【CN110101848A】一种逆转肿瘤细胞顺铂耐药纳米药物及其制备方法和应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910289349.4
(22)申请日 2019.04.11
(71)申请人 天津大学
地址 300072 天津市南开区卫津路92号
(72)发明人 常津　陈静　王汉杰　宫晓群　
武晓丽　
(74)专利代理机构 天津市北洋有限责任专利代
理事务所 12201
代理人 程小艳
(51)Int.Cl.
A61K 38/44(2006.01)
A61K 9/127(2006.01)
A61K 47/24(2006.01)
A61K 47/28(2006.01)
A61P 35/00(2006.01)
C07F 15/00(2006.01)A61K 31/282(2006.01)A61K 31/53(2006.01)
(54)发明名称一种逆转肿瘤细胞顺铂耐药纳米药物及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种逆转肿瘤细胞顺铂耐药纳米药物及其制备方法和应用，所述纳米药物由脂质体自组装形成，其中，包括脂质体磷脂双分子层之间疏水腔负载的疏水性顺铂前药和自组装形成亲水腔包载亲水性药物替拉扎明和葡萄糖氧化酶。

脂质体载体与负载的药物以亲疏水作用力形成非缀合的位置关系。

本发明通过优化制备工艺，最终成功制备得到纳米药物，产物粒径适中可控。

纳米药物中葡萄糖氧化酶与肿瘤细胞中丰富的葡萄糖反应可消耗耐药肿瘤细胞中的氧气从而激活化疗药物TPZ的生物毒性。

此外，在乏氧条件下纳米药物中TPZ能够抑制顺铂耐药细胞高表达的DNA自我修复蛋白XPF，从而有助于增
强顺铂对细胞的杀伤效果。

权利要求书2页 说明书6页 附图3页CN 110101848 A 2019.08.09
C N 110101848
A
权　利　要　求　书1/2页CN 110101848 A
1.一种逆转肿瘤细胞顺铂耐药纳米药物，其特征在于，所述纳米药物包括脂质体磷脂双分子层之间疏水腔负载疏水性顺铂前药和自组装形成亲水腔包载亲水性药物替拉扎明和葡萄糖氧化酶。

2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物的平均粒径为80～90nm。

3.根据权利要求1或2所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物中顺铂前药的载药率为7.5～8.0％。

4.根据权利要求1～2中任一项所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物中替拉扎明的载药率为1.8～2.0％。

5.根据权利要求1～2中任一项所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物中葡萄糖氧化酶活性为2.0～2.5U/mg。

6.根据权利要求1～2中任一项所述的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：脂质体与顺铂前药旋蒸得到均匀分散的薄膜，而后脂质体薄膜在溶有亲水药物替拉扎明和葡萄糖氧化酶的磷酸盐缓冲液中水化，即为所述纳米药物。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述顺铂前药制备方法包括以下步骤：
(1)将1g顺铂加入到100ml圆底烧瓶中，加入36ml30％的双氧水，55℃加热2小时，温度升高至100℃加热30min，此时溶液变成澄清淡黄色；
将反应移出冷却30min后放到4℃冰箱中过夜结晶，将生产的淡黄色结晶物，过滤，分别用水，乙醇，乙醚洗涤；
置于真空干燥箱中干燥过夜，最后得到金黄色颗粒状固体，即为四价羟基顺铂；
(2)称取200mg四价羟基顺铂放入圆底烧瓶中，加入40ml N,N-二甲基甲酰胺搅拌均匀，加热到65℃，加入266mg异氰酸十二烷基酯，继续反应直到变成澄清黄色溶液；
在65℃下将N,N-二甲基甲酰胺旋干，加入少量甲醇溶解，加入大量乙醚沉淀，离心去除上层清液，沉淀放到真空干燥箱中干燥，即得轴向接碳十二的四价铂前药。

8.根据权利要求6所述纳米药物的制备方法，其特征在于，所述纳米药物组装方法包括以下步骤：
分别用有机溶剂溶解二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂聚乙二醇和四价铂前药，加入圆底烧瓶中混合均匀，用旋转蒸发仪旋蒸，使其逐渐旋干，确保有机溶剂完全挥发；
加入溶有替拉扎明和葡萄糖氧化酶的PBS溶液，超声；
再用脂质体挤出器挤推，用超滤管洗三次，再用滤膜过滤，即得所述纳米药物。

9.根据权利要求6或8所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二甲基亚砜、三氯甲烷其中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂聚乙二醇和四价铂前药的浓度为5～20mg/mL；
优选地，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂聚乙二醇和四价铂前药混合的体积比例为12：4：1：4或8：8：1：4；
优选地，所述旋蒸温度为40℃～60℃；
优选地，所述旋蒸转速为50rpm，旋蒸时间为3～5h；
2。