熊果苷分离纯化研究

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倍。研究者发现熊果苷作为酪氨酸酶的抑制剂，能阻断多巴以及多巴醌的合成，从而有效地抑制黑色素的生成，具有美白作用，且对皮肤没有刺激性，毒副作
Ｒ．２型旋转蒸发器（亚荣生化仪器）ＨＥ５Ａ上海；ＳＢ１Ｉ一１型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）ｅａ２ｐ计（；Ｄｌ３０Ｈｔ上海第三分析仪器厂）一；Ｓ８大孔树脂（津市光复精细化工研究所）高效液相：天；
ＬＡＩＮＧｎ－ａ，ｈｏｘａｇＰＮＧＺｎ－ｎＺＪｇｊｎＨＥＳａ－ｉｎ，Ａｏｇｗｅ，ＨＯＵｑａｉｕＹｕｕｎ
（ｏｌｅｆｉｃｎｅｎｅｈｏｏｙＧｕｎｘＵｉｒｔ，ｎｉ３０５Ｃｉ）ＣｌｇｆＳｉｃｄＴｃｎｌ，ａｇｉｎｖｓｙＮａｎｎ５００，ｈｎｅｏＬｅｅａｇｅｉｇａ
Ａｍｏｇｔｅｅａｎｄａｓｒｅｔｒｓｎ，ｅＳ８ｒｓｓｆｕｄｔｅｔｅｂｓｎ．ｅｃｎｉｏｓｏｅａａｉｎａｄｐｒｃｔｎｏ－ｒｕｉｎｘｍｉｅｂｏｂｎｅｉｓｔ－ｉｗａｎｏｂｔｏｅＴｏｄｔｎｆｓｐｒｔｕｉａｉｆａａｂｔｈｈｅｎｏｈｅｈｉｏｎｉｆｏｎｕｉｇＳ８ｒｓｒｐｉｚｄａｄｔｅｂｓｐｖｌｅｏａｌｓａｓｒｔｎｔ，ｏｄｎｍｏｔｏｅｓｍｐｅｄｔｅｆｗｔｆｗｔｒｓ－ｅｉｗｅｅｏｔｎｎｍｉｔＨａｆｓｍｐｅ，ｂｏｉｍｅｌａｉｇａｕｆｔａｌｓａｏｒｅｏａｅｅｎｈｅｕｐｏｉｎｈｎｈｌａ
＝百度文库
３１ｌ，碘缸中显色。熊果苷Ｒ值为００．：：ｌｆ．，氢醌Ｒ８ｆ
值０９．。
２４麦芽糖含量测定的方法：取５０ｇ．０Ｌ待测液，加入７０ｇＮＳ５ＬＤ，沸水中精确煮５ｎ，准确定容到ｌｍｉ５
ｍＬ，５０ｍ下测定０２ｎＤ值。
３度振荡ｌ，０分别从各瓶中取液０１Ｌ置于Ｅｈ．５ｍＰ管中，加入甲醇０，．ｍＬ静置ｌ，２０ｍｉ４１００ｒｎ离心５ｎｈ／，ｍｉ
实验结果亦是如此，麦芽糖和熊果苷的洗脱峰都很稳
定，而氢醌的洗脱峰随ｐ的变化而有较大改变。从Ｈ
离子，极性增加到与熊果苷接近，不利于分离；ｐ低Ｈ
值时，对苯二酚在溶液中以分子态存在，在分子状态下对苯二酚极性小于熊果苷，从而易于树脂吸附分离。
２．静态洗脱率：上述己静态吸附熊果苷的树脂，．２５将吸干表面水分，分别精确加入３％乙醇２，恒温００ｍＬ
Ａｂｔｃ：ｈｂｏｐｉｎｃａｃｒｔｆｃａｕｉｐｏｕｅｙＡｐ￣ｉｕｒｚｅａｄｉｅａａｏｄｐｒｃｔｎｗｅｔｄｅ．ｓａｔＴｅａｓｒｔｈｒｔｉｉｏ－ｒｔｒｄｃｌｓｅｌｓｏｙａｎｓｓｐｒｔｎａｕｉａｏｒｓｉｒｏａｅｓｃｔｂｎＪｂｌｔｉｎｉｆｉｅｕｄ
摘要：研究了由米曲霉生物转化生成ａ熊果苷的吸附特性及其分离纯化。．从所用的几种大孔树脂中筛选出了一种分离效果较好的树脂Ｓ８－，并对Ｓ８离方法进行了优化。结果表明：Ｓ８分离ａ熊果苷的优化条件为样品ｐ＝，吸附ｌ，上样量０ｍ－分－．Ｈｌｈ．￣ｇ树脂，以２蒸馏水－ＹＡＬ，流速３ＢｈＶ／。在此条件下，可得到纯度为９％的熊果苷。９
取１Ｌ高效液相检测熊果苷含量。０ｕ
３结果与讨论３１大孔树脂对熊果苷的吸附率和洗脱率．不同大孔树脂对熊果苷的吸附率和洗脱率不同，考察了几种不同树脂对其的吸附和洗脱情况，见表ｌ。
表１大孔树脂静态考察单位：ｍｇｍＬ／
ＳＤ一０Ｐ１Ａ检测器、Ｌ —ＯＴ泵（ＨＩＣｌＡＳＭＡＤＵ）Ｚ。
用小，具有显著抑制酪氨酸酶活性的作用，是一种新
兴的无刺激、无过敏和配伍性强的天然美白活性物质
，
Ｉ试剂．２甲醇（市四友生物技术医药技术有限公司）天津；９５％乙醇（广东光华化学厂）；乙酸乙酯（市科龙化成都工试剂厂）；乙酸（广东汕头市西陇化工厂）：硅胶Ｇ青（岛海洋化工有限公司）ＭＣ国药集团化学试剂有限；Ｃ（
２试验方法２１熊果苷的生物转化．
化性质的不同而不同，本文对各种大孔树脂对熊果苷
的吸附及解吸特性作了重点考察，优选出了最适合熊果苷分离的方法。１试验仪器、材料与试剂
收稿日期：２０．６２０７０ — ３
熊果苷由曲霉转化氢醌和麦芽糖合成，米得到的发酵液中熊果苷含量为１３５ｒ。发酵液浓缩１．５ｃ３ｇ０倍
Ｋｅｒｓａａｂｔ；ｕｉｃｔｎｍａｒｐｒｕｓｎＨＰＣｙｗｏｄ：－ｒｕｉｐｒａｉ；ｃｏｏｏｓｒｉ；Ｌｎｉｆｏｅ
ａ熊果苷属于氢醌苷类化合物，化学名称为４羟一一
１１主要仪器．
基苯一．Ｄ吡喃葡萄糖苷，其美白活性是Ｂ熊果苷的十．
现代食品科技
ＭｏｅｎＦｏｃｅｃｎｅｈｏｏｙｄｒｏｄＳｉｎｅｄＴｃｎｌｇａ
２０，ｏ．３Ｎ．０７Ｖｉ，ｏ１２０
熊果苷分离纯化研究
贺绍祥，梁静娟，庞宗文，周玉娟
（广西大学生命科学与技术学院，广西南宁５００）０５３
表２样品ｐ值对Ｓ８树脂吸附的影响Ｈ－单位：ｍＬ
Ｔａｂ２Ｅｆｅｔｏａｐｌ．ｆｃｆｓｍｅｐＨｖｕｅｎＳ－ｅｉａｄｓｒｔｏ￣ｓｏ８ｒｓｎｏｉｎｐ
ｔ１３
。
（）层层析方法：展开剂为乙酸乙酯：２薄乙酸：水
通讯作者：贺绍祥（９２）１８一，男，硕士研究生，从事微生物药物研究工作
６６
现代食品科技
ＭｏｅｎＦｏｃｃｎｅｈｏｏｙｄｒｏｄＳ￣ｎｅｄＴｃｎｌｇａ
２０，ｏ．，。００７Ｖ１３Ｎｏ１２
２３熊果苷的鉴定方法：＿（）１高效液相方法：色谱柱Ｃ１８柱，流动相为甲醇：水＝５９，柱温３：５０℃，流速ｌ／ｎｍｉ，检测波长２０ｍＬ８
Ｔａｂ．Ａｂｏｐｔｏｃｐａｉｙｆｒｓｎ１ｓｒｉｎａｃｔｏｅｉ
上表可以看出在ｐ为ｌ时熊果苷和氢醌、麦芽糖分Ｈ
离效果最好，确定调节发酵液ｐＨ为ｌ时上样。３．吸附流量对Ｓ８脂吸附的影响．２２一树当洗脱流速为４Ｂａ熊果苷未检出，Ｖｆ时，而对苯二酚则开始出现不同程度的泄漏，因此对苯二酚的穿透程度决定了树脂吸附处理量。综合考虑处理效果及处理时间，确定洗脱流速为３Ｂ／。Ｖｈ３＿洗脱剂对Ｓ８树脂吸附熊果苷的影响．３２一取活化备用的Ｓ８一大孔树脂２５ｇ装（占柱体积约５）发酵液调ｐ０ｍＬ，Ｈ到ｌ后上样５ｍＬ静止吸附ｌ，ｈ后用不同的洗脱剂ｆ、３水０％乙醇、６０％乙醇），洗脱洗脱速度为３Ｂ／，每１Ｖｈ０ｍＬ分瓶收集。并对各瓶收集液用２３．．、２４方法检测。结果如下表３。
２５各种大孔吸附树脂对熊果苷的吸附情况考察．２５１静态吸附率：取经过预处理的大孔吸附树脂．．
ＮＡ、Ｓ８Ｋ一、Ｘ一、ＡＢ８各１５一５ｇ置锥形瓶，各加入上
面所制备的发酵液５，恒温３０ｍＬ０度振荡４ｈ，分别从各瓶中取液０１Ｌ置于Ｅ．ｍ５Ｐ管中，加入甲醇０．４ｍＬ，静置ｌ，１００ｒｎ离心５ｍｉ，取ｌＬ高ｈ２０ｍｉ／ｎ０ｕ效液相检测。Ｓ８树脂吸附的原理是以范德华力为基础的分子一间吸附。在高ｐ值下对苯二酚发生解离，带有氧负Ｈ
ｅｕｎｒ，，０２ｍｇｇＲｅｉ，ｄ３ＢＶ／，ｅｐｃｉｅｙｕｄｒｉｅｐｒｙｏａａｂｔａｈｄ９ｌｅｔｗｅｅｌｌｈ．／ｓｎａｎｈｒｓｅｔｌ，ｖｎｅｃｔｕｉｆ・ｒｕｉｒｃｅ９％、ｗｈｈｈｔｎｅ
ｎｍ
一步优化。３Ｓ８分离纯化工艺条件的优化．一２３．发酵液ｐ．１２Ｈ值对Ｓ８树脂吸附的影响一取活化备用的Ｓ８一大孔树脂２装柱（占柱体积５ｇ越５）０ｍＬ，发酵液调ｐＨ值分别为ｌ．、３原始ｐ、１５和Ｈ值４５．，各上样５ｍＬ，静止吸附ｌｈ后用水洗脱，洗脱速度为２Ｂ／，每１Ｖｈ０ｍＬ分瓶收集。并对各瓶收集液用２３．＿、２４方法检测。结果见表２。
公司）。
化妆品中熊果苷推荐用量为１５％～％。
本实验室利用米曲霉生物转化氢醌和麦芽糖得到
ａ熊果苷。但由于发酵液中大量多糖的干扰，近年对－
熊果苷的分离纯化方法均不适合从发酵液分离熊果苷，而且各种分离方法成本通常比较高，不适合工业化，因此研究出一种合适、价廉的纯化方法势在必行。大孔吸附树脂为一种有机高聚吸附剂，具有选择性吸附有机化合物的能力，对多糖基本不予吸附，各种树脂的吸附能力及其解吸、纯化条件参数因化合物的理
备用。
２２树脂的预处理．取大孔树脂ＮＫＡ、Ｓ８一、Ｘ一、ＡＢ８蒸馏水冲５一用
洗，然后以９５％乙醇浸泡不少于２，装柱，９４ｈ５％
乙醇洗至流出液与水１：２混合不出现白色浑浊为止，再以蒸馏水洗至无醇味，备用。
关键词：ａ熊果苷；纯化；大孔树脂；高效液相．中图分类号：Ｑ３．；文献标识码：Ａ：文章篇号：７．０８２０）００６．３９９９９ｌ３９７（０７１．０６０６
Ｓｕｙ０ｈｅａａｏｎｕｉｃｔｎ０】ＡｒｕｉｔｄｎｔｅＳｐｒｔｎａｄＰｒｆａｉｆ．ｉｉ０【ｂｔ．ｎ