保健用品毒理学评价程序与检验方法——皮肤刺激性试验

保健用品毒理学评价程序和检验方法 第4部分：皮肤刺激性试验
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围
本标准规定了保健用品毒理学皮肤刺激性试验评价程序。

本标准适用于保健用品毒理学皮肤刺激性试验检验方法。

2 皮肤刺激性试验检验方法
2.1 材料
2.1.1 动物
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

实验动物至少要用4只。

实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用常规饲料，饮水不限制。

2.1.2 受试物
液态受试物一般不需稀释，可直接使用原液，膏状受试物，可直接使用原膏霜。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试动物皮肤刺激性的影响。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD 50小于200 mg/kg BW或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000 mg/kg BW 仍未出现皮肤刺激作用也无需进行急性皮肤刺激性试验，LD 50计算见附录B。

2.1.3 仪器
2.1.
3.1 体重秤,精确到0.1 Kg；
2.1.
3.2 放大镜。

2.2 试验方法
2.2.1 皮肤急性刺激试验（一次皮肤涂抹试验）
皮肤急性刺激试验步骤：
a)试验前约24 h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3 cm
×3 cm；
b)取受试物约0.5 mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层硫酸纸
或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

另一侧皮肤作对照。

采用封闭试验，敷用时间
为4 h。

可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。

对用后冲洗的产品，仅采用2 h 敷用试验。

实验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。

如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂有受试物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3 min、60 min和4 h取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用即可停止试验；
c)于清除受试物后的1 h、24 h、48 h 和72 h观察涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评
分，以受试物积分的平均值进行综合评价，根据24 h 、48 h 和72 h各观察时间点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度；
d)观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14 h。

表1 皮肤刺激反应评分
刺激反应 分值
红斑：
无红斑 0
勉强可见 1
中度红斑 2
严重红斑 3
紫红色红斑并有焦痂形成 4
水肿：
无水肿 0
勉强可见 1
轻度可见(边缘高出周围皮肤) 2
反肤隆起约1mm轮廓清楚 3
水肿隆起1mm以上并范围扩大 4
最高总分值 8
表2 皮肤刺激强度分级
刺激强度 平均分值
无刺激性 0.0～0.49
轻度刺激性 0.5～2.99
中度刺激性 3.0～5.99
强刺激性 6.0～8.00
2.2.2 皮肤慢性刺激试验(多次皮肤涂抹试验)
皮肤慢性刺激试验步骤：
a)试验前将实验动物背部脊柱两侧皮肤的毛剪掉，去毛范围各为 3 cm×3 cm，涂抹面积 2.5
cm×2.5 cm；
b) 取受试物约0.5 mL(g)涂抹在一侧皮肤上，当受试物物无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作
为对照，每天涂抹1次，连续涂抹14 d。

从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。

1 h 后观察结果，按表1评分，对照区和试验区同样处理。

2.3 结果评价
按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表 2 判定皮肤刺激强度。

n
k
K ∑=
1
(1)
式中：
k ——每天每只动物平均积分；
1k ——红斑和水肿积分；
n ——受试动物数。

附 录 A （规范性附录）
实验动物体表面积估算方法
A.1 兔
3
2m k s ×= ..........................................(A.1)
式中：
s ——体表面积，cm 2；
k ——常数，一般成年家兔为10； m ——动物体重，g 。

例：体重2 kg 成年家兔体表面积：
3
2200010×=s
2
1588S 2008
.32008.213010.3667.012000
lg 3
2
10lg lg cm S ==+=×+=+=查反对数表：
A.2 豚鼠
3
2m k s ×=.....................................(A.2)
式中：
s ——体表面积，cm 2；
k ——常数，26.9=k ； m ——动物体重，g 。

例:体重438 g 豚鼠的体表面积：
2
534S 7276
.27610.19666.08805
.03
2
9666.0438
lg 32
26.9lg lg cm S ==+=×+=+=查反对数表：
A.3 大鼠、小鼠
3
2m k s ×= ..........................................(A.3)
式中：
s ——体表面积，cm 2；
k ——常数，0913.0=k ； m ——动物体重，g 。

例：体重200 g 大鼠的体表面积：
()3
22.00913.0×=s
2
123.3S 1945
.25340.19605.23010
.132
9605.22
.0lg 32
0913.0lg lg cm S ==+=×+=+=查反对数表：。