局部刺激实验

40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的眼刺激试验
三、实验动物及饲养环境
首选健康成年白色家兔，至少4只，雌雄各半，体重2-3Kg， 试验前家兔要在实验动物房至少适应3d时间，在开始前的24h 内对动物的两只眼睛进行检查，有眼睛刺激症状，角膜缺陷和 结膜损伤的动物不能用于实验。 实验动物及实验动物房应符合国家相关规定。选用常规饲 料，饮水不限制。
表3 皮肤刺激反应评分
表4 皮肤刺激强度评价
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验
一、 实验目的
测试动物在反复接触40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂 后，机体产生免疫传递的皮肤反应的可能性，从而确定 该农药的变态反应性（致敏）。
二、 实验原理
具有致敏作用的化学物经一定途径进入机体，与组 织蛋白结合形成完全抗原，刺激免疫活性细胞产生致敏 淋巴细胞或体液抗体；经1-2周致敏期，使体内免疫反 应得到充分发展，形成一定数量的致敏淋巴细胞或特异 抗体。当再次接触（激发）时使机体对该化合物产生感 受性增高的状态，以一定的异常形式表现出来。
1、实验动物 首选健康成年白色家兔，至少4只， 体重2kg左右，雌雄兼可，实验动物应单笼饲养，试验 前家兔要在实验动物房至少适应3d时间。实验动物及实 验动物房应符合国家相关规定。选用常规饲料，饮水不 限制。 2、受试物 40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂
四、 实验步骤
1、试验前24小时将动物背部脊柱两侧毛脱掉，不可 损伤毛皮，脱毛面积左右各4cmX4cm。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验
五、结果判断及评价
在24h、48h后分别观察局部皮肤反应。用盲法观察 对照组和试验组。按表5对局部皮肤反应评分。当受试样 品组出现皮肤反应积分不小于2时，判为该动物出现皮肤 致敏反应阳性，并计算致敏率，按表6判定受试样品的致 敏强度。
表5 皮肤致敏反应试验评分标准
急性毒性试验综合分析与评价
第三部分
第四实验室第三小组
人员名单：唐剑波 陈杰 杨文超 唐凯 张业芳 熊兴菊
局部刺激实验目的
了解40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂对哺乳 动物皮肤、眼睛的局部刺激性和腐蚀性，估计人 体接触该农药时可能出现的类似危害，为农药生 产和使用中的安全防护提供依据。
局部刺激 实验
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验
2、取受试样品0.5ml直接涂布在皮肤上，用4层纱布 （3cmX3cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激 胶布和绷带加以固定。对侧皮肤作为对照。采用封闭实验， 敷用时间为4h。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂清除 残留受试样品。 3、如怀疑受试样品可能引起严重刺激或腐蚀作用， 可采用分段实验，将三个涂布受试样品的纱布快同时或先 后敷贴于一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min， 60min和4h取下一块纱布，皮肤部位在任一时间点积分等 于8分，即可停止试验。 4、观察时间的确定应足以观察到可逆和不可逆刺激 作用的全过程，一般不超过14d。
表6 致敏率强度分级表
若实验结果如下： 皮肤刺激平均分值为3；眼刺激积分指数 （I.A.O.L）最高为18.5，平均积分指数 （M.I.O.L）7d后小于20；致敏率为0%。如何 对结果进行分级和评价？
由各实验的判断标准可以知道：40.6%阿维 菌素· 炔螨特微乳剂对皮肤有中等刺激性，对 眼有中度刺激性，无致敏性。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验
四、 实验步骤
1、用2~3只动物进行预试验，寻找能引起皮肤轻度 刺激反应的最高浓度（剂量）。激发浓度一般低于致敏 浓度，不得引起原发刺激性炎症反应。 2、实验分组：将豚鼠按体重性别随机分成三组，第 一组20只（雌雄各半），二、三组各10只（雌雄各半）。 第一组给农药，第二组空白对照（给赋形剂），第三组 阳性对照（给阳性致敏物）。 3、致敏接触：实验前24h将动物背部左侧去毛 3cm×3cm。试验组：将试验农药0.1~0.2ml涂在 2cm×2cm滤纸上，并将其敷贴在去毛区，以1层油纸或 玻璃纸和2层大于备皮面积的纱布覆盖，再以无刺激胶布 封闭固定，持续6h。用清水或无刺激性溶剂洗去残留的 受试物。第7d和第14d以同样方法重复一次。空白对照 组与阳性对照组方法同上。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的眼刺激试验
五、结果判断及评价
按表1将每只动物的角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值 相加，即是一只动物眼刺激反应的总积分。每个动物的刺激 反应积分的总和除以动物数，就是该试验农药对眼刺激性的 最后分值。再按表2评定眼刺激程度。 按上述分级评价标准评定，如一次或多次接触受试物， 不引起角膜、虹膜和结膜的炎症变化，或虽引起轻度反应， 但这种改变是可逆的，则认为该受试物可以安全使用。 在许多情况下，哺乳动物眼的反应较人敏感，从动物试 验结果外推到人可提供较有价值的依据。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验
4、激发接触：实验前24h将动物背部右侧去毛 3cm×3cm。试验组和对照组：末次致敏后第14天，将 0.1~0.2mL或低于诱导浓度的试验农药斑贴于右侧去毛区， 覆盖方法同2的步骤，持续6h，去掉去掉斑贴及试验农药 后，每日观察皮肤过敏反应情况至第12d，主要观察有无 红斑、水肿。如无致变，可再次激发以确定试验农药能否 引起过敏反应。 阳性对照组给阳性致敏物，方法同上。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验
三、 实验材料
1、实验动物 成年白色豚鼠，体重200-300g，雌雄
均可，雌性动物不能发生过性行为。在同一次试验中，， 应使用同一性别动物。如果使用两种性别动物，则应雌、 雄各半。试验前动物应在实验动物室至少喂养3d，以适应 环境和淘汰不合格动物。 2、受试物 40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂。 3、 阳性致敏物 2,4一二硝基氯代苯制成1％的致敏 浓度和0.1％的激发浓度。 4、赋形剂 水或无刺激性表面活性剂
眼刺激 实验
皮肤刺激 实验
皮肤致敏 实验
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的眼刺激试验 一、 实验目的
了解试验40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂对眼睛的刺激作用和程 度，为农药生产和使用中的安全防护提供依据。
二、 实验原理
选择健康的成年白色家兔，受试物以一次剂量滴入每只实验动 物的眼睛结膜囊内，以未做处理的另一侧眼睛作为自身对照。在规 定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分， 以此评价受试物对眼睛的刺激作用。观察期限应能足以评价刺激效 应的可逆性或不可逆性。
二、 实验原理
将受试样品一次（或多次）涂（敷）于健康无破损的一侧皮 肤，并以对侧皮肤作自身对照，在规定时限内观察和评价刺激反 应的程度，并作详细的记录。观察时间应足以进行可逆或不可逆 效应的观察，以便进行完整的评价，但一般不超过14d。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验 三、 实验材料
四、实验步骤
1、轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1ml滴入 结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1min，以防止受试物丢失。 另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物后24h不冲洗眼睛。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的眼刺激试验
2、记录给药后1、24、48、72小时角膜、虹膜、结膜以 及其它所观察到的损伤情况，以Draize眼部刺激试验评分表 示。观察时应用荧光素钠检查角膜损害，用裂隙灯检查角膜 透明度和虹膜纹理改变。若在72小时内未见任何刺激症状， 该试验即可结束。 3、若在72小时内出现刺激症状，应进行眼部清洗试验： 试验设3组，每组3只动物，受试药物的给药方法同上。第1 组不予清洗，第2组在眼部给受试药4秒钟后用20ml温水或生 理盐水清洗受试眼，第3组在给受试药30秒钟后用20ml温水 或生理盐水清洗受试眼。观察滴眼后24、48、72小时，4天， 7天的眼部反应情况，直至眼部恢复正常。（该试验的意义在 于评价温水或生理盐水清洗可否改善药物所致的眼部刺激， 亦即反映该受试药物的眼部刺激性是否可逆。）
表1
Draize眼刺激试验中眼损伤严重程度的评分标准
续表 Draize眼刺激试验中眼损伤严重程度的评分标准
表2 眼刺激强度评价标准
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验
一、 实验目的
测定40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂对可能出现的类似危害。
40.6%阿维菌素· 炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验 五、 结果判断及评价
于清除受试样品后的1h、24h、48h和72h各观察受试 部位的皮肤反应，按表3进行皮肤反应评分，以受试物积 分的平均值进行综合评价，根据24h、48h和72h各观察时 点最高积分均值，按表4判定皮肤刺激强度。 皮肤刺激评价除根据表4的评分外，还应结合刺激作 用的性质、恢复程度等进行化学品刺激作用的综合评价。 单独的积分值不能作为受试样品的刺激性质的最后评判， 可以作为参考值。 急性皮肤刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有 限。白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质 较人类敏感。若用其他品系动物进行试验时也得到类似结 果，则会增加从动物外推到人的可靠性。