土壤微生物量氮

茚三酮反应-N法测定微生物量N

试剂制备

1. 还原水合茚三酮(hydridantin)

称取80g茚三酮放入2升90℃热水中, 加入400ml 40℃抗坏血酸(V.C.80g)水溶液, 放置30分钟; 流水冷却1小时至室温, 过滤冲洗, 在闭光真空干燥器中放入P2O5干燥, 可得约75g, 放置于暗色瓶中.

2. 乙酸钠缓冲液(pH5.5)

每配100ml茚三酮试剂用25ml。配500ml

200ml水中加入27.20g NaOAc.3H2O 放入水浴中使其充分溶解，冷却至室温加入50ml冰醋酸标定至500ml，pH应为5.51±0.03。该缓冲液在4℃下可保存。

3. 茚三酮试剂

每样用1.00 ml，100ml配制方法：2g 水合茚三酮(ninhydrin)和0.3g的还原水合茚三酮溶解于75ml的二甲基亚砜DMSO (DiMethylSulfOxide)和25ml 的乙酸钠缓冲液；然后用无氧氮气通气30分钟，4℃下密闭一天备用。

4. 柠檬酸缓冲液(pH

5.0)

每样用2.00 ml，250ml配制方法：10.50克柠檬酸和4.00克NaOH加入到225ml 蒸馏水中, 用10M NaOH调整到pH 5.0, 标定至250ml。保存于4℃。

5. 稀释乙醇：95%加入同体积的蒸馏水。

每样用5.0 ml。

6. 标准液：0，50, 100, 200, 250, 500，1000μM.l-1 N的(NH4)2SO4溶液。保存于4℃。

准确称取0.0661g 分析纯(NH4)2SO4 (FW=132.1)，定容至1000ml。

50, 100, 200, 250, 500μM.l-1N：分别吸取5ml,10ml, 20ml, 25ml,50ml的1000μM.l-1(NH4)2SO4-N溶液定容至100ml。

操作步骤

-准确吸取1.00 ml的浸提液(或标准液)加入20ml试管中；

-加入2.00 ml的柠檬酸缓冲液；

-慢慢加入1.00 ml茚三酮试剂并充分混匀，放上橡胶塞（注意不要塞紧）；

-在沸水中加热25分钟；

-冷水浴冷却至室温后加入5. 00ml稀释乙醇，充分混匀，在570nm处比色。

EN（mg/kg）=(c熏蒸-c未熏蒸)*浸提液体积*14/干土重.

微生物量氮SMBN=EN/0.45.

c熏蒸和c未熏蒸表示从标线上查出的显色液浓度，单位umol/L。