体液免疫检测技术
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动物布鲁氏菌病诊断
教学实习
教学实习目标
1.掌握教学实习方案设计； 2.掌握病料采集、保存与送检方法； 3.掌握动物布鲁氏菌病诊断的实验室操作技术及结果
判定； 4.掌握撰写教学实习报告方法； 5.培养学生无菌操作、生物安全等职业素养和职业道
德。
教学实习
教学实习内容
1.教学实习方案设计； 2.病料采集、保存与送检方法； 3. 动物布鲁氏菌病诊断的实验室操作及
结果判定； 4.撰写教学实习报告。
教学实习
一、概念： 布鲁氏菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌引起
的人、畜共患的传染病。在家畜中，牛、羊、猪最常 发生，且可由牛、羊、猪传染给人和其他家畜。其特 征是生殖器官和胎膜发炎，引起流产、不育和各种组 织的局部病灶。
二、检测技术
血清学检测技术 病原学检测技术
检血清进行判定。 2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见的凝集现象者
判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为（）。
教学实习
教学实习
虎红平板凝集试验照片
教学实习
虎红平板凝集试验照片
教学实习
虎红平板凝集试验照片
教学实习
虎红平板凝集试验照片
教学实习
教学实习
虎红平板凝集试验照片
0.5wenku.baidu.com
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
充分混匀37℃18-24小时温育
结果
判定
++++
+++
++
+
-
-
n
0.5 弃去0.5
0.5 0.5 0.5
-
教学实习
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（羊）
1
2
3
4
5
-
n
血清稀 释度 1:25
1:50 1:100 1:200 1:400
0.5% 石
炭酸
1.15
教学实习
3 布病试管凝集试验
3.1 材料准备
3.1.1 稀释液
0.5%石炭酸生理盐水，检验羊血清时用含有0.5%
石炭酸的10%盐溶液，如果稀释用含0.5%石炭酸的10%
盐溶液，抗原的稀释亦用含0.5%石炭酸的10%盐溶液。
3.1.3 凝集试验管（三分管）、试管架、吸管及温箱。
3.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标单位提供， 按说明书使用。
教学实习
教学实习
（一）血清学检测技术
1、凝集反应
抗原与抗体之间具有特异性的化学亲和力，当
它们比例合适时，则构成一个大复合物，在电解质
(一般用生理盐水)的作用下,形成肉眼看可见凝集现
象，因此称为凝集反应。
教学实习
2、虎红平板凝集试验 2.1 材料准备 2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提
供，按说明书使用。 2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和
腐败气味。
教学实习
2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm的方格。 2.1.4 吸管或分装器，适用于滴加0.03ml。 2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。 2.2 操作方法 2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应
教学实习
3.2 操作方法 3.2.1 按常规方法采血分离血清。 3.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和受热，以免
影响凝集价。若3d内不能送到实验室，按每9ml血清 加1ml 0.5%石炭酸生理盐水（徐徐加入）防腐，也可 用冷藏方法运送血清。
教学实习
3.2.3 受检血清的稀释 3.2.3.1 第1管标记检验编码后加1.15ml稀释液。 3.2.3.2 第2~4管各加入0.5ml稀释液。 3.2.3.3 然后用1ml 吸管取被检血清0.1ml；加入第
3.2.3.6 稀释完毕，从第1至第4管的血清稀释度分别 为1:12.5 ; 1:25 ; 1:50 和1:100。
3.2.3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与上述基本一 致，差异是第1管加1. 2ml稀释液和0.05ml被检血清。
教学实习
3.2.3.8 将0.5ml 20倍稀释的抗原加入已稀释好的各 血清管中，并振摇均匀，羊和猪的血清稀释则依次变 为1:25 ; 1:50 ; 1:100和1:200，牛、马和骆驼的血 清稀释度则依次变为1:50 ; 1:100；1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、马、骆驼用 1:50 和1:100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25 和1:50 。
a) 阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方
法与受检血清同。
b) 阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴度，
加抗原的方法与受检血清同。
1管内，并混合均匀。混合方法是将该试管中的混合 液吸入吸管内，再沿试管壁吹入试管中，如此吸入、 吹出3~4，充分混合后以该吸管吸混合液0.25ml弃去。
教学实习
3.2.3.4 取0.5ml混合液加入第2管，用该吸管如前述 方法混合。
3.2.3.5 再吸第2管混合液0.5ml至第3管，如此倍比稀 释至第4管，从第4管弃去混匀液0.5ml。
教学实习
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（牛）
血清稀 释度
0.5% 石 炭 酸 生理盐水
被检血清或 阳阴性血清 对照
总量
加抗原（1： 20）
1 1:50 1.2 0.05 0.5 0.5
2 1:100
3 1:200
4 1:400
5 1:800
0.5
0.5
0.5
0.5
0.75
弃去0.25
0.5
0.5
0.5
血清 0.03ml 。 2.2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。 2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
教学实习
2.2 操作方法 2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应
血清 0.03ml 。 2.2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。 2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。 2.3 判定 2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
10%盐水
被检血
弃去0.5
清或阳 阴性血
0.1
0.75 弃去0.25
0.5
0.5
0.5
0.5
清对照
总量
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
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加抗原
（1：20） 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
充分混匀37℃18-24小时温育
结果
判定
++++
+++
++
+
-
-
教学实习
3.2.3.10 每次检验均应设阳性血清、阴性血清和抗原 对照，即
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教学实习目标
1.掌握教学实习方案设计； 2.掌握病料采集、保存与送检方法； 3.掌握动物布鲁氏菌病诊断的实验室操作技术及结果
判定； 4.掌握撰写教学实习报告方法； 5.培养学生无菌操作、生物安全等职业素养和职业道
德。
教学实习
教学实习内容
1.教学实习方案设计； 2.病料采集、保存与送检方法； 3. 动物布鲁氏菌病诊断的实验室操作及
结果判定； 4.撰写教学实习报告。
教学实习
一、概念： 布鲁氏菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌引起
的人、畜共患的传染病。在家畜中，牛、羊、猪最常 发生，且可由牛、羊、猪传染给人和其他家畜。其特 征是生殖器官和胎膜发炎，引起流产、不育和各种组 织的局部病灶。
二、检测技术
血清学检测技术 病原学检测技术
检血清进行判定。 2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见的凝集现象者
判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为（）。
教学实习
教学实习
虎红平板凝集试验照片
教学实习
虎红平板凝集试验照片
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虎红平板凝集试验照片
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虎红平板凝集试验照片
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虎红平板凝集试验照片
0.5wenku.baidu.com
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充分混匀37℃18-24小时温育
结果
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0.5 弃去0.5
0.5 0.5 0.5
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布鲁氏菌病试管凝集反应试验（羊）
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血清稀 释度 1:25
1:50 1:100 1:200 1:400
0.5% 石
炭酸
1.15
教学实习
3 布病试管凝集试验
3.1 材料准备
3.1.1 稀释液
0.5%石炭酸生理盐水，检验羊血清时用含有0.5%
石炭酸的10%盐溶液，如果稀释用含0.5%石炭酸的10%
盐溶液，抗原的稀释亦用含0.5%石炭酸的10%盐溶液。
3.1.3 凝集试验管（三分管）、试管架、吸管及温箱。
3.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标单位提供， 按说明书使用。
教学实习
教学实习
（一）血清学检测技术
1、凝集反应
抗原与抗体之间具有特异性的化学亲和力，当
它们比例合适时，则构成一个大复合物，在电解质
(一般用生理盐水)的作用下,形成肉眼看可见凝集现
象，因此称为凝集反应。
教学实习
2、虎红平板凝集试验 2.1 材料准备 2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提
供，按说明书使用。 2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和
腐败气味。
教学实习
2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm的方格。 2.1.4 吸管或分装器，适用于滴加0.03ml。 2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。 2.2 操作方法 2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应
教学实习
3.2 操作方法 3.2.1 按常规方法采血分离血清。 3.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和受热，以免
影响凝集价。若3d内不能送到实验室，按每9ml血清 加1ml 0.5%石炭酸生理盐水（徐徐加入）防腐，也可 用冷藏方法运送血清。
教学实习
3.2.3 受检血清的稀释 3.2.3.1 第1管标记检验编码后加1.15ml稀释液。 3.2.3.2 第2~4管各加入0.5ml稀释液。 3.2.3.3 然后用1ml 吸管取被检血清0.1ml；加入第
3.2.3.6 稀释完毕，从第1至第4管的血清稀释度分别 为1:12.5 ; 1:25 ; 1:50 和1:100。
3.2.3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与上述基本一 致，差异是第1管加1. 2ml稀释液和0.05ml被检血清。
教学实习
3.2.3.8 将0.5ml 20倍稀释的抗原加入已稀释好的各 血清管中，并振摇均匀，羊和猪的血清稀释则依次变 为1:25 ; 1:50 ; 1:100和1:200，牛、马和骆驼的血 清稀释度则依次变为1:50 ; 1:100；1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、马、骆驼用 1:50 和1:100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25 和1:50 。
a) 阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方
法与受检血清同。
b) 阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴度，
加抗原的方法与受检血清同。
1管内，并混合均匀。混合方法是将该试管中的混合 液吸入吸管内，再沿试管壁吹入试管中，如此吸入、 吹出3~4，充分混合后以该吸管吸混合液0.25ml弃去。
教学实习
3.2.3.4 取0.5ml混合液加入第2管，用该吸管如前述 方法混合。
3.2.3.5 再吸第2管混合液0.5ml至第3管，如此倍比稀 释至第4管，从第4管弃去混匀液0.5ml。
教学实习
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（牛）
血清稀 释度
0.5% 石 炭 酸 生理盐水
被检血清或 阳阴性血清 对照
总量
加抗原（1： 20）
1 1:50 1.2 0.05 0.5 0.5
2 1:100
3 1:200
4 1:400
5 1:800
0.5
0.5
0.5
0.5
0.75
弃去0.25
0.5
0.5
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血清 0.03ml 。 2.2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。 2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
教学实习
2.2 操作方法 2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应
血清 0.03ml 。 2.2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。 2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。 2.3 判定 2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被
0.5
0.5
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10%盐水
被检血
弃去0.5
清或阳 阴性血
0.1
0.75 弃去0.25
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0.5
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清对照
总量
0.5
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加抗原
（1：20） 0.5
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充分混匀37℃18-24小时温育
结果
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3.2.3.10 每次检验均应设阳性血清、阴性血清和抗原 对照，即