卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

李海燕综述王常玉审校

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【关键词】顺铂；卵巢癌；耐药机制

【中图分类号］Ｒ７３７．３１【文献标识ｔｉｂｉＡ【文章编号】１１３０４－５５１１（２００９）０５－０２９７４）５

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一，近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势，据报道，美国２００７年有２２４３０例卵巢癌新发病例…。由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法，约７０％患者确诊时已为晚期（ＦＩＧＯ分期，Ⅲ期和Ⅳ期），其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（ｐｒｉｍａｒｙｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和（或）获得性（ａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）多药耐药（ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的存在，导致晚期患者的５年生存率仅为２０％一３０％。ＤＤＰ－ＤＮＡ加合物的形成而阻断ＤＮＡ的转录和复制是顺铂杀伤肿瘤细胞的主要机理。虽然大多数卵巢癌患者最初对顺铂的反应性很高，但在治疗中产生的ＭＤＲ已成为临床治疗的主要障碍。Ｙａｋｉｒｅｖｉｃｈ等口。的研究发现约７５％～８０％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应，其余则表现为原发耐药，最终所有化疗患者至少８０％出现耐药。导致卵巢癌对顺铂产生耐药的具体分子机理并不十分清楚，因此研究卵巢癌对顺铂耐药的机制对于防止或逆转耐药产生，改善化疗效果，提高病人生存率有着很重要的意义。

１ＢＲＣＡ２的二次突变

ＢＲＣＡ２基因结构较为复杂，编码３４１８个氨基酸残基，定位于人类染色体１３ｑ１２—１３，由２７个外显子组成。其编码的氨基酸序列与已知的蛋白质无明显的同源性。ＢＲＣＡ２基因的第３个外显子和转录因子ｃ－ｊｕｎ具有微弱的相似性，ＢＲＣＡ２基因产物与Ｒａｄ５１共同作用，参与ＤＮＡ双链断裂的修复过程ｐＪ，发挥抑癌作用。Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ【４１与Ｒｕｄｋｉｎ＂ｏ的研究显示：家族性乳腺癌和卵巢癌通常有ＢＲＣＡ２基因突变，其蛋白产物与ＤＮＡ的重组及修复和转录调控有关。突变肿瘤对顺铂产生耐药，携带肿瘤抑制因子ＢＲＣＡ２突变的卵巢癌对铂类尤其敏感。然

作者单位：４３００３０湖北武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院而，这类肿瘤最终都出现铂类耐药现象。这一耐药的具体机制仍不很明确。Ｗａｔａｒｕ等旧。通过对两株细胞的研究发现，对顺铂耐药的ＢＲＣＡ２突变乳腺癌细胞株ＨＣＣｌ４２８中，出现修复ＢＲＣＡ２功能的ＢＲＣＡ２二次基因改变；同时其在另外一株ＢＲＣＡ２突变的胰腺癌细胞株Ｃａｐａｎｌ中发现有五处修复野生型ＢＲＣＡ２阅读框的二次突变。所有出现二次突变的克隆均对顺铂和ＡＤＰ核糖多聚酶抑制因子（ＡＧｌ４３６１）耐药。Ｗａｔａｒｕ旧。通过对那些原发ＢＲＣＡ２突变的卵巢癌，经过顺铂治疗后又复发的估评，结果显示出现顺铂耐药的复发性肿瘤均经历ＢＲＣＡ２突变的隔代遗传，其提出ＢＲＣＡ２的基因内修复野生ＢＲＣＡ２阅读框的二次突变可能是以铂类为基础的化疗耐药的一个主要临床因素。有研究报道ＢＲＣＡ２的缺失与耐药有关川。可见ＢＲＣＡ２的突变状态是卵巢癌发生耐药的的标志物之一，其缺失可能导致耐药的产生，尤其是它的二次突变与顺铂的耐药有着密切的联系。寻找导致ＢＲＣＡ２二次突变状态的具体分子机制可能会助于防止卵巢癌对顺铂的耐药。其具体机制值得进一步探讨。

２细胞微环境的改变

研究资料表明，肿瘤细胞可能通过直接改变所在的微环境来增加其在化疗药物中的存活¨ｊ。肿瘤生存的微环境富含细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ－ｔｒｉｘ，ＥＣＭ）及其受体整合素，他们对肿瘤生存，抗细胞凋亡及耐药起着相当大的作用。ＥＣＭ基本结构骨架是蛋白质，由不同的氨基酸残基组成的特殊多肽序列形成不同的成分，主要分为胶原、蛋白聚糖和糖蛋白三大类。卵巢癌常有胶原蛋白Ⅵ的过表达，有Ⅵ型胶原过表达的细胞也往表现出对顺铂耐药性的提高。顺铂敏感细胞在有胶原Ⅵ存在情况下培养可增加细胞对顺铂的耐药性。随后证实卵巢肿瘤中的确存在胶原Ⅵ，而且胶原Ⅵ与肿瘤分级有关，这表明肿瘤附近的细胞外基质进行了重组。Ｓｈｅｒｍａｎ等【９ｏ发现在顺铂耐药的卵巢癌细胞中多种细胞外基质的基因功能上调，表明卵巢癌细胞可通

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过改变微环境来提高顺铂耐药性。以往的研究表明肿瘤细胞与宿主之问的互相作用是肿瘤生长与存活的起始选择压力，并且这种相互作用可能参与了药物反应的调节和肿瘤耐药的发生。可见肿瘤微环境在卵巢癌细胞对顺铂的耐药性方面扮演着重要的角色。从以上研究可以看出肿瘤微环境的改变不仅可以导致卵巢癌缩瘤术后标准化疗的失败，而且促进了获得性化疗耐药的产生。

３细胞信号转导通路的激活

３．１促分裂原激活的蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ．ａｃｔｉｖａｔｅｄ

ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）的信号传导途径ＭＡＰＫ是细胞生长和分化的藿要环节，丝裂原活化蛋白激酶

信号转导系统在肿瘤化疗耐药中的作用正越来越受到重视。资料显示，抗肿瘤药物能够引起ＭＡＰＫ信号转导系统的激活及多药耐药的产生¨０Ｉ。作为ＭＡＰＫ的家庭成员，细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）是一种保守的丝／苏氨酸蛋白激酶，其ｅＤＮＡ定位于染色体ｌｐ３４－３，包括ＥＲＫｌ和ＥＲＫ２两种亚型，在非磷酸化状态下无调节活性；一旦被磷酸化激活，将通过转位进入细胞核，调控转录相关基因的活性Ｈ１｜。目前大多数研究都认为，ＥＲＫ的过度激活与许多肿瘤的化疗耐药性存在明显正相关，其作用机制可能是通过调控耐药相关基因和蛋白的表达。一些研究发现，ＪＮＫ和Ｐ３８ＭＡＰＫ的激活程度与肿瘤化疗的敏感性存在正相关。如Ｍａｎｓｏｕｒｉ【１２３等比较了卵巢癌顺铂（ＣＤＤＰ）敏感株２００８以及耐药株２００８Ｃ１３中ＭＡＰＫ激活情况，发现敏感株ＪＮＫ和Ｐ３８ＭＡＰＫ的激活程度明显超过耐药株。然而，另一些研究却发现ＪＮＫ和Ｐ３８ＭＡＰＫ的持续激活与肿瘤细胞的耐药性正相关。这种截然相反的结果可能是由于ＭＡＰＫ功能具有细胞类型和条件依赖性的特点所导致¨３｜。可见ＭＡＰＫ信号传导通路在耐药方面扮演着重要角色，作为其主要家族成员的ＥＲＫｌ／２在卵巢癌顺铂耐药中的作用正逐渐被认识，该成员已经成为肿瘤新药研制的分子靶点，将为对顺铂耐药的卵巢癌患者带来福音。

３．２Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号通途Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ转导途径是细胞内重要的信号传导通路，在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能。Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ通路可促使细胞存活，其参与卵巢癌的多药耐药已经被证实［１４１。尽管ＡＫＴ基因仅在１２％的卵巢癌中表达，但在临床样本中高度磷酸化激活ＡＫＴ的表达３６％一６８％¨５｜。Ｌｅｅ

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等¨们研究发现，卵巢癌耐药细胞株ＯＶＣＡＲ一３／ＣＤ－ＤＰ中的Ａｋｔ基础磷酸化水平及活性明显高于其亲代细胞株ＯＶＣＡＲ．３，并且顺铂可下调及抑制亲代细胞株中的Ａｋｔ磷酸化和活性，而耐药株却无此作用。Ｐ１３Ｋ活性抑制剂可以明显提高顺铂对耐药细胞株诱导的细胞毒性和凋亡效应，提示耐药株对顺铂的化疗抵抗至少一定程度上是源于Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ信号转导途径的激活。Ｆｒａｓｅｒ等Ⅲ１通过比较顺铂在Ａｋｔ构建性激活的Ａ２７８０Ｓ－ＡＡＫＴ和对照组Ａ２７８０Ｓ．ＰＭＨ６中的效应，发现顺铂在对照组中诱导的生长抑制和细胞凋亡效应更显著，且有浓度依赖关系，更加证实Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ途径在卵巢癌细胞对顺铂抵抗中发挥了重要作用。肿瘤抑制基因ＰＴＥＮ可负调节Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ通路，催化降解由Ｐ１３Ｋ生成的３一磷酸肌醇，而３一磷酸肌醇是激活ＡＫＴ所必需的。Ｐ１３Ｋ的催化亚基和ＰＴＥＮ的低表达，均可激活ＡＫＴ¨引。最近有学者报道ＡＫＴ通过抑制Ｐ５３的磷酸化和核内的功能导致对顺铂的耐药¨８＇１９Ｊ。鉴于Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ转导途径在肿瘤形成、侵袭转移及化疗抵抗中的重要甚至决定性作用，目前正在作为治疗的分子靶目标研究。但是关于Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ抑制剂的研制尚处于临床前水平的研究阶段。随着信号转导途径在耐药中作用机制的进一步阐明和特异性抑制剂的研制；有望未来在逆转卵巢癌耐药方面取得突破。

４细胞凋亡通路受阻

目前认为细胞凋亡存在３条通路，即死亡受体通路、线粒体通路和内质网通路，这三条通路密切关联Ⅲｊ。定位于１６ｑｌｌ上Ｃａｓｐａｓｅ－３基因编码的Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白是重要的凋亡效应蛋白，研究表明，ＣＯＣｌ／ＤＤＰ对顺铂的耐药与Ｃａｓｐａｓｅ一３活性降低有关。Ｃａｓｐａｓｅ－３是Ｃａｓｐａｓｅ家族中最重要的凋亡效应蛋白【２¨，它在细胞中以无活性的酶原形式存在，Ｃａｓｐａｓｅ．３被活化后裂解成相对分子量为１７０００和１２０００的大、小两个亚基，其中较大的亚基有蛋白裂解活性。研究表明，活化的Ｃａｓｐａｓｅ一３能促进凋亡信号的传导，诱导细胞凋亡的发生。Ｃａｓｐａｓｅ级联反应一旦激活被认为是不可逆的，并最终导致细胞凋亡。在ＣＯＣＩ／ＤＤＰ细胞中Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达明显低于ＣＯＣｌ，由此推测Ｃａｓｐａｓｅ－３参与ＣＯＣｌ／ＤＤＰ细胞的耐药机制。耐药的卵巢癌细胞中ｃａｓｐａｓｅ－２蛋白表达程度降低，表明了ｃａｓｐａｓｅ－２的上游激活途径可能受到了明显抑制。ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白在顺铂诱导卵巢癌敏感和耐药细胞系凋亡的表达方式与