可以用于疫苗的研制和评价。
通过检测疫苗接种后患者体内产生的特定抗体水平，可以评估疫苗的免疫效果，并为疫苗的改良和研发提供依据。
3. 药物研发：免疫学实验技术可以用于药物的研发和评价。
通过检测药物对免疫反应的影响，可以评估药物的免疫调节作用和毒副作用，为药物研发提供参考。
医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。
该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能，是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。
本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。
小鼠是啮齿目中体形较小的动物，淋巴系统很发达，包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。
本实验在带教老师指导下，解剖小鼠，观察胸腺、脾脏等免疫器官，并制血涂片，观察小鼠免疫细胞。
（一）小鼠免疫器官解剖学观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。
２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液。
３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。
【方法】１小鼠脱臼处死，投入盛有3%来苏尔水的缸内，浸泡5分钟。
取出小鼠，仰卧位置于试验台上，使动物腹部朝上。
２以镊子提起耻骨处皮肤，用剪刀沿正中线直剪开至下颌部，然后钝性分离皮肤，再把皮肤向四肢剪开。
３注意观察腹壁，用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开，观察腹腔液量及性状，观察脾脏。
４切开膈肌，剪断胸骨，翻起胸骨，观察胸腺、心脏及肺脏，胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方，内有许多大淋巴细胞（即前胸腺细胞）及特定的上皮网状细胞（分泌胸腺激素）。
５解剖结束，深埋动物。
（二）免疫细胞的形态观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。
２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液，pH8.6硫酸盐缓冲液，20%盐酸甲醇。
３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。
【方法】１准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于固定标本。
２剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制备血涂片，自然干燥。
３瑞氏染色（１）染色：甲醇固定标本２分钟（亦可省略），滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜，染色１分钟，再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水，用洗耳球吹打，使之与染液混匀，静置染色8～10分钟，弃去染料，水洗。
（２）脱色：用20%盐酸甲醇脱色，肉眼观察玻片呈粉红色为宜，显微镜下观察结果。
医学免疫学实验报告
医学免疫学实验报告
免疫考试终于结束了，终于可以和补体抗体抗原细胞因子适应性免疫应答固有免疫应答say goodbye了，真的是好开心，在持续一天的开心快乐之后，莫名觉得好空虚，可能长大了，发现快乐没有来得那么容易，像是被掏空了自己，但是还是要坚持，毕竟真的不是小孩子了，要对自己做的事情负责，感觉我又开始废话连篇了，还是直接进入主题吧
我们这学期做了三个免疫实验，实验内容、实验原理相对简单，其中两个实验是关于免疫学检验技术的，
1、补体介导的细胞毒试验：
2、沉淀反应与凝集反应（凝集与双扩）
3、酶联免疫吸附测定（ELISA）
在写实验报告时的一些建议：
1、写实验步骤时，尽量使用流程图的方式来展示，这样可以使自己的实验步骤简洁、明了；
2、在实验过程中，尽管实验比较简单，但是还是要注意记录好实验的数据（实验时间、实验药剂用量）、实验现象，并在实验报告中记录出来；
3、在写实验结果、结论的时候，对实验过程、实验结果要有所思考，可以采用问答的方式展现自己的思考（这是最重要的，含金量最重）。
医学免疫学实验
第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。
2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。
3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。
4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。
6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。
7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。
8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。
9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。
主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。
10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。
11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。
中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。
12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。
当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。
填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。
2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。
3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。
医学免疫学实验报告
医学免疫学实验报告引言免疫学是研究机体对各种病原体的防御和免疫反应的科学。
在医学领域中，免疫学的研究对于了解和探索疾病的发生机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。
本实验旨在探索免疫系统的功能，并通过一系列实验步骤来加深对医学免疫学的理解。
实验材料和方法实验材料•小鼠•细菌•离心管•注射器•细胞培养基实验步骤1.实验准备：收集所需实验材料，确保实验环境的无菌性。
2.小鼠接种：将小鼠分为两组，一组为实验组，一组为对照组。
对实验组小鼠进行细菌接种，而对照组小鼠则不接种。
3.细菌培养：将细菌培养在适当的培养基中，以获取足够的细菌量。
4.细菌注射：使用注射器将培养好的细菌注入实验组小鼠的体内，同时对照组小鼠注射等量的生理盐水。
5.观察实验组小鼠：观察实验组小鼠在接种细菌后的反应和症状。
6.采集样本：在一定时间内，从实验组和对照组小鼠中采集血液样本和其他相关样本。
7.样本处理：将采集到的样本进行离心，分离出血清和细胞。
8.免疫检测：使用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，对采集到的样本进行免疫检测。
9.数据分析：统计和分析实验数据，比较实验组与对照组的免疫反应差异。
结果与讨论通过上述实验步骤，我们进行了医学免疫学的实验研究。
初步结果显示，实验组小鼠在接种细菌后表现出明显的免疫反应，包括体温升高、免疫细胞增加等。
而对照组小鼠则没有出现这些免疫反应。
进一步的免疫检测结果显示，实验组小鼠血清中特定抗体水平升高，说明它们对细菌产生了免疫应答。
而对照组小鼠血清中的抗体水平相对较低。
通过本实验，我们验证了医学免疫学中关于免疫应答的理论，并了解了免疫系统在抵御细菌感染中的作用。
这对于研究疾病的发生机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。
结论本实验通过对小鼠进行细菌接种，研究了免疫系统对细菌的免疫应答。
实验结果表明，细菌接种后实验组小鼠显示出免疫反应，而对照组小鼠则没有。
免疫检测结果进一步证实了实验组小鼠对细菌免疫的产生。
医学免疫学实验： 琼脂免疫扩散实验
第二次实验1：琼脂免疫扩散实验一、实验目的了解并掌握单向琼脂免疫扩散法和双向琼脂免疫扩散法。
二、实验原理1.网格学说可溶性抗原与相应抗体以合适的比例发生特异反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，经过一定的时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。
沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、脂类等。
当抗原过剩或者抗体过剩时，只能形成微小的沉淀物。
2.单向琼脂免疫扩散法的基本原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加定量的抗原，抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。
同时，用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，可用以定量检测未知标本的抗原浓度（mg / ml 或IU / ml )。
3.双向琼脂免疫扩散法的基本原理双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。
沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原和抗体的特异性及相互间浓度比例，而且与其分子大小及扩散速度有关。
当抗原抗体存在多种系统时，可呈现多条沉淀线以至交叉反应。
三、实验材料1.单向琼脂免疫扩散法实验材料2％离子琼脂，载玻片，标准马抗人IgG 血清（抗体，工作标准参考蛋白，PBS ( pH 7.2,0.01M)，打孔器（孔径3mm）及打孔模板，微量加样器，湿盒（容器内湿纱布或泡沫塑料），单人份待检血清标本（浓度分别为1/30、1/40和1/50)2.双向琼脂免疫扩散法实验材料1％琼脂（生理盐水配制）管，每管约4ml载玻片；打孔器及打孔模板微量加样器及塑料吸头；抗原：0.5ug/ ml 牛血清白蛋白(BSA )、0.5ug/ ml 人血清白蛋白(HSA )；抗体：兔抗人血清白蛋白、兔抗牛血清白蛋白湿盒。
四、实验步骤（1）单向琼脂免疫扩散1按照玻片的大小，准备制作琼脂板所需要的1％离子琼脂，融化后置于56-60℃水浴锅中待用。
（分装其1/2量的2％盐水琼脂）。
稀释抗体，用pH7.2的PBS 稀释标准抗人IgG 抗体，终浓度为抗体效价的一倍。
实验报告 - 医学免疫学
实验报告 - 医学免疫学
实验名称：人类血清免疫球蛋白含量测定实验
一、实验目的：
本实验旨在通过学习单因素比较法测定人类血清免疫球蛋白的含量。
二、实验原理：
本实验采用单因素比较法，利用已知浓度标准品与待测样品进行比较，从而测定待测样品中免疫球蛋白的含量。
在本实验中，用样品与标准品混合后进行免疫共沉淀，得到的沉淀物可以用BCA法或者Bradford法定量，从而测定待测样品中免疫球蛋白的含量。
三、实验步骤：
1. 准备标准品和待测样品，标准品为人类免疫球蛋白。
2. 将标准品和待测样品分别加入试管中，每个试管加入1 ml。
3. 加入NaCl溶液至试管至5 ml。
4. 加入100 μl的兔抗人IgG抗血清，覆盖瓶口，置于4℃静置过夜。
5. 旋转离心，取上清液并分别定量。
四、实验结果：
本实验得到的结果如下表所示：
样品编号 | 试剂盒编号 | 每1 ml含IgG量（mg）
--------- |----------| ---------------------
样品1 | 001 | 10.2
样品2 | 002 | 9.6
样品3 | 003 | 12.0
样品4 | 004 | 11.5
标准品 | 005 | 13.0
根据实验结果可以看出，样品中免疫球蛋白的含量相对于标准品略有差异，但整体来说，差异并不明显，说明本实验所使用的测定方法准确可靠。
本实验结果为进一步的医学研究提供了重要数据，可为医生提供更准确的诊断结果，为医学研究提供了有力支持。
医学免疫学实验：补体介导的细胞毒试验
补体介导的细胞毒试验一、实验目的学习并掌握补体介导的细胞毒试验的实验原理及实验步骤。
二、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。
染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。
此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。
本实验中，Thy-1 抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。
三、实验材料1.解剖器械(眼科剪、眼科镊)、平皿、80～100 目不锈钢网2. 试管、lml 吸量管、尖吸管3. 载玻片、盖玻片4. C57BL／6J 小鼠5. 1640溶液6. 抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体（最适稀释度，本室制备）7. 补体(豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为最佳稀释度)8. 1％伊红-Y 染液四、实验步骤1. 小鼠胸腺细胞悬液的制备：将4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4ml 冷1640溶液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000rpm，5 分钟，用1640溶液洗两次。
将沉淀的细胞重悬于1640溶液中，配成1×10^7／ml 细胞悬液。
2. 取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×107／ml 胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体(最适稀释度)及1640溶液，放入37℃温箱30 分钟。
3.取出后每管加入1％伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。
4.重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。
先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。
五、实验结果死细胞呈红色，无光泽且肿胀变大；活细胞不着色、有光泽且形态正常。
医学免疫学实验 免疫细胞及其功能检测技术
细胞免疫的体外检测
•大、小吞噬细胞 •大吞噬细胞－单核巨噬细胞 •小吞噬细胞－中性粒细胞
血涂片大吞噬细胞
大吞噬细胞吞噬实验（示教）
※ 观察示教，并作图
巨噬细胞吞噬作用
2、淋巴细胞的测定
（一）T细胞总数及亚群的测定 （二）T细胞功能的测定
1.淋巴细胞增殖试验 形态学方法、3H-TdR掺入法等。
2.细胞毒试验 3.细胞因子测定
T
+
T
T T
1）T细胞花环形成试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，形成花环。
计数200个淋巴细胞，结合3个SRBC或以上者的E 花环 阳性细胞数。
玫瑰花环试验
E-rosette formation test
正常范围：50%-80%
2. T细胞增殖试验（淋巴细胞转化试验）
医学免疫学实验
细胞免疫的体外检测
1.小吞噬细胞的吞噬作用（操作） 2.E-花环试验、淋巴细胞转化试验、大、
小吞噬细胞的吞噬现象（示教）
小吞噬细胞的吞噬作用
1. 抽取2ml血到抗凝管 2. 加入等量菌液，混匀 3. 37ºC反应30min 4. 加1小滴推片（制作血涂片） 5. 自然干燥 6. 加瑞氏染液以及等量蒸馏水反应10sec 7. 细水流冲洗 8. 吸干后油镜检查
医学：医学免疫学实验
介绍免疫学在医学领域的应用， 如疫苗研发、自身免疫病治疗等。
02
医学免疫学基础知识
免疫系统概述
免疫系统是人体的重要防线，负责识 别和清除外来病原体、细胞和物质。
免疫系统通过非特异性免疫和特异性 免疫两种方式来抵御病原体的入侵。
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免 疫分子组成，具有防御、自稳和监Βιβλιοθήκη 功能。免疫细胞的种类与功能
吞噬细胞
T细胞
作为非特异性免疫的重要成分，吞噬细胞 能够吞噬和消化病原体和其他外来物质。
T细胞是特异性免疫中的重要细胞，分为辅 助T细胞、细胞毒T细胞和调节T细胞，分别 参与免疫应答的调节、杀伤和抑制作用。
B细胞
NK细胞
B细胞能够产生特异性抗体，通过与抗原的 结合来清除病原体。
自然杀伤细胞，能够直接杀伤某些肿瘤细 胞和被病毒感染的细胞。
免疫应答的机制
免疫应答是机体对病原体或其他外来物质的识别、清 除和记忆过程，分为非特异性免疫应答和特异性免疫
应答。
非特异性免疫应答是机体对所有外来物质的快速反应， 主要由吞噬细胞等非特异性免疫细胞介导。
特异性免疫应答是机体对特定外来物质的特异反应， 主要由T细胞和B细胞介导，具有记忆功能，能够针对
探究疾病发病机制
通过实验探究某些疾病的发病 机制，了解免疫系统在疾病发 生发展中的作用。
评估免疫疗法效果
通过实验手段评估免疫疗法在 治疗某些疾病中的效果和作用
机制。
实验背景
01
免疫学发展历程
简要介绍免疫学的发展历程，以 及其在医学领域的重要地位和作 用。
02
03
免疫系统组成
免疫学应用
简要介绍免疫系统的组成，包括 各种免疫细胞、组织器官和分子 等。
医学免疫学实验设计
实验后应对实验结果进行严格 的审核和分析，确保实验结果
的准确性和可靠性。
安全管理制度完善及执行情况检查
免疫学实验室应建立完善的安全管理制度，包括实验室安全、生物安全、化学品安 全等方面的管理制度。
实验室人员应严格遵守安全管理制度，加强安全意识教育，提高安全防范能力。
定期对实验室进行安全检查，及时发现和排除安全隐患，确保实验室的安全运行。
数据分析方法
根据实验目的和数据特点，选择合适的数据分析方法，如 描述性统计、假设检验、方差分析等。
结果呈现
将分析结果以图表、表格等形式呈现，使结果更加直观和 易于理解。同时，撰写实验报告或论文，将实验结果和结 论进行交流和分享。
05
免疫学实验结果解读与讨论
结果呈现方式选择及优缺点比较
表格呈现
适用于展示大量数据，便于比较和分析，但可能 缺乏直观性。
医学免疫学实验设计
汇报人：XX 2024-01-23
contents
目录
• 实验设计概述 • 免疫学实验技术 • 实验动物与模型选择 • 免疫学实验方案设计与实施 • 免疫学实验结果解读与讨论 • 免疫学实验质量控制与安全管理
01
实验设计概述
实验目的与意义
01
02
03
探究免疫学机制
通过实验手段深入探究免 疫系统的组成、功能及调 控机制，为免疫学理论研 究提供实验依据。
设计实验方案
制定详细的实验计划，包括实 验分组、样本处理、观察指标 、数据收集与分析等。
结果分析
对实验数据进行统计分析，验 证实验假设并得出结论。
02
免疫学实验技术
抗原抗体反应技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
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注意事项
在加入抗HCG血清后，一定要将其充分混匀，静 置1-2分钟后再进行下一步，这是为了使可溶性抗 原与抗体能够充分反应，以免其反应不足造成假阳性。
本次实验中，出现凝集现象的为实验阴性， 不出现凝集现象的反而为阳性。
临床意义
人工流产或剖宫术后无胎盘组织残留者，HCG转为 阴性。
绒毛膜上皮癌、葡萄胎及睾丸畸胎瘤病人尿中， HCG含量远较正常妊娠尿液为高，将尿液作1∶200 稀释后仍可呈阳性反应。 术后可转为阴性，若仍为阳性应考滤手术不彻底或肿 瘤已有转移。
沉淀反应
基本概念
沉淀反应：可溶性抗原与相应的抗体结
的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的种类可
合，在有适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见
分为环状沉淀反应、絮状反应和琼脂扩散等。
可溶性Ag ＋ 相应Ab 比例适当 肉眼可见沉淀物
电解质
分类：
沉 淀 反 应
絮状反应 琼脂扩散
单向扩散 双向扩散 火箭电泳
环状沉淀反应
＋
电泳 对流免疫电泳
单向扩散
即将定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔加入 抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合 适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的
浓度成正比，故该试验是定量试验。
双向扩散
即将抗原和抗体 分别加入琼脂对 应的孔中，二者 会向四周扩散， 在二者比例
医学免疫学实验
免疫学教研室
间接凝集抑制试验 沉淀反应
实验目的
掌握间接凝集抑制试验、沉淀反应的操作及 结果的正确观察、判断. 熟悉间接凝集抑制试验、沉淀反应的原理. 了解间接凝集抑制试验、沉淀反应的用途.
间接凝集抑制实验
分类及概念
•血清学反应:
在血清中进行的抗原抗体反应.
凝集反应:
火箭免疫电泳
单向扩散+电泳： 将单向扩散与电 泳技术相结合的 一种方法。 沉淀峰的高度与 抗原的浓度成正 比。
对流免疫电泳的原理
蛋白质抗原在碱性环境中，其羧基发生电离而带负电荷，在电泳时 从负极向正极移动。 抗体分子在电场中从正极向负极移动。
实验步骤
制板
3－4ml琼脂
打孔
孔间距3mm
试验材料
1、标本：非孕妇、待检尿
２、试剂：兔抗人HCG血清、HCG致敏的 乳胶颗粒
３、器材：载玻片、滴管、玻棒
实验方法
加尿液标本
待检尿 非孕妇尿
加兔抗人HCG免疫血清
混匀静置2分钟
加HCG致敏的乳胶颗粒
混匀静置2分钟
观察结果
实验结果
非孕妇尿 出现均匀一致的白色细小凝集物。
待检尿 若出现凝集则为HCG阴性，若仍呈 均匀浑浊乳状液则为HCG阳性。
间接凝集抑制试验
可溶性抗原与相应抗体结合后并不能产生凝集反应，怎
样才能用肉眼就能观察到可溶性抗原与相应抗体的结合呢？
实验原理
间接凝集示意图:
间接凝集抑制示意图:
妊娠免疫诊断试验
孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。
（HCG是可溶 性抗原 ）
反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗 HCG抗体。
在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原和相 应抗体反应能够产生肉眼可见的凝块。
注意以下几个方面:
第一: 参与反应的抗原必须是体积较大的颗粒性抗原，比如说细菌、 红细胞等，都属于颗粒性抗原的范畴。 第二: 必须是相应的抗原抗体才能发生凝集反应 第三: 必须有电解质的参与 第四: 凝集块是一种肉眼能够见到的细小均匀块状物质。
合适处形成白
色沉淀线。
电泳
定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电
极移动，称为电泳。
原理：蛋白质是一种两性电解质，其具有游离
的氨基和羧基，每种蛋白质都具有自己的等电点 （PI)，等电点的高低取决于蛋白质的性质，在等 电点时，蛋白质带正负电荷相等。在ph › PI时， 羧基解离得多，致使蛋白质带负电荷，向着正极移 动。在ph ‹ PI时，氨基解离得多，带正电荷，向 着负极移动。
封底 加样 电泳
切割火焰2－3 次
抗体
抗原
约7ul
总电流＝4mA/cm x 2.5cm(板宽) x NFra bibliotek板数）30分 钟
实验结果
注意事项
抗原抗体不能放反 加样前须封底 样品不能从孔内溢出 电泳时电流大小须合适
实验报告（交单页）
原理 方法 结果