4种金丝桃属植物基因组DNA提取及RAPD分析
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学依 据．
关键 词 ： 丝桃 属 金
Ｄ Ａ提 取 Ｎ
Ｒ Ｐ 分析 ＡＤ
中 图分 类 号 ： ９ ３ Ｑ ４
文 献 标识 码 ： Ａ
金 丝 桃 属 （ ｐ ｒ ｕ ．隶 属 藤 黄 科 ，全 世 界 Ｈｙｅｉ ｍ Ｌ ） ｃ
用 于 Ｄ Ａ提 取 的 叶 片采 自浙 江师 范大 学 学校 Ｎ 绿化 科 苗 圃栽 培 的金 丝桃 属植 物 ， 别是 贯 叶连翘 分
Ｄ Ａ进 行 Ｒ Ｐ Ｎ Ａ Ｄ分析 ． 结果 共 产生 了 ３ ０条 Ｄ Ａ片段 ，其 中 ２ ８条谱 带具 有遗 传 多态性 ，约 占 ６ ． 蛄论 ３ Ｎ １ ６１ ％．
Ｒ Ｐ 分析 揭 示 ４种 金 丝桃 属 植 物 之 间 的 Ｄ Ａ指 纹 存 在 明显 的种 间差 异 ，能 为金 丝桃 属 植 物 的 分 类鉴 定提 供 遗 传 ＡＤ Ｎ
沉 淀蛋 白质 ， ４℃ １ ０ ｍ ｎ离 心 １～ ０ｍｉ， ２０ ０ｒ ｉ ／ ０ ２ ｎ 弃
的 Ｄ Ａ分 子 遗 传标 记 技 术 ，已被 广泛 地 应 用 在 药 Ｎ 用 植 物分 类 鉴别 中【 ． 本研 究 试 图以金 丝 桃 属 的 ４ 种 植 物 为 材 料 种 ，发 展 适 于 金 丝 桃 属 植 物 的 总
新 鲜植 物 叶 片约 ０４ｇ 用 ７ ％ 酒 精洗 ６ｓ ． ， ０ ，用蒸 馏
水清洗三次； ②把洗净的叶片于研钵 中快速用液氮
研成粉末 ， 将粉末转至 １ Ｌ ． ｍ 离心管中； ５ ③加入 １
ｍ Ｌ预 冷 的提取 介质 （ ０ ｍ ｏ／ Ｈ ４８Ｎ Ａ ，５ １ ｍ ｌ ｐ ． ａ ｃ ０ ０ Ｌ
沉淀； ⑦上清液加入 ０ 倍体 积的 一 ０℃预冷的异 ． ６ ２ 丙醇 ． 和混 匀后 于 ４℃沉淀 核 酸 ２ｈ ⑧４ １ ０ 温 ； ℃ ２００
ｒ ｉ ／ ｎ离心 ２ ｉ， ｍ ０ｍ ｎ 收集沉淀； ⑨用 ７０ 无菌蒸 ５
馏水溶解沉淀 ， 并于 ５ ０℃ 水浴助溶； ２００ ⑩４ｏ １ ０ Ｃ ｒ ｎ离心 １ ｎ 弃 不溶 物 ． 清液 中加入 ０６倍 ／ ｍｉ ０ｍｉ， 上 ． 体 积异 丙 醇 ，１１ ／０体积 ３ｍ ｌ ａ ｅ Ｈ ５２， 匀 ｏ／ Ｎ Ａ （ ．） 混 Ｌ ｐ
桃属 植物 至今 未见报 道 ． 随 机扩 增 多 态性 Ｄ Ａ （ ｎ ｏ ｍ ｌ ｅ ｏｙ Ｎ ｒ ｄ ｍ ａ ｐｉ ｄｐ ｌ ａ ｉ ｆ — ｍ ｒｈｃＤ Ａ，Ｒ Ｄ ｏｐ ｉ Ｎ ＡＰ １是 ２ ０世 纪 ９ Ｏ年 代 发展 起 来
采用改 良的低 ｐ Ｈ值高盐 法 ， 步骤如下： ①取
第２ ６卷第 ４期 ２１ ０ ０年 ８月
文 章 编 号 ： ６ ４ ０ ７ （０ ０ ０ — ｏ ４ ｏ １７ — ８４ ２ １ ）４ ０ ６ 一 ４
山西大 同大学学报（ 自然科学版）
Ｊｕ ａ ｆ ｈｎ ｉ ａｏ ｇＵ ｉ ｒｉ （ａ ｒｌ ｃｅｃ） ｏ ｒ ｌ ａｘ Ｄ ｔｎ ｎｖ ｓｙＮ ｔ ａ Ｓ ｉ ｅ ｎ ｏＳ ｅ ｔ ｕ ｎ
ｍｍｏ ／Ｌ Ｈ ０ ＥＤＴＡＮａ ｌ ｐ ８． ２， ５ ０ ｍｍｏ／Ｌ Ｃ１ ０ ｌ Ｎａ ，２％
Ｐ Ｐ ． Ｄ ， ｐ 为 ５ ）④置 浮桥 上 ６ Ｖ ，１ ％Ｓ Ｓ 其 Ｈ ４ ．； ５ ５℃ 水 浴保温 ４ ｉ， 间颠倒混 匀几次 ； 室温下 ０ｍｎ 其 ⑤ １ ０ ｍ ｎ离心 １ ｍｎ 弃沉 淀． ２００ｒ ｉ ／ ５ ｉ， ⑥加入 ２ 体 ／ ３ 积 的 ｐ ． ２５ｍｏ Ｌ Ｋ ｃ 混 匀 ， Ｈ ４８ ． ｌ ａ ， ／ ０ｏ 置 ３ ｉ Ｃ放 ０ｒ ｎ ｎ
Ｖ０ Ｉ６ Ｎｏ４ Ｉ ． ． ２ Ａｕ ．０１ ｇ２ ０
４种 金 丝桃 属 植 物 基 因组 ＤＮ Ａ提 取及 Ｒ Ｄ分 析 ＡＰ
周 凤 ，张 东旭 ，吕洪飞
（． 西大 同大学农 学与 生命 科 学 学院 ，山西 大 同 ０７ ０ ； １山 ３ ０９ ２ 浙 江师 范大 学化 学 与生命科 学学院 ，浙 江金 华 ３ １０） ． ２ ０４
约 Baidu Nhomakorabea０ 种 ， ０余 我国约有 ８ ５ 种 ８ 组 ５ 亚种 ， 该属植
物产 于全 国各地 ， 主要 集 中于西 南地 区ｌ 金丝 桃 但 ｌ １ ． 属 植 物 中含 多 种 药 用 成 分 ， 金 丝 桃 素 类 、 皮 如 槲 苷 、金丝 桃 苷 、芦 丁 、黄烷 酮 醇 类 、黄 酮 类 、咄 酮 类 、 豆素类 和间苯 三酚衍 生物 （ 叶金 丝桃素 ） ． 香 贯 等阁 近年来 的研究 表 明 ，金丝 桃属 植 物所 含金 丝桃 素类 化 合物 具有 抗抑 郁 、 制 中枢 神经 、抗 病毒 和 增强 抑 免 疫功 能 ， 具有 显著 的抗 Ｄ Ａ、Ｒ Ａ病 毒 作用 ， 并 Ｎ Ｎ 可 用 于艾 滋 病 的 治 疗 ，从 而 引 起 医 药 界 的重 视 ［ ３ １ ． 本 课 题 组 曾发 现 金 丝桃 属 植 物 的 叶表 皮 微 形 态 『 ４ 】 、 叶 内部 的分 泌 结 构类 型 、 布 密 度 、大 小 和位 置［ 分 ３ １ 以及红 外 光谱 图［ Ｓ ｑ 在 较 大差 异 ， 用作 金 丝 桃 等存 可 植物 的鉴别 指标 ， 然而 用分 子 生物学 手 段鉴 别 金丝
（ ｐ ｒ ｒｔｍ Ｌ 、小 连 翘 Ｈ． ｅ ｔｍ Ｔ ｕ ｂｅ ｒ Ｈ．ｅ ｏａｕ １ ｆ ｅ ｃｕ ｈ ｎ ｘＭｕ— ｒ ｒｙ、元 宝 草 ｓｍ ｓｎｉＨ ｎ ｅ、浆 果 金 丝 桃 （ ． ａ） ａ ｐ ｏ ｉ ａ ｃ） Ｈ
ａ ｄｏａｍｕ ｉｎ． ｎ ｒｓｅ ｍ Ｌｎ ） １ ． 总 Ｄ Ａ的提 取 ２ Ｎ
摘 要： 目的 探 究金 丝 桃 属 基 因组 Ｄ Ａ 的提 取 方 法及 用 Ｒ Ｐ Ｎ Ａ Ｄ分 析 的技 术 体 系． 法 采 用 改 良的低 ｐ 方 Ｈ值 高
盐 法 获 得 高 质 量 的金 丝 桃 属 植 物 总 Ｄ Ａ， ８ Ｎ 从 ０个 １一 ｅ 随机 引物 中 筛选 出 ｌ ０ｍｒ ２个 ， ４种金 丝桃 属 植 物 的 基 因组 对
关键 词 ： 丝桃 属 金
Ｄ Ａ提 取 Ｎ
Ｒ Ｐ 分析 ＡＤ
中 图分 类 号 ： ９ ３ Ｑ ４
文 献 标识 码 ： Ａ
金 丝 桃 属 （ ｐ ｒ ｕ ．隶 属 藤 黄 科 ，全 世 界 Ｈｙｅｉ ｍ Ｌ ） ｃ
用 于 Ｄ Ａ提 取 的 叶 片采 自浙 江师 范大 学 学校 Ｎ 绿化 科 苗 圃栽 培 的金 丝桃 属植 物 ， 别是 贯 叶连翘 分
Ｄ Ａ进 行 Ｒ Ｐ Ｎ Ａ Ｄ分析 ． 结果 共 产生 了 ３ ０条 Ｄ Ａ片段 ，其 中 ２ ８条谱 带具 有遗 传 多态性 ，约 占 ６ ． 蛄论 ３ Ｎ １ ６１ ％．
Ｒ Ｐ 分析 揭 示 ４种 金 丝桃 属 植 物 之 间 的 Ｄ Ａ指 纹 存 在 明显 的种 间差 异 ，能 为金 丝桃 属 植 物 的 分 类鉴 定提 供 遗 传 ＡＤ Ｎ
沉 淀蛋 白质 ， ４℃ １ ０ ｍ ｎ离 心 １～ ０ｍｉ， ２０ ０ｒ ｉ ／ ０ ２ ｎ 弃
的 Ｄ Ａ分 子 遗 传标 记 技 术 ，已被 广泛 地 应 用 在 药 Ｎ 用 植 物分 类 鉴别 中【 ． 本研 究 试 图以金 丝 桃 属 的 ４ 种 植 物 为 材 料 种 ，发 展 适 于 金 丝 桃 属 植 物 的 总
新 鲜植 物 叶 片约 ０４ｇ 用 ７ ％ 酒 精洗 ６ｓ ． ， ０ ，用蒸 馏
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研成粉末 ， 将粉末转至 １ Ｌ ． ｍ 离心管中； ５ ③加入 １
ｍ Ｌ预 冷 的提取 介质 （ ０ ｍ ｏ／ Ｈ ４８Ｎ Ａ ，５ １ ｍ ｌ ｐ ． ａ ｃ ０ ０ Ｌ
沉淀； ⑦上清液加入 ０ 倍体 积的 一 ０℃预冷的异 ． ６ ２ 丙醇 ． 和混 匀后 于 ４℃沉淀 核 酸 ２ｈ ⑧４ １ ０ 温 ； ℃ ２００
ｒ ｉ ／ ｎ离心 ２ ｉ， ｍ ０ｍ ｎ 收集沉淀； ⑨用 ７０ 无菌蒸 ５
馏水溶解沉淀 ， 并于 ５ ０℃ 水浴助溶； ２００ ⑩４ｏ １ ０ Ｃ ｒ ｎ离心 １ ｎ 弃 不溶 物 ． 清液 中加入 ０６倍 ／ ｍｉ ０ｍｉ， 上 ． 体 积异 丙 醇 ，１１ ／０体积 ３ｍ ｌ ａ ｅ Ｈ ５２， 匀 ｏ／ Ｎ Ａ （ ．） 混 Ｌ ｐ
桃属 植物 至今 未见报 道 ． 随 机扩 增 多 态性 Ｄ Ａ （ ｎ ｏ ｍ ｌ ｅ ｏｙ Ｎ ｒ ｄ ｍ ａ ｐｉ ｄｐ ｌ ａ ｉ ｆ — ｍ ｒｈｃＤ Ａ，Ｒ Ｄ ｏｐ ｉ Ｎ ＡＰ １是 ２ ０世 纪 ９ Ｏ年 代 发展 起 来
采用改 良的低 ｐ Ｈ值高盐 法 ， 步骤如下： ①取
第２ ６卷第 ４期 ２１ ０ ０年 ８月
文 章 编 号 ： ６ ４ ０ ７ （０ ０ ０ — ｏ ４ ｏ １７ — ８４ ２ １ ）４ ０ ６ 一 ４
山西大 同大学学报（ 自然科学版）
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４种 金 丝桃 属 植 物 基 因组 ＤＮ Ａ提 取及 Ｒ Ｄ分 析 ＡＰ
周 凤 ，张 东旭 ，吕洪飞
（． 西大 同大学农 学与 生命 科 学 学院 ，山西 大 同 ０７ ０ ； １山 ３ ０９ ２ 浙 江师 范大 学化 学 与生命科 学学院 ，浙 江金 华 ３ １０） ． ２ ０４
约 Baidu Nhomakorabea０ 种 ， ０余 我国约有 ８ ５ 种 ８ 组 ５ 亚种 ， 该属植
物产 于全 国各地 ， 主要 集 中于西 南地 区ｌ 金丝 桃 但 ｌ １ ． 属 植 物 中含 多 种 药 用 成 分 ， 金 丝 桃 素 类 、 皮 如 槲 苷 、金丝 桃 苷 、芦 丁 、黄烷 酮 醇 类 、黄 酮 类 、咄 酮 类 、 豆素类 和间苯 三酚衍 生物 （ 叶金 丝桃素 ） ． 香 贯 等阁 近年来 的研究 表 明 ，金丝 桃属 植 物所 含金 丝桃 素类 化 合物 具有 抗抑 郁 、 制 中枢 神经 、抗 病毒 和 增强 抑 免 疫功 能 ， 具有 显著 的抗 Ｄ Ａ、Ｒ Ａ病 毒 作用 ， 并 Ｎ Ｎ 可 用 于艾 滋 病 的 治 疗 ，从 而 引 起 医 药 界 的重 视 ［ ３ １ ． 本 课 题 组 曾发 现 金 丝桃 属 植 物 的 叶表 皮 微 形 态 『 ４ 】 、 叶 内部 的分 泌 结 构类 型 、 布 密 度 、大 小 和位 置［ 分 ３ １ 以及红 外 光谱 图［ Ｓ ｑ 在 较 大差 异 ， 用作 金 丝 桃 等存 可 植物 的鉴别 指标 ， 然而 用分 子 生物学 手 段鉴 别 金丝
（ ｐ ｒ ｒｔｍ Ｌ 、小 连 翘 Ｈ． ｅ ｔｍ Ｔ ｕ ｂｅ ｒ Ｈ．ｅ ｏａｕ １ ｆ ｅ ｃｕ ｈ ｎ ｘＭｕ— ｒ ｒｙ、元 宝 草 ｓｍ ｓｎｉＨ ｎ ｅ、浆 果 金 丝 桃 （ ． ａ） ａ ｐ ｏ ｉ ａ ｃ） Ｈ
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摘 要： 目的 探 究金 丝 桃 属 基 因组 Ｄ Ａ 的提 取 方 法及 用 Ｒ Ｐ Ｎ Ａ Ｄ分 析 的技 术 体 系． 法 采 用 改 良的低 ｐ 方 Ｈ值 高
盐 法 获 得 高 质 量 的金 丝 桃 属 植 物 总 Ｄ Ａ， ８ Ｎ 从 ０个 １一 ｅ 随机 引物 中 筛选 出 ｌ ０ｍｒ ２个 ， ４种金 丝桃 属 植 物 的 基 因组 对