卵巢癌细胞对顺铂耐药机制的研究
卵巢癌铂类药物抵抗解决方案
卵巢癌铂类药物抵抗解决方案卵巢癌是女性常见的一种恶性肿瘤，化疗是卵巢癌的重要治疗方式之一、然而，由于卵巢癌对铂类药物的抗药性逐渐增强，导致许多患者在接受化疗时遇到了困境。
因此，寻找有效的解决方案成为迫切需要解决的问题。
卵巢癌对铂类药物抗药性的发展机制非常复杂，主要包括改变药物的结合靶点、增强细胞解毒能力、增加DNA修复机制等。
针对这些机制，以下是一些可能的解决方案。
1.个体化治疗策略：针对不同患者的抗药性机制，制定个体化的治疗方案。
通过基因检测、蛋白质表达等方法，确定患者的具体抗药机制，从而选择对其有效的药物。
2.药物联合治疗：将铂类药物与其他具有不同作用机制的药物进行联合治疗，以增加疗效。
例如，将铂类药物与顺铂、依托泊苷等联合应用，具有较好的治疗效果。
3.逆转多药耐药：多药耐药是卵巢癌抗药性的重要机制之一、针对多药耐药的卵巢癌，可以尝试使用多种逆转剂，如ABCB1逆转剂、ABCG2逆转剂等，来减轻药物的抵抗性。
4.新药研发：针对卵巢癌抗药性问题，开发新的化疗药物，或者对现有的铂类药物进行改良，以提高其抗癌活性和减轻抗药性。
目前已有一些新药物被开发出来，如PARP抑制剂等，显示出一定的治疗效果。
5.免疫治疗：免疫治疗是近年来癌症治疗的新热点，对于抗药性的卵巢癌也有一定的应用前景。
通过激活患者自身的免疫系统，增强对肿瘤的攻击能力，从而达到治疗效果。
需要注意的是，以上方案仅为探讨，具体的治疗方案需要结合患者的具体情况、病程和医生的建议来决定。
此外，由于卵巢癌的复杂性和抗药性发展机制的多样性，仅凭以上几种解决方案可能无法完全解决抗药性的问题。
因此，需要进一步深入研究，不断寻找新的解决方案，提高卵巢癌的治疗效果，改善患者的生存质量。
姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1／DDP对顺铂敏感性的研究
Ｃ Ｃ ／ Ｄ （ ＜００ ） ａ ｄ ｔｅ ｍ ｓ ｓ ｎｆ ａ ｔ ｅ ｎ ｎ ｔｅｒｔ ｏ ｃ ｒ ｄ ａ ｅ ｅｕ ｅ ｏ ２５ Ｉ ／ ｆ ｉ ｌｔ Ｏ Ｄ Ｐ Ｐ １ ． ； ｎ ｈ ｏｔ ｉ ｉｃ ｎ ｄ ｌ ｅｉ ａｅ ｃ ｕｒ ｆ ｒｔ ｓ ｆ ． ｘ ｍＬ ｏ ｓ ａ ｎ ５ ｇ ｉ ｉ ｈ ｅ ｔ ｈ ｇ ｃｐ ｉ
顺铂与 姜黄素联合 用药与单独 用药相 比， 凋亡率 明显增加 （ Ｐ＜００ ）联 合 用药与单独用 药相 比 Ｂ ｌ Ｎ ． ； ５ ｃ－ ｍＲ Ａ的表 ２ 达 明显 降低 （ 尸＜００ ）Ｓ ａ Ｎ ．５ ，ｍ ｃ ｍＲ Ａ的表达 明显增 高（ Ｊ ． ） 结论 ： Ｐ＜００ 。 ５ 姜黄素能够显 著抑 制 Ｃ Ｃ ／ Ｄ Ｏ １ Ｄ Ｐ增 殖， 并能
＾Ｐ ｏｌ ｓＨ ｓｉｌｏ ｅｐｅ ｏｐｔ ａｆ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔ ｅ Ｔ ｖｓｇ ｅｔ ｓ ｃ ｔｎｏ ｃｒ ｍｎｕｅ ｉ ｅｓ ｓｉｔｏ ｃｐ ｔ — ｓｔ ｔ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｉ ｏｉ ｅｉ ｔ ｈ ａｓ ｉｉ ｆ ｕｃ ｉ ｓ ｗｔ ｔ ｅ ｉ ｉ ｉ ｌｉ ｒ ｉａ ｃｖ ｎ ｔａ ｅ ｏ ａｏ ｕ ｈ ｈ ｎ ｔ ｙ ｆ ｓ ａｎ ｅ ｓｎ ｖ
实用医学杂 志 ２ ０ ０ ９年第 ２ ５卷第 ８期
・
基 础 研 究 ・
姜 黄 素增 强 卵 巢 癌 耐 药 细胞 株 Ｃ Ｃ ／ Ｄ Ｏ Ｄ Ｐ对 １ 顺 铂 敏 感 性 的研 究
吕靖 英焕 春 戴 进
摘 要 目的 ： 讨姜黄素 的使 用与卵巢癌顺铂耐 药细胞 株 Ｃ Ｃ１Ｄ Ｐ对顺铂化 疗敏 感性 的关 系。方法 ： 探 Ｏ ／Ｄ 采
增强该细胞 系对顺铂 的敏 感性 ． 机制 可能与降低 Ｂ １ ｃ ２基 因的表达 ， ． 增加 Ｓ ｃ 因的表 达有关 。 ｍａ 基 关 键 词 卵 巢 肿 瘤 ； 姜 黄 素 ； 顺铂 ； 基 因 ， ｃ ２ Ｃ Ｃ ／ Ｄ ； 耐 药 ； Ｓ ａ Ｂ１ ； Ｏ １Ｄ Ｐ ． ｍｃ
卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展
・300・沈阳医学院学报Journal of Shenyang Medical College第23卷第3期2021年5月•综述•卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展王永，杨军文*（皖南医学院弋矶山医院妇产科，安徽芜湖241001）［摘要］卵巢癌作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，因其早期症状多不明显，出现相应症状时多已是疾病的晚期，使得卵巢癌治疗难度大、死亡率高。
一经确诊，多行手术治疗，术后再进行数个疗程的紫杉醇联合铂类（TP）方案化疗，以增加患者的生存率。
但化疗耐药的出现却制约了这种联合治疗的效果，甚至导致治疗的失败。
因此，对化疗耐药产生的相关机制探索，并给予对症处理，这对逆转化疗耐药性、增强治疗效果具有不可估量的意义。
本文将就卵巢癌化疗耐药相关基因及调控因子作用机制的研究及进展进行综述，为进一步研究提供新思路。
［关键词］卵巢癌；化疗耐药；基因；调控因子［中图分类号］R737.31［文献标识码］A［文章编号］1008-2344（2021）03-0300-04doi:10.16753/ki.1008-2344.2021.03.029Research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapyWANG Yong，YANG Junwen*(Department of Obstetrics and Gynecology，Yijishan Hospital，Wannan Medical College，Wuhu241001，China)[Abstract]Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of the female reproductive system,because its early symptoms are often not obvious，and when the corresponding symptoms appear，it is mostly in the late stage of the disease.Therefore，the treatment of ovarian cancer is difficult and the mortality rate is high.Surgery is often the initial treatment of ovarian cancer，followed by several courses of paclitaxel combined with platinum(TP)chemotherapy，which greatly increases the survival rate of patients. However，the emergence of chemotherapy resistance limits the effectiveness of this combination therapy，and even leads to the failure of the treatment.Therefore，exploring the relevant mechanisms of chemotherapy resistance and giving symptomatic treatment is of great significance for the reversing the chemotherapy resistance and enhancing the therapeutic effect.This article reviews the research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapy，in order to provide new ideas for further research.[Key words]ovarian cancer；chemotherapy resistance；gene；regulatory factor卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，致死率一直位于女性所患疾病的前列。
腹腔热化疗中卵巢癌细胞对顺铂敏感性影响的体外研究
铂耐 药亚株 Ｓ Ｏ ３Ｄ Ｐ细胞 有生长抑制作用 ； Ｋ Ｖ ／Ｄ 热疗联 合顺铂可 以增加 Ｓ Ｏ ３ Ｋ Ｖ 细胞对顺铂 的敏 感性 ， 以部分逆转 Ｓ Ｏ ３Ｄ Ｐ 可 Ｋ Ｖ ／Ｄ 细胞对顺铂的耐 药性 ， 最佳作 用时间为４ ℃ ９ ｍｉ；Ｒ Ｃ 表达增加与卵巢癌顺铂耐药有关 ， 且 １ ０ ｎＥ Ｃ １ 但热疗联合顺铂对 Ｅ Ｃ 基因表 Ｒ Ｃ１
２０第７第０ ０年 ３ ２ １ 卷 期
国 肿 瘤 临
１５ ３ １
腹 腔 热 化 疗 中卵巢 癌细 胞 对 顺铂 敏 感性 影 响 的 体外研 究
马 焱 瞿全 新 张秀艳①
摘要 目的 ： 讨 腹 腔 热 疗 对 卵 巢癌 细胞 顺铂 敏 感 株 的 化 疗 增敏 作 用及 对 顺 铂 耐 药株 的逆 转 耐 药 作 用 ， 分 析其 作 用机 制 ， 探 并 为腹 腔 热 疗 增加 顺 铂 化 疗 敏 感 性及 逆转 卵 巢癌 顺 铂 耐 药提 供 实验 依 据 。方 法 ： Ｔ法 研 究 常 温 及 ４ ℃ 不 同作 用时 间下 温 热联 合 ＭＴ １ 顺 铂 对 卵巢 癌 细 胞敏 感株 Ｓ Ｏ ３ 卵 巢癌 细胞 顺 铂 耐 药 株 Ｓ Ｏ ３Ｄ Ｐ 生长 抑 制 作 用 。Ｗｅｔ ｎｂ ｔ ｇ 检 测 常 温 及 ４ ℃ 不 同 ＫＶ 、 Ｋ Ｖ ／Ｄ 的 ｓ ｒ ｌ ｉ 法 ｅ ｏｎ １
Ｃｈ ｎ ｄｅ Ｍａ ｅ ｎ Ｉ ｎ ｉ ａ ｔ ｓ ｉ ｌ Ｃｈ ｎ ｄ ０ ７ ０ Ｃｈｉａ ｅ ｇ ｔ ｒ ａ ｄ Ｃｈｌ Ｈｅ ｌ Ｈｏ ｐｔ ， ｅ ｇ ｅ ０ ６ ０ 。 ａ ｄ ｈ ａ ｎ
Ａ ｓ ａｔ Ｏｂｅｔ ｅ Ｏｕ ｕｐ ｓ ｔｄ ｅｈ ｒ ｙ ｅ ｈ ｒ ａｃ ｍｂｎ ｄｗｉ ｉｐ ｔ ｎ ａ ｃ ｓｄｕ ｅ ｓ ｉｔ ｂｔ ｃ ｊｃ ｖ ： ｒ ｒｏ ｅｉ ｔ ｓｕ ｙｗｈ ｔｅ ｐ ￣ ｅｍｉ ｏ ｉｅ ｔ ｃ ｌ ｉ ｅ ｈ ｎ ｅ ｒｇｓ ｎ ｉ ｉ ｒ ｉ ｐ ｓｏ ｈ ｈ ｓ ａｎ ｔ ｙ ｖ
卵巢癌细胞顺铂耐药相关的转录因子表达分析
胞株 Ｓ Ｖ３Ｄ Ｐ购 自中国科 学院 上海 细胞 生 物研 ＫＯ 一 Ｄ 究所 。Ｓ ＯＶ３接 种 于 Ｄ Ｋ ＭＥ 高 糖 培 养 基 ，Ｓ Ｍ Ｋ— ＯＶ 一 Ｄ 细 胞 接 种 于 含 有 １ ３Ｄ Ｐ ｍｇ ｍＬ ＤＤ 的 ／ Ｐ ＤＭＥ 高糖培 养 基 ，所 有 培养 基 均 含 １ ％胎 牛 血 Ｍ Ｏ
，
胞 刮 收集细胞 。
件包 。计数 资料 采用 ｔ 检验 ，Ｐ＜０ ０ ． ５为差 异 有 统
计 学意义 。
２ 结 果
１ ２ ２ 细胞 凋 亡 分 析 ：对 上 述 不 同 药 物 浓 度 处 理 ．． 后 的两种细胞 ，分别 计 数 １ 个 细胞 。按 Ａｎ ｅ ｉ— ０ ｎ ｘｎ Ｖ～ ｌｏ Ｆ ｕ ｓ染 色试剂 盒 （ ｏ ｈ ，德 国）的使 用说 明 进 Ｒ ｃｅ 行 固 定 、染 色 ，并 采 用 Ｃ ｎ ｏ Ⅱ型 流 式 细 胞 仪 ａｔ （ Ｄ，美 国 ）分 析 细 胞 凋 亡 情 况 ，每 次 试 验 重 复 Ｂ
ｆ ｃ ｏｒ ａ ｔ ｓ， ５ ｔａ ｃ ｉ ｉｎａ ａ ｔ ｒ ｅ ｅ ｓ ｏｃａ ｅ ｔ ｃｓ ａｔｎ ｒ ｌｔ ｄ ｒ ｓｓ ａ ｔ Ｃｏｍ ｐ ｒ ｄ ｉｈ ＳＫ ＯＶ ３ ｅ ｌ ｔ ｅ ｒ ｎ— ｒ ｎｓ ｒｐｔｏ ｌｆ ｃ ｏ ｓ ｗ ｒ ａ ｓ ｉ ｔ ｄ ｗｉｈ ｉｐｉ ｉ ｅａ ｅ ｅ ｉｔ ｎ ． ３ ａ ｅ ｗ ｔ ｃ ｌ， ｈ ３１ ａ ｔ ｓ ｒｐ ｉｎａ ａ ｔ ｓ ａ ｔｖｔｅ ｅ ｅ ｕｐ ｒ ｇｕ ａ ｉｎ ｎｄ ２２ ｃ ｉ ｔｏ ｌｆ ｃ ｏｒ ｃ ｉｉｉｓｗ ｒ — ｅ ｌ ｔｏ ａ ｗｅ ｅ ｄ ｒ ｏｗｎ－ ｅ ｕｌｔｏｎ ｉ ｒ ｇ ａ ｉ ｎ ＳＫ ＯＶ ３ ＤＤ Ｐ ｅ １ Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ Ｔ ｒ ｎｓ ｒｐｔｏ ｌ 一 ｃ ｌ． ｎ ｌ ｓｏ ａ ｃ ｉ ｉｎａ
卵巢肿瘤化疗耐药机制及逆转研究的进展
的 Ｐｇ —Ｐ蛋 白无 关 。 研 究 深 入 发 现 ， 多 参 与 肿 瘤 随 许 发 生 与 发 展 的 癌 基 因 会 影 响 肿 瘤 细 胞 对 化 疗 药 物 敏 感 性 ，这 些 基 因 的发 现 不 仅 在指 导 肿 瘤 化 疗 方 案 和
判 断 预 后 中 有重 要 的 指 导 意 义 ，而 且 为 通 过 基 因 治
知拓扑 异构 酶 Ｉ 的活性 增 强与 卵巢 癌耐 药有关 。 Ｉ ａ
肽 ｓ转 移 酶 、 白激 酶 Ｐ 蛋 ＫＣ等 都 与 卵 巢 肿 瘤 细 胞 的 耐 药 过 程 有 关 ，其 中对 ｍｄ一 ｒ１基 因与 卵 巢 肿 瘤 的 耐 药 研 究 较 为 深 入 ， 开 展 了有 关 耐 药 逆 转 的研 究 ， 并 但 结 果 并 不 令 人 满 意 ，而 且 目前 越 来 越 多 的资 料 表 明
疗 逆 转 肿 瘤 耐 药 奠 定 了基 础 。 同 时 最 新 研 究 发 现 肿
瘤 细 胞 对 凋 亡 的 敏 感 性 也 是 影 响 化疗 效 果 的关 键 因 素 ， 句 话 说 耐 药 就 是 细 胞 凋 亡 过 程 受 到为 卵 巢 肿 瘤 耐 药 的逆 转 提 供 了新 的思 路 。 以下 将 对 新 近 发 现 的 与 卵 巢 肿 瘤 耐 药 有 关 的基 因 和通 过 促 细 胞 凋 亡 增 进 肿 瘤 化 疗 敏 感 等 方 面 的研
些 基 因 参 与 了药 物 作 用 下 ＤＮ 损 伤 后 核 苷 酸 的 切 Ａ
核 苷 酸 交 换 因子 （ｏｓ 将 这 种 复 合 物 运 送 至 胞 膜 上 ， ｓ ）
将 ｒｓ Ｄ （ ａ— Ｐ 鸟苷 二磷 酸 ） 活 为 ｒ ．Ｔ （ 苷三磷 Ｇ 激 ａ Ｇ Ｐ鸟 ｓ 酸 ） 同 时 伴 有 ｃｍ ｃ ｃｆｓｃｉｎ等 核 转 录 因 子 上 ， — ｙ 、— 、． ０ ｎ
诺斯卡品逆转人卵巢癌裸鼠移植瘤对顺铂耐药的作用及机制
Ｎ Ｏ Ｓ增 加 了移植 瘤 细胞 对 Ｄ Ｄ Ｐ的敏 感性 ， 逆转 其对 Ｄ Ｄ Ｐ的 多药耐 药，
其机制 可能与 Ｘ Ｉ Ａ Ｐ 、 Ｂ ｃ ｌ － ２和 Ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎ蛋 白表达的下调 ， Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ － ３蛋 白表 达的上调有关。
【 关键词 】 卵巢癌 ； 诺斯卡品 ； 顺铂 ； 耐药 ； 裸鼠 【 中图分类号】 Ｒ ７ ３ ７ ． ３ １ 【 文献标识码】 Ａ
胱氨酸天冬氨 酸蛋 白酶（ Ｃ ａ ｓ ｐ ｓｅ ａ 一 ３ ） 、 Ｂ细胞淋 巴瘤／ 白血病 ＿ ２ （ Ｂ ｃ ｌ － ２ ） 和生存素 （ Ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎ ） 蛋 白表 达。结果
联合 组裸
鼠移 植 瘤 体 积 明 显 小 于 对 照 组 和 其他 用 药 组 （Ｐ ＜ ０ 。 ０ ５ ） 。与对 照组和 Ｄ Ｄ Ｐ组 比 较 ， 联 合 组 皮 下 移 植 瘤 细 胞 凋 亡 率
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ａ ｌ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ｎ ｏ ｓ ｃ ａ ｐ ｉ ｎ ｅ（ Ｎ Ｏ Ｓ ）ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｄ ｒ ｕ ｇ
ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｏ ｆ ｃ ｉ ｓ ｐ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ（ Ｄ Ｄ Ｐ）ｉ ｎ ｎ ｕ ｄ ｅ ｍｉ ｃ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ｅ ｄ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｏ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３ ／ Ｄ Ｄ Ｐ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｔ ｈ ｅ
曲谱瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞对顺铂的耐药性分析
１６ ０
Ｃｉ ｃ ｄ ａ Ｊｕｎｌ ｆ ｈ ａ２０ ． ｏ １ ， ｏ １ ｌｉ ｌ ｎ ａ Ｍｅｉ ｌ ｏｒａ ｏ ｉ ，０ ８ Ｖ １ ５ Ｎ ． ｃ Ｃ ｎ ．
中 国临 床 医 学
２０ ０８年 ２月 第 １ ５卷
第 １期
曲谱瑞 林 逆转 卵巢癌 Ｏ Ｃ Ｒ ３细 胞 Ｖ Ａ 一 对 顺铂 的耐 药性 分 析
ｃ ｌ １ ｅｉ ｉ ｏ Ｍｅ ｈ ｄ ： ｔ ｒｔ ｅ ｔ ｄ ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ｔ ｉｐ ａ ｉ ，ｔ ｉ ｏ ｅｉ ｅｌ ｉ ｎ ｖ ｔ ． ｔ ｏ ｓ Ａｆｅ ｒ ａ ｅ ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ ｗｉ ｃｓ ｌｔｎ ｒｐ ｒ ｌ ｎ ｒ ｈ ｎ，ａ ｄ ｃ ｍｂ ｎ ｔ ｎ （ ｉｐ ａ ｉ ｎ ｒｐ ｏ ｅ ｉ ）ｉ ｉ— ｎ ｏ ｉａｉ ｏ ｃｓ ｌｔ ａ ｄ ｔｉ ｔ ｒ ｌ ｎ ｎ ｎｄｆ
Ｅ Ｋ１ ２ 白 的表 达 情 况 。 结果 ： 铂 与 曲普 瑞 林 联合 其化 疗增 敏 倍 数 为 ２２ ； Ｒ １ ２蛋 白活性 在 顺 铂 处 理 组 升 高 ， 曲普 Ｒ ／蛋 顺 ．３Ｅ Ｋ ／ 在 瑞 林 处理 组 、 铂 与 曲普 瑞 林联 合 处理 组 降 低 。 结论 ： 普瑞 林增 加 了 卵巢 癌 （ Ａ ３Ｄ Ｐ细胞 对顺 铂 的敏 感 性 ， 且 此 作 顺 曲 ） ＶＣ Ｒ Ｄ 而
ｆｒｎ ｏ ｃ ｎ ｒｔ ｎ，ｔｅｐ ｏｉ ｒｔｏ ｅｅ ｔｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｏ ｈ ｒｌ ｅａｉｎ，ｃ ｃｅ ｐ ｐ ｏ ｉ ａ ｄ ＥＲＫ１ ２ ａ ｔ ａｉｎｏ ｆ ｙ ｌ，ａ ｏ ｔｓｓ ｎ ／ ｃｉ ｔ ｆ ｖ ｏ ＯＶＣＡＲ３ＤＤＰ ｃ ｌ ｒ ｅｅ ｔｄ ｂ 一 ｅｌ ｗｅｅｄ ｔｃｅ ｙ ＭＴＴ ｓ
ａ ｓ ｙ， ｆｏ ｃ ｏ ｅ ｒ ｎｄ ｓａ ｌｗ ｙｔ ｍ ｔｙ ａ Ｗ ｅ ｔ ｒ ｏｔｉ ｓ ｅ ｎ ｂｌ ｔｎｇ， ｒ ｓ ｃｔｖ ｌ Ｒｅ ｕｌｓ Ｔｈｅ ｒ ｖ ｒ ａ ｅ ｃ ｉｎ （ ｅ ｐｅ ｉ ｅｙ． ｓ ｔ： ｅ ｅ ｓ ｌｒ ａ ｔｏ ＲＲ ） ｉ ｕｃ ｄ ｂｙ ｃ ｍ ｂ ｎ ｔｏｎ ｗａ ｎｄ ｅ ｏ ｉ ａ ｉ ｓ
关于铂类化疗药物的耐药机制
关于铂类化疗药物的耐药机制铂类化疗药物包括顺铂、卡铂和奥沙利铂，已成为治疗多种实体瘤的主要化疗药物。
然而，很多患者在接受铂类化疗后会出现耐药，导致治疗效果不佳或治疗失败。
本文将从铂类化疗药物的作用机制、耐药的类型、相关的分子机制等方面来探讨铂类化疗药物的耐药机制。
1. 铂类化疗药物的作用机制铂类化疗药物通过与DNA结合形成DNA交联物来抑制DNA复制和转录，从而对肿瘤细胞的生长和分裂产生抑制作用。
顺铂和卡铂通过与DNA结合形成较为稳定的药物-DNA交联物，而奥沙利铂则借助不稳定的氧化还原反应产生药物-DNA交联物。
这些药物-DNA交联物使DNA链的断裂和交联导致损伤的细胞开始进行凋亡，进而达到治疗癌症的目的。
2. 铂类化疗药物的耐药类型铂类化疗药物的耐药分为病理性耐药和药物性耐药两种类型。
(1) 病理性耐药病理性耐药是指肿瘤细胞通过改变其生长和分化状态、表达多种通路的信号转导和凋亡相关因子以及维持DNA修复和稳定的机制等方式，避开了铂类化疗药物对癌细胞的杀伤作用。
在病理性耐药情况中，细胞在化疗药物的作用下仍然能够进行DNA修复和细胞凋亡抵抗，所以铂类化疗药物失去了对细胞的治疗作用。
(2) 药物性耐药药物性耐药的主要原因是由于化疗药物的浓度不足或在药物代谢过程中发生了改变，使得药物难以达到对癌细胞的杀伤浓度。
引起药物性耐药的主要因素包括肿瘤内转运蛋白，药物修饰酶，对药物结合的药物靶点等。
这些都会影响药物的吸收、代谢和排泄，导致药物在治疗过程中与肿瘤细胞的接触减少、代谢加快或无法形成有效的药物-靶点结合。
3. 铂类化疗药物的耐药分子机制铂类化疗药物的耐药分子机制非常复杂。
下面是一些常见的分子机制：(1) DNA修复机制的变化铂类化疗药物通过与DNA结合形成DNA-DNA交联物从而导致DNA的损伤。
局限的DNA修复是细胞响应铂类化疗药物的主要机制之一。
肿瘤细胞耐药性的形成往往与细胞内的DNA组修复和维护机制以及DNA伤害响应机制有关。
关于铂类化疗药物的耐药机制
关于铂类化疗药物的耐药机制铂类化疗药物是一类广泛应用于临床上的抗癌药物，主要包括顺铂、卡铂和奥沙利铂。
这类药物通过与DNA结合，干扰DNA修复和转录过程，从而引起癌细胞的死亡。
尽管铂类化疗药物在治疗癌症方面取得了显著的进展，但是耐药问题依然是一个困扰临床治疗的重要问题。
耐药的出现会导致化疗的失败，使患者的生存率大大降低。
因此，研究铂类化疗药物的耐药机制，对于预测和克服耐药现象具有重要的临床意义。
下面将详细介绍铂类化疗药物的耐药机制。
1.DNA修复系统的改变：铂类化疗药物主要通过与DNA结合形成DNA损伤，从而产生细胞毒性效应。
然而，癌细胞可以通过增强DNA修复能力来减少药物对于DNA损伤的作用。
这种耐药机制被称为DNA修复耐药。
DNA修复有多个途径，其中最主要的包括核苷酸切割修复(NER)、同源重组修复(HR)、非同源末端连接(NHEJ)和错配修复(MMR)等。
多种研究表明，铂类药物在肿瘤细胞内形成的DNA损伤主要通过NER途径修复。
耐药细胞通常通过下调NER的相关基因表达，降低DNA损伤的修复速率来减少药物对DNA的作用。
例如，一些细胞可以通过下调ERCC1（NER途径中的一个关键基因）的表达来降低NER的活性，从而导致对铂类药物的耐药。
此外，细胞还可以通过增强HR和NHEJ等修复途径来减少药物对DNA损伤的作用。
HR和NHEJ是细胞内最重要的DNA双链断裂修复机制，它们的过度活化可以增强耐药细胞对铂类药物的耐药性。
2.细胞凋亡通路的改变：细胞凋亡（程序性细胞死亡）是铂类化疗药物诱导的重要细胞毒性效应。
癌细胞可以通过改变凋亡通路来减少药物诱导的细胞死亡，从而导致耐药。
细胞凋亡可以通过两个主要通路实现：线粒体依赖的（线粒体凋亡途径）和线粒体独立的（死亡受体依赖途径）。
铂类药物通常通过线粒体依赖途径诱导细胞凋亡。
耐药细胞通常通过下调或突变细胞凋亡通路上的关键蛋白，如Bax、Bak、caspase-3等，来减少细胞死亡。
顺铂耐药的分子机制及中药干预的研究进展
顺铂耐药的分子机制及中药干预的研究进展顺铂是临床上广泛应用的一线抗癌药物，但顺铂耐药性的产生降低了顺铂的疗效。
顺铂是一种细胞周期非特异性药物，其主要作用靶点是细胞内具有亲核性的蛋白质、DNA和RNA。
顺铂耐药机制是多因素的，其中转运蛋白的异常表达、细胞内解毒作用的增强、DNA修复能力的增加以及细胞凋亡受阻是顺铂耐药的主要机制。
中药在肿瘤治疗中具有独特的优势，中药与顺铂联用能够提高疗效。
该文对顺铂耐药的机制和近年来中药与顺铂联合应用的研究进展进行综述。
标签：顺铂；耐药；联合用药；中药顺铂（cisplatin，DDP）是临床治疗肿瘤的广谱抗癌药，自1978年首次被FDA批准用于治疗膀胱癌和睾丸癌以来，多用于肺癌、卵巢癌、头颈癌等其他实体瘤的治疗[1]。
继第一代铂类药物顺铂之后，相继研发出第二代卡铂和第三代铂类药物奥沙利铂，但顺铂在卵巢癌三期等临床治疗中仍是最主要的药物[2]。
由于顺铂在治疗肿瘤的过程中会出现原发性耐药和获得性耐药，其中获得性耐药的迅速出现是顺铂化疗失败的主要原因[3]。
迄今为止，顺铂进入细胞内的机制仍旧没有完全明确，顺铂在血浆及细胞外结构稳定，由于细胞内的氯离子浓度相对于血浆以及细胞外液偏低，顺铂的氯离子解离后被水分子取代而具有亲电子特性，易与细胞内亲核物质如谷胱甘肽、金属硫蛋白、蛋氨酸、DNA等结合而形成加合物[4]。
顺铂耐药是一个多因素、多基因的复杂过程，有研究发现：中药与顺铂联用能够提高顺铂对肿瘤细胞的增殖毒性作用，诱导细胞凋亡从而提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性。
1 顺铂耐药机制1.1 顺铂的转运和代谢改变顺铂的理化性质决定了顺铂进入细胞和发挥细胞毒性的方式。
药物代谢的改变能够引起原发耐药和获得性耐药，与顺铂代谢有关的耐药研究较多，包括顺铂的摄取、流出和解毒过程。
很长一段时间内，人们认为顺铂是通过被动扩散进入细胞内，然而研究发现参与细胞铜代谢平衡过程的膜蛋白铜转运蛋白1（copper transporter 1，CTR1）参与顺铂的转运过程。
E3泛素连接酶对卵巢癌细胞系SKOV3／DDP顺铂耐药性的影响
E3泛素连接酶对卵巢癌细胞系SKOV3／DDP顺铂耐药性的影响目的探讨E3泛素连接酶（EDD）基因在SKOV3/DDP细胞顺铂耐药中的作用。
方法采用RT-PCR和Western blot检测人卵巢癌SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞内EDD表达水平的差异。
通过转染EDD-siRNA沉默EDD的表达后，噻唑蓝法检测顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，Annexin V-FITC/PI 双染法检测顺铂对细胞凋亡的影响；Western blotting检测髓样细胞白血病-1（Mcl-1）和细胞周期检测点激酶2（CHK2）蛋白表达水平。
结果SKOV3细胞EDD的表达水平显著低于卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP（P 0.05）。
结论EDD-siRNA能沉默EDD基因，降低Mcl-1蛋白的表达水平，增强顺铂对SKOV3/DDP细胞的促凋亡作用，降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性，有效恢复SKOV3/DDP细胞顺铂敏感性。
标签：EDD；卵巢癌；顺铂耐药；细胞凋亡卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其最主要的治疗策略是肿瘤细胞减灭术联合铂类药物为基础的化疗法，然而铂类耐药的形成是目前肿瘤治疗过程中的主要障碍之一，因此，研究卵巢癌细胞的耐药机制对卵巢癌提供新的治疗方法具有十分重要的作用。
E3泛素连接酶（E3 isolated by differential display，EDD）包括一个羟基末端的连接酶（HECT）泛素连接酶域，是果蝇肿瘤抑制因子hyd的人同源因子[1]，位于染色体8q22.3上，这个染色体区域通常与顺铂耐药具有一定的联系[2]。
EDD在卵巢癌、乳腺癌和胃癌中均存在过表达的现象[3-6]，高表达的EDD蛋白可作用于钙整合素结合蛋白1和细胞周期检测点激酶2（checkpoint kinase 2，CHK2），上调DNA损伤通路相关基因的表达，增强DNA损伤修复能力，增加顺铂等化疗药物的耐药性[7-9]，DNA损伤通路的大部分基因与铂类等化疗药物敏感性降低之间有一定的联系[10]。
Gleevec诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1凋亡的形态学研究
齐齐眙尔医学院学报 ２０ ０ ８年 第 ２ ９卷 第 ４期
Ｇｌｅ ｅ 诱 导 顺 铂 耐 药 卵 巢 癌 细 胞 Ｃ ｅｖ ｃ ＯＣ１凋 亡 的 形 态 学 研 究
郑 毅 孙 宇辉 王 蕾 郑建 华
【 要 】 目的 探 讨 Ｇ ｅ ｖ ｃ 顺 铂 耐 药 卵 巢 癌 细 胞 Ｃ １的诱 导 凋 亡 作 用 。 方 法 用 Ｇｌ ｖ ｃ 摘 ｌｅ ｅ 对 ＯＣ ｅ ｅ ｅ
ｓｓ ｏ ｕｇ— ｒ ｓｓ ａ ａｒａ ｔ ｏ ｅｌ ｅｎ ｎｃ ｈｅ ａ ｐｔ ｉ ｒ ｉ ｆｄｒ ｅ ｉｔ ｎｔｏｖ ｉｎ ｕｍ ｒ ｃ ｌ ｈａ ｅ ｔ ｐｏ ｏｓｓｏｆｄ ｕｇ— ｒ ｓｓ ａ ｖ ｉ ａ ｃｎ ｅ ｉｔ ｎｔｏ ａｒａｎ ｃ ｒ ｉ ｏｍ ａ ｃ ｌ ｅｌ ｉｄｕｃ ｄ ｂｙ ＤＤＰ． ｎ ｅ
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［ ｙｗｏｄ ］ Ｇｌｅ ｅ ＤＤＰ Ｏｖ ｒ ａ ｃ ｒ Ｄｒ ｇｒ ｓｓａ ｃ Ｋｅ ｒ ｓ ｅｖｃ ａ ｙ ｃｎ ｅ ｕ ｅ ｉｔｎ ｅ
细胞凋 亡是 一种 与 细胞 坏死 具 有 不 同形 态 及 生
１２ ２ 顺 铂 、 ｅｖｃ 合 用 药 对 Ｃ Ｃ ．． Ｇｌｅ ｅ 联 Ｏ １细胞 增 殖
华蟾素调控PI3K
项目（编号：皖中 医 药 发 展 秘 〔２０２２〕７０号 ）；安 徽 省 第 十 三批“１１５”产业创新团队 作者单位：１安徽医科大学中西医结合临床医学系，合肥 ２３００３２ ２安徽医科大学第一附 属 医 院 中 西 医 结 合 肿 瘤 科，合 肥 ２３００２２ 作者简介：舒美玲，女，硕士研究生； 张 梅，女，副教授，主任医师，博士生导师，责任作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｍ１３８５６９９００１９＠１６３．ｃｏｍ
１ 材料与方法
１．１ 实验材料 人卵巢癌细胞株 Ａ２７８０和人卵巢 癌细胞株顺铂耐药株 Ａ２７８０／ＤＤＰ购自中国科学院 上海细胞 生 物 所；顺 铂 注 射 液 （货 号：Ｈ２００１０７４）购 自江苏豪森药业集团有限公司；ＣＢＧ注射液（货号： 国药准字 Ｚ３４０２０２７３）由安徽华润金蟾药业股份有 限 公 司 提 供；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴＩＮ２ 抑 制 剂 （货 号： ２６８４４１２４１５）购自美国 ＭＣＥ公司；ＲＩＰＡ１６４０培养 基 （货 号：Ｃ１１８７５５００ＢＴ）和 胎 牛 血 清 （货 号： Ａ５６７０７０１）购自美国 Ｇｉｂｃｏ公司；ＡＢＷ 基质胶 （货 号：０８２７０４５）购自上海诺娃医药科技有限公司；ＥｄＵ 试剂 盒 （货 号：Ｃ００７１Ｓ）和 Ｈｏｅｃｈｓｔ试 剂 盒 （货 号： Ｃ０００３）均购自碧云天生物技术有限公司；磷酸肌醇
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安徽医科大学学报 ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ ２０２４Ａｐｒ；５９（４）
３激酶（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ３ｋｉｎａｓｅ，ＰＩ３Ｋ）（货号： Ｒ２７７６８）、丝氨酸 ／苏氨酸激酶 （ＡＫＴ）又名蛋白激 酶 Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ，ＰＫＢ）（货号：Ｒ２３４１２）、Ｅ钙 黏蛋 白 （货 号：３４０３４１）、 Ｎ 钙 黏 蛋 白 （货 号： ３８０６７１）抗 体 购 自 成 都 正 能 生 物 技 术 责 任 有 限 公 司；逆转录试剂盒 （货号：Ｑ１１１０２）和 ＲＴｑＰＣＲ试 剂盒（货 号：Ｒ２２２０１）购 自 南 京 诺 唯 赞 生 物 科 技 股 份有限公司。 １．２ 方法 １．２．１ 人卵巢癌细胞株的培养 Ａ２７８０和 Ａ２７８０／ ＤＤＰ细胞贴壁培养于含 １０％胎牛血清、１％青 －链 霉素和 ０１％支原体清除剂的 ＲＩＰＡ１６４０培养基中， 置于含 ５％ ＣＯ２的 ３７℃恒温培养箱中。细胞密度 达 ８０％时进行传代。此外，Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞在传代 贴壁后另给予 １μｇ／ｍｌ顺铂以维持耐药性。 １．２．２ ＣＣＫ８法检测细胞增殖能力 分别取对数 生长期 Ａ２７８０和 Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞，按照 ８×１０３个 ／ 孔的密度接种于 ９６孔板，细胞贴壁后按实验设计分 别给药：ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、１００、１６０μｍｏｌ／ Ｌ），ＣＢＧ（２００、１００、５０、２５、１２５、６２５、３１２５ｍｇ／ｍｌ） 于 ２４、３６、４８ｈ后每孔加入 ＣＣＫ８溶液 １０μｌ，避光 孵育 １５ｈ后读取 ５６２ｎｍ处光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ， ＯＤ）值。计算 ＤＤＰ对 Ａ２７８０和 Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞或 ＣＢＧ对 Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞 的 半 数 抑 制 浓 度 （ｍｅｄｉａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｔｒａｔｉｏｎ，ＩＣ５０），并 计 算 出 Ａ２７８０／ＤＤＰ 的耐 药 指 数 （ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ，ＲＩ）＝ＩＣ５０（Ａ２７８０／ ＤＤＰ）／ＩＣ５０（Ａ２７８０）。 ＣＢＧ（０、２、４、６ｍｇ／ｍｌ）处 理 ２４ｈ后再加入梯度浓度 ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、 １００、１６０μｍｏｌ／Ｌ），２４ｈ后加入 ＣＣＫ８溶液 １０μｌ， 避光孵育 １５ｈ后读取 ５６２ｎｍ处 ＯＤ值，计算 ＣＢＧ 的逆转指 数 （ｒｅｖｅｒｓａｌｆｏｌｄ，ＲＦ）＝ＩＣ５０（０ｍｇ／ｍｌ）／ ＩＣ５０（２、４、６ｍｇ／ｍｌ）ＣＢＧ［５］。实验独立重复 ３次，设 ３个复孔。 １．２．３ 实验分组 根据 ＣＢＧ的 ＩＣ５０值和逆转耐药 指数设计实验分组：对照组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ）、低 剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋２ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、中剂量 组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋４ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、高剂量 组 （１２５μｍｏｌ／Ｌ ＤＤＰ＋６ ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、抑 制 剂 组 （１２５ μｍｏｌ／Ｌ ＤＤＰ＋６ ｍｇ／ｍｌＣＢＧ ＋６ μｍｏｌ／Ｌ ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ抑制剂）。 １．２．４ 平板克隆实验评估细胞的克隆增殖能力 将 Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞按 ５００个 ／孔的密度接种于 ６孔 板中，待细 胞 贴 壁 生 长 后 按 分 组 更 换 含 药 培 养 基。 持续培养 ２周，期间每隔 ４ｄ换液。培养结束后，弃
脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究
３ Ｆ Ｄ ． Ｕ Ｒ作 用 后 细 胞 凋 亡 、 胞 Ｄ Ａ 含 量 和 细 胞 周 期 的 细 Ｎ
变化 ： 化 丙 啶 的量 间 接 反映 了细胞 内 Ｄ Ａ的 含量 ， 细胞 碘 Ｎ 从 的 Ｄ Ａ直 方 图 上 可 以 清 楚 地 观 察 到 卵 巢 癌 细 胞 生 长 周 期 的 Ｎ 分 布 ， 有 ２个 峰 ， １个 峰 即 Ｇ ～ Ｇ 期 （ Ｎ 共 第 ｏ ． Ｄ Ａ合 成 前 期 ） ， 第 ２个 峰 为 ｃ 期 （ Ｎ 合 成 后 期 ） Ｍ 期 （ 胞 分 裂 期 ） 两 ２ ＤＡ 与 细 ， 峰 之 间 是 Ｓ期 （ Ｎ Ｄ Ａ合 成 期 ） Ｃ Ｏ ３ 胞 Ｇ 。 ＡＶ 细 ｏ—Ｇ。 比 例 为 期
个 ／ｉ 度 的 单 细 胞 悬 液 １０ ， 夜 ， 成 含 药 培 养 基 ， ｎ浓 ｌ ０ 过 换 ＦＤ Ｕ Ｒ作 用 ２ ４ ｈ或 顺 铂 作 用 ２ ｈ 或 半 数 抑 制 浓 度 （Ｃ。 的 ， Ｉ５） Ｆ Ｒ 作 用 ２ ＵＤ ４ｈ后 ， 药 培 养 ２ 无 ４或 ４ ， 换 成 顺 铂 培 养 ２ｈ ８ｈ 再 后 ， 药 培 养 ４ ， ＭＴ 无 ８ｈ 用 Ｙ比 色 法 测 定 吸 光 度 （ 值 。 实 验 Ａ）
（９ ２ ６ ．６±０ ０ ） ， Ｕ Ｒ 作 用 后 间 隔 ２ ４ ．５ ％ Ｆ Ｄ ４、８ ｈ的 Ｇ ～Ｇ 期 比 ｏ ． 例 分 别 减 少 至 （９ ８ ５ ． １±０ ４ ） 、 ４ ．０±０．１ ％ ； Ａ Ｖ ０ ％ （ ３４ ５ ） Ｃ Ｏ ３细 胞 Ｓ期 比 例 为 （ ２ ８ ２ ．０±０ ２ ） ， Ｕ Ｒ作 用 后 间 隔 ２ 、８ ｈ的 ．８ ％ Ｆ Ｄ ４ ４
白丽 霞 赵 丽 嫣
肿 瘤 细 胞 减 灭 术 及 术 后 化 学 药 物 治 疗 （ 疗 ） 目 前 治 化 是 疗 卵 巢 癌 的 主 要 手 段 ， 铂 类 为 基 础 的 联 合 化 疗 明 显 改 善 了 以 晚期 卵巢 癌患 者 的 治疗 效 果 ， 耐 药性 的产生 严 重影 响 其化 但 疗 效 果 。 本 研 究 采 用 四 甲 基 偶 氮 唑 蓝 （ ｒ 比 色 法 、 疫 细 ＭＴ ） 免
卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展
卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展李海燕综述王常玉审校・２９７・【关键词】顺铂；卵巢癌；耐药机制【中图分类号］Ｒ７３７．３１【文献标识ｔｉｂｉＡ【文章编号】１１３０４－５５１１（２００９）０５－０２９７４）５卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一，近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势，据报道，美国２００７年有２２４３０例卵巢癌新发病例…。
由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法，约７０％患者确诊时已为晚期（ＦＩＧＯ分期，Ⅲ期和Ⅳ期），其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。
在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。
但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（ｐｒｉｍａｒｙｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和（或）获得性（ａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）多药耐药（ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的存在，导致晚期患者的５年生存率仅为２０％一３０％。
ＤＤＰ－ＤＮＡ加合物的形成而阻断ＤＮＡ的转录和复制是顺铂杀伤肿瘤细胞的主要机理。
虽然大多数卵巢癌患者最初对顺铂的反应性很高，但在治疗中产生的ＭＤＲ已成为临床治疗的主要障碍。
Ｙａｋｉｒｅｖｉｃｈ等口。
的研究发现约７５％～８０％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应，其余则表现为原发耐药，最终所有化疗患者至少８０％出现耐药。
导致卵巢癌对顺铂产生耐药的具体分子机理并不十分清楚，因此研究卵巢癌对顺铂耐药的机制对于防止或逆转耐药产生，改善化疗效果，提高病人生存率有着很重要的意义。
１ＢＲＣＡ２的二次突变ＢＲＣＡ２基因结构较为复杂，编码３４１８个氨基酸残基，定位于人类染色体１３ｑ１２—１３，由２７个外显子组成。
其编码的氨基酸序列与已知的蛋白质无明显的同源性。
ＢＲＣＡ２基因的第３个外显子和转录因子ｃ－ｊｕｎ具有微弱的相似性，ＢＲＣＡ２基因产物与Ｒａｄ５１共同作用，参与ＤＮＡ双链断裂的修复过程ｐＪ，发挥抑癌作用。
Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ【４１与Ｒｕｄｋｉｎ＂ｏ的研究显示：家族性乳腺癌和卵巢癌通常有ＢＲＣＡ２基因突变，其蛋白产物与ＤＮＡ的重组及修复和转录调控有关。
顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验
Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ａ ｔ ｙ ｏ ｐ ｒｍ ｎｔ ｌＳ ｕｄ ｆＣｈｅ ｏ ｅ ｓｔｖ ｔ ｆＨｕ ａ ａ ｉ ｎ Ｃａ ｃ ｒ Ｃｉｐ ａ ｉ ｒ ｓｓ ｎ ｌ ｍ ｓ ｎ ｉｉ ｉｙ ｏ ｍ ｎ Ｏｖ ｒａ ｎ ｅ ｓ ｌ ｔｎ－ ｅ ｉｔ ｔＣｅｌ ａ ｓ
铂、 紫杉醇 、 吉西他 滨两药联合组 与相应单一用 药组相 比 ， 能显著抑 制肿 瘤细胞的生长 ， 其中吉西他滨 ＋洛铂及 紫杉 醇 ＋洛
铂组抑制率 明显增高 。相 同浓度顺铂作用 ４ ，Ｋ Ｖ ／ Ｄ ８ｈ后 Ｓ Ｏ ３ Ｄ Ｐ细胞 的凋亡率低 于 Ｓ Ｏ ３细胞 。洛铂 、 Ｋ Ｖ 紫杉醇 、 吉西他滨作
第卷第期年月中山大学学报医学科学版院妇产科甘肃兰州摘要目的研究顺铂洛铂紫杉醇吉西他滨对卵巢癌细胞及顺铂耐药细胞增殖的影响
第３ ０卷
２０ ０ ９年
第１ 期
１ 月
中山大学学报 （ 医学科学版 ）
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｕ Ａ —Ｅ ＮＶ Ｒ ＩＹ（ Ｅ ＩＡ Ｃ Ｅ Ｃ Ｓ Ｏ Ｒ Ａ ＦＳ Ｎ Ｙ ＴＳ Ｎ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ Ｍ ＤＣ ＬＳ ＩＮ Ｅ ）
Ｖｏ ．０ Ｎｏ １ １ ３ ．
Ｊｎ ２０ ａ． ０９
顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验
秦 晓黎 ， 金 平， 靳 荣
（ 兰州大学第一医院妇产 科 ， 甘肃 兰州 ７ ００ ） ３０ ０
摘
要 ：【 目的】 研究顺铂 （Ｄ ）洛铂 （Ｂ ）紫杉醇 （Ｔ ）吉西他滨 （ Ｅ 对 卵巢癌 Ｓ Ｏ ３ Ｄ Ｐ、 ＬＰ 、 ＰＸ 、 Ｇ Ｍ） Ｋ Ｖ 细胞及顺铂耐药 Ｓ Ｏ ３ Ｋ Ｖ
顺铂的作用靶点及耐药机制的研究进展
DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2020.03.016·综述·顺铂的作用靶点及耐药机制的研究进展王悦璇，刘秀均癌症已成为全球第二大死因。
根据国际癌症研究机构的统计，2018 年全球新诊断的癌症病例为1810 万例，全球死亡人数为960 万[1]。
顺铂是1978 年FDA 批准的首个用于癌症治疗的铂类化合物，常用于治疗多种类型的癌症，包括卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、结肠直肠癌、膀胱癌和肺癌等[2-4]，具有抗癌谱广、作用机制独特、利于临床联合用药等特点。
然而，顺铂的耐药性大大限制了它的临床应用。
因此，我们期待通过增强顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用以及减少肿瘤对顺铂的耐药来进一步提高顺铂的临床价值。
1 顺铂的作用机制顺铂的抗肿瘤作用与DNA 损伤和DNA 合成的抑制相关。
顺铂与DNA 相互作用形成DNA 加合物，导致DNA 链内或链间交联，激活多种信号通路，诱导氧化应激，激活细胞凋亡，最终导致肿瘤细胞死亡[5-6]。
1.1 顺铂导致 DNA 损伤顺铂进入细胞后，在细胞质中，其氯原子被水分子取代。
该取代产物是有效的亲电试剂，可以与包括蛋白质上的巯基和核酸上的硝基供体原子在内的亲核试剂反应。
顺铂与亲核DNA 中的嘌呤碱基N7 位点发生反应形成蛋白质-DNA 复合物以及DNA-DNA 链内和链间交联加合物[7]。
这些加合物可导致肿瘤细胞的DNA 损伤。
如果DNA 损伤无法修复，细胞就会死亡（通常是凋亡）。
细胞凋亡是ATP 依赖的“程序性细胞死亡”。
共济失调性毛细血管扩张突变（ATM）和ATM/RAD3 相关蛋白（ATR）是将顺铂诱导的DNA 损伤与凋亡连接的主要级联信号，可使丝氨酸20 和丝氨酸15 上的TP53 蛋白磷酸化。
激活的TP53 通过核和细胞质机制发挥作用，改变线粒体外膜通透性或激活死亡受体信号转导通路，导致细胞死亡[8]。
1.2 顺铂诱导氧化应激损伤氧化应激是顺铂常见的细胞毒性机制。
20926827_miR-141-3p表达与卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的相关性研究
巢癌细胞耐药的方法具有重要意义。越来越多的证
据显示,
miRNA 在 包 括 乳 腺 癌 在 内 的 恶 性 肿 瘤 的
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河 北医科大学学 报
肿 瘤 增 殖、侵 袭、转 移 及 耐 药 中 发 挥 着 重 要 作
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[摘要] 目的 探讨 miR141
3p 在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的表达和作用。方法 采用实时荧光定量 PCR 法
检测 A2780/DDP 细胞中 miR141
3p 的表达水平;下调/过表 达 miR141
耐药小鼠实验报告
一、实验目的本实验旨在建立人卵巢癌顺铂耐药细胞SCID小鼠腹腔移植模型，并对其生物学特性进行观察和探讨，以期为卵巢癌的耐药机制研究和新型抗肿瘤药物的开发提供实验依据。
二、实验材料1. 细胞：人卵巢癌SKOV3细胞株、人卵巢癌SKOV3/CDDP细胞株（顺铂耐药细胞株）。
2. 实验动物：严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠。
3. 试剂与仪器：顺铂、细胞培养试剂、游标卡尺、显微镜、细胞培养箱、PCR仪、凝胶成像系统等。
三、实验方法1. 细胞培养：将人卵巢癌SKOV3细胞株和SKOV3/CDDP细胞株分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 细胞接种：将SKOV3/CDDP细胞用胰酶消化后，制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1×10^7个/mL。
3. 小鼠腹腔注射：将30只SCID小鼠随机分为实验组和对照组，每组15只。
实验组小鼠腹腔注射SKOV3/CDDP细胞悬液，对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。
4. 动物观察：每日观察小鼠活动、摄食、排便等情况，记录小鼠死亡时间。
5. 肿瘤生长观察：每周使用游标卡尺测量肿瘤最长径和最短径，计算肿瘤体积。
6. 组织学观察：取小鼠肿瘤组织，进行HE染色和免疫组化染色，观察肿瘤组织形态和细胞增殖情况。
7. PCR检测：提取肿瘤组织DNA，进行PCR检测，分析耐药相关基因的表达情况。
四、实验结果1. 肿瘤生长：实验组小鼠在腹腔注射SKOV3/CDDP细胞后，肿瘤生长迅速，与对照组相比，肿瘤体积明显增大，小鼠死亡时间缩短。
2. 组织学观察：HE染色结果显示，实验组小鼠肿瘤组织细胞排列紊乱，异型性明显，与正常组织相比，细胞增殖旺盛。
免疫组化染色结果显示，实验组小鼠肿瘤组织中耐药相关蛋白表达水平显著升高。
3. PCR检测：PCR检测结果提示，实验组小鼠肿瘤组织中耐药相关基因的表达水平显著升高。
五、讨论本实验成功建立了人卵巢癌顺铂耐药细胞SCID小鼠腹腔移植模型，并对其生物学特性进行了观察。
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卵巢癌细胞对顺铂耐药机制的研究癌症 1999年第6期第19卷基础研究作者：陈葳，李旭，杨玉琮，程小丽，牛映斗单位：西安医科大学第一附属医院临床分子生物学中心(西安，710061)关键词：卵巢癌细胞株；顺铂；药物耐受性【摘要】目的：探明卵巢癌对顺铂产生耐药的机理。
方法：采用顺铂体外诱导法建立卵巢癌耐药细胞株HO-8910/2。
MTT法测定其耐药倍数和交叉耐药性，原子吸收法测定细胞内Pt浓度，分光光度法测定GSH、GST，流式细胞仪分析细胞周期，检测bcl-2和P-GP的表达。
结果：HO-8910/2耐顺铂是亲代细胞HO-8910的6.6倍，与5-FU，ADR有交叉耐药性。
对照亲代细胞，耐药细胞中GSH含量与GST活性明显增高，细胞G2/M比例增加，细胞内铂(Pt)摄入和蓄积减少，bcl-2表达阳性细胞增多，P-GP无变化。
结论：细胞内药物浓度下降、bcl-2的表达增加、GSH与GST 对铂化合物解毒作用的增强可能是HO-8910/2耐药机制形成的主要原因。
中图分类号：R737.31 文献标识码：A文章编号：1000－467X(1999)06－0674－03Experimental study on the mechanism of cisplatin resistance in humanovarian carcinoma cellsCHEN Wei，LI Xu，YANG Yu-cong，et al.Center for Clinical Molecular Biology，the First Affiliated Hospital of X i’an Medical University. Xi’an 710061，P.R.China【Abstrct】 Objective： To explore the mechanism of cisplatin resistance in human ovarian cancer.Methods：A cisplatin resistant human ovarian cancer cell line，HO-8910/2，was developed in vitro after prolonged drug exposure of the cisplatin-sensitive parental HO-8910 cell line. Drug cytotoxicities were determined using the micro tetrazolium assay. The concentrations of cellular Pt were determined by atomic absorption and the levels of cellular GSH and GST by were detected spectrophotometry. Cells cycle and expression of bcl-2 and P-gp were analysed by flow cytometry.Results：HO-8910/2 cell line exhibited a degree of resistance of approximately 6.6times compared with the parental cell line following 48h exposure to the drugs and was cross-resisance to 5-FU and VCR. A 44.1％ reduction wasobserved in platinum accumulation in the selected cells after culturing with CDDP for two hours. Increased levels of cellular glutathione and glutathione S-transferase were found in the cisplatin-resistant cells with the results of GSH(μmol/ml) 17.63± 2.00vs 15.63± 1.70 (P＜ 0.05) and GST (IU/ml) 9.67± 2.05 vs 5.33± 1.70 (P＜0.01)，respectively.HO-8910/2 cells revealed a high percent of G2/M and an overexpressed bcl-2 protein (75.9％vs 34.4％)，but there was no difference in P-gp expression between the two cell lines.Conclusins：It is demonstrated that decreased drug accumulation，reduced susceptibility to cisplatin-induced apoptosis and increased content of intracellular glutathione and activity of glutathione S-transferase may contribute to the development of cellular resistance in the HO-8910/2 cells. The resistance is not related to the multidrug resistant system.Key words：Ovarian carcinoma cell line;Cisplatin;Drug resistance顺铂是治疗卵巢癌有效的药物。
对顺铂产生耐药性是影响卵巢癌以顺铂为主的联合化疗方案治疗效果的一个重要原因〔1〕。
Gately〔2〕和梁正东〔3〕通过建立耐顺铂的卵巢癌细胞模型，发现顺铂耐药与多种因素有关。
为了进一步探明卵巢癌细胞对顺铂耐药的原因，我们为此建立了一株人卵巢癌耐顺铂细胞株，并从不同角度探讨了其耐药的发生机理。
1材料与方法1.1材料人卵巢癌HO-8910细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库，K562/ADR为本室诱导建立。
顺铂(CDDP)由济南齐鲁制药厂生产，FITC标记的抗人bcl-2单抗为Dako公司产品，PE 标记的抗P-GP单抗系Immunotech公司产品。
1.2建株过程将HO-8910细胞培养在RPMI-1640培养基中，内含10％新生小牛血清及100u/ml的青霉素、100μg/ml的链霉素。
从0.1μg/mlCDDP开始，逐渐增加剂量，最终使HO-8910细胞能持续生存于2.0μg/mlCDDP的环境中，并可以传代培养，将该细胞命名为HO-8910/2。
以下所有实验均在撤药二周后的一周内完成。
1.3耐药指数及交叉耐药性检测取指数生长期的亲代细胞HO-8910与耐药的细胞HO-8910/2，接种于96孔板，细胞浓度为5×104/孔，分别与不同浓度梯度的5-FU、VCR、ADR、CDDP培养48小时，每个浓度设四个复孔。
MTT染色，酶标仪测OD值。
通过药物浓度曲线求出耐药指数。
1.4细胞内铂(Pt)浓度测定将亲代及耐药细胞接种于25ml培养瓶中，24小时后加入100μg/ml的CDDP，37℃，5％CO2培养箱孵育2小时，撤药，依次取撤药后0，2，8，12小时的细胞，将其制成细胞匀浆，原子吸收法测定细胞内Pt浓度。
1.5细胞GSH及GST的测定按文献〔4，5〕法测定亲代和耐药细胞的GSH含量及GST活力。
1.6细胞周期分析取指数生长期的亲代和耐药细胞，调整细胞数量为2×106/ml，经碘化丙啶(PI)染色，用流式细胞仪(EPICSELITE，Coulter，USA)分析细胞周期及DNA含量。
1.7细胞P-GP表达取2×106/mlHO-8910、HO-8910/2和K562/ADR的指数生长期细胞将它们各自分成两管，分别标记IgG2a-PE(阴性对照)和P-GP-PE。
流式细胞仪检测亲代和耐药细胞阳性细胞的百分比。
1.8细胞bcl-2的表达FITC标记的抗bcl-2单抗标记2×106/ml亲代和耐药的卵巢癌细胞，分别以IgG1-FITC标记的HO-8910及HO-8910/2为阴性对照，流式细胞仪检测阳性细胞百分比。
2结果2.1交叉耐药及耐药指数将亲代及耐药细胞分别与不同浓度梯度的5-FU，VCR，ADR，CDDP作用48小时，测出HO-8910/2对顺铂的耐药指数为6.6，与5-FU，ADR的耐药指数分别是3.16和1.22，两种细胞对VCR 的IC50相同。
2.2细胞内Pt浓度图1可看出HO-8910/2在与100μg/mlCDDP保温2小时后撤药，0时细胞内Pt浓度较HO-8910细胞低，仅是其的44.1％，其后一直保持较低水平。
图1 亲代和耐药细胞内Pt浓度2.3细胞内GSH含量和GST活力耐药细胞HO-8910/2的GSH含量为17.63±2.00和GST活力为9.67±2.05均高于亲代HO-8910细胞分别P＜0.05和P＜0.01（见表1)。
表1 亲代及耐药细胞GSH含量及GST活力组别nHO-8910HO-8910/2P值GSH(μmol/ml)815.63±1.7017.63±2.00＜0.05GST(IU/ml)85.33±1.709.67±2.05＜0.01 2.4细胞周期分析图2可看出亲代与耐药细胞周期分布有所不同，耐药细胞HO-8910/2的G2/M期明显高于亲代HO-8910细胞，DNA指数无明显差异。
图2 亲代及耐药细胞的DNA组方图左图：亲代细胞HO-8910右图：耐药细胞HO-8910/22.5细胞P-GP和bcl-2表达流式细胞仪测定亲代细胞的P-GP表达为4.4％，耐药细胞的P-GP表达4.0％，两组无显著性差异。
亲代细胞HO-8910bcl-2阳性率为34.4％，耐药细胞HO-8910/2的阳性率为75.9％，明显高于亲代细胞(图3)。
图3 亲代HO-8910细胞和耐药HO-8910/2细胞bcl-2表达A：亲代细胞HO-8910B：耐药细胞HO-8910/23讨论我们将卵巢癌细胞持续培养在具有细胞毒性药物的环境中，获得了耐顺铂的卵巢癌细胞株。